1,5-二咖啡酰奎宁酸对MPP^+所致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-dicaffeoylquinic acid,1,5-diCQA)对多巴胺能神经元的保护作用及其可能的机制。方法采用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞作为帕金森病的体外模型,实验分为正常对照组、MPP+组和1,5-diCQA预处理组,根据1,5-diCQA预处理的浓度,将后者又分为10、20、50、100μmol/L 4组。用MTT法测定各组细胞存活率,酶标仪检测细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,RT-PCR法检测细胞突触核蛋白(α-synuclein)的mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-synuclein蛋白表达水平。结果 MPP+(250μmol/L)处理PC12细胞24 h后,与正常对照组相比,细胞存活率下降,ROS生成增多,GSH耗竭;不同浓度的1,5-diCQA预处理可以减轻MPP+导致的细胞损伤,且在一定范围内具有量-效关系;50μmol/L的1,5-diCQA预处理可以显著抑制MPP+诱导的α-synuclein转录和翻译水平的增加。结论 1,5-diCQA对MPP+诱导的PC12细胞氧化应激损伤具有浓度依赖性的抑制作用,并抑制α-synuclein的过表达,提示1,5-diCQA对帕金森病细胞模型具有保护作用。

HPLC法测定贡菊中1,5-二咖啡酰奎宁酸含量

目的:建立贡菊中1,5-二咖啡酰奎宁酸(IBE-5)的HPLC测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱条件为Scienhome C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-5%醋酸(5∶20∶75),流速1.0mL/min,柱温25℃,检测波长327nm。结果:IBE-5在6.25～200μg/mL之间浓度与峰面积呈现良好的线性关系,回归方程为Y=3784.5X-35.21,r=0.9996,平均加样回收率为103.71%,RSD为2.13%(n=5),测定结果贡菊中IBE-5的平均含量为0.54%。结论:该测定方法简便、准确、可靠,可用于测定贡菊中IBE-5的含量。

HPLC法同时测定神农茶颗粒中的夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和4,5-二咖啡酰奎宁酸

目的：建立同时测定神农茶颗粒中夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯、4,5-二咖啡酰奎宁酸4个成分的高效液相色谱测定方法。方法：采用Hypersil C18色谱柱（200 mm ×4.6 mm,5μm）；以乙腈-0.025 mol·L-1磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量：1.3 ml·min-1,检测波长：270 nm（夏佛塔苷和异夏佛塔苷）、208 nm（去氧地胆草内酯）、327 nm（4,5-二咖啡酰奎宁酸）,柱温为室温。结果：夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和4,5-二咖啡酰奎宁酸分别在5.850~117.000,4.650~93.000,4.160~83.200,5.470~109.400μg · ml-1范围内线性良好, r 值均大于0.999,平均加样回收率分别为97.70%、96.87%、97.53%、99.29%,RSD分别为1.40%、1.13%、1.69%、1.01%（n=6）。结论：该方法简便,结果准确,可用于神农茶颗粒的含量测定。

HPLC测定野烟叶中的1,5-二咖啡酰奎宁酸

目的采用串联四极杆飞行时间质谱鉴别苗药野烟叶的指标成分,并用HPLC法测定野烟叶中指标成分1,5-二咖啡酰奎宁酸(CQA)的含量。方法采用Inertsil ODS-SP色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%甲酸(14:86),检测波长325 nm,流速0.7 mL·min^(-1),柱温30℃。结果CQA的线性范围为0.061~3.882μg,加样回收率为93.14%,RSD=1.74%。结论所用方法简便、准确、可靠、可用于野烟叶的质量控制。

HPLC法测定灯盏生脉胶囊中4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的含量

目的：建立HPLC法测定灯盏生脉胶囊中4，5-二-0-咖啡酰奎宁酸的含量测定方法。方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0．1％三氟乙酸（20：80）为流动相；检测波长为327nm。理论塔板数按4，5-二-O-咖啡酰奎宁酸峰计算应不低于8000。结果：4，5-二-O-咖啡酰奎宁酸进样量在0．02～0．24μg范围内呈良好线性关系（r=0．9999）。样品平均回收率为99．45％，RSD=2．7％。结论：该法操作简便，结果准确，重现性好，可用于控制灯盏生脉胶囊的质量。

HPLC法测定心脑络通颗粒中野黄芩苷和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸

目的建立HPLC法同时测定心脑络通颗粒中野黄芩苷和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的方法。方法色谱柱为岛津InterstilODS柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸(25:75),体积流量1.0mL/min,检测波长335nm,柱温37℃,进样量10μL。结果 2种成分均能达到基线分离,重现好,且呈现较好的线性关系;加样回收率分别为97.1%、99.8%,RSD值分别为0.66%、0.82%。结论该方法准确、灵敏、可靠,重复性好,可用于心脑络通颗粒的快速检测。

有柄石韦中二氢黄酮类和咖啡酰奎宁酸类5个成分的同时测定

目的:建立同时测定有柄石韦中1个二氢黄酮类成分(圣草酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷)及4个咖啡酰奎宁酸类成分(绿原酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,4-二咖啡酰奎宁酸、1,2-二咖啡酰-环戊基-3-醇)含量的高效液相色谱法。方法:采用SHIMADZU C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长为330 nm,柱温30℃。结果:绿原酸、圣草酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,4-二咖啡酰奎宁酸、1,2-二咖啡酰-环戊基-3-醇进样量分别在0.1066~2.6655μg(r=1.0000)、0.1602~4.0060μg(r=1.0000)、0.0065~0.1625μg(r=1.0000)、0.0069~0.1715μg(r=1.0000)和0.0096~0.2390μg(r=1.0000)范围内与峰面积呈现良好的线性关系;精密度(RSD≤0.7%)、稳定性(RSD≤0.4%)良好;平均回收率(n=6)分别为101.5%、100.4%、99.7%、97.3%和101.2%,RSD分别为0.21%、0.52%、0.57%、0.92%和1.0%;4批样品中绿原酸、圣草酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,4-二咖啡酰奎宁酸和1,2-二咖啡酰-环戊基-3-醇含量范围分别为2.186~7.405、7.694~10.790、0.352~0.511、0.332~0.512和0.437~0.763 mg·g^(-1)。结论:该方法简便易行,重复性好,可作为有柄石韦药材的质量控制指标。

HPLC-DAD法同时测定清开灵注射液中7个酚酸类成分

目的:建立同时测定清开灵注射液中7个酚酸类成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸)含量的方法。方法:采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速为0.5 mL·min-1,检测波长327 nm,柱温30℃。结果:80min内7个待测组分分离度良好,在各自的检测范围内与峰面积呈良好的线性,其相关系数均大于0.9998,加样回收率为96.1%～103.9%。应用所建立的方法同时测定了清开灵注射液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸共7个成分的含量,并对5个不同批次的注射液进行了含量测定,其结果有一定的差异。结论:本法可为清开灵注射液中酚酸类成分的质量控制提供参考。

基于多元统计分析和多指标评价假东风草和东风草的质量

目的基于多元统计分析和多指标评价假东风草和东风草药材的质量。方法采用2020年版《中国药典》方法测定水分、灰分、浸出物,紫外-可见光光度法测定总黄酮含量,HPLC法测定3,4-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸的含量,聚类分析和主成分分析进行数据处理。结果9批假东风草和东风草(大花种,非标品种)水分平均值分别为9.21%、8.00%,总灰分平均值分别为6.50%、8.90%,酸不溶性灰分平均值分别为0.87%、1.21%,浸出物平均值分别为22.21%、13.56%,总黄酮平均质量分数分别为126.16、82.65 mg/g,3,4-二咖啡酰奎宁酸平均质量分数分别为7.80、3.52 mg/g,3,5-二咖啡酰奎宁酸平均质量分数分别为4.18、4.43 mg/g。以水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、总黄酮含量、3,4-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸含量为指标时,不能将假东风草和东风草(大花种,非标品种)明显区分开。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于假东风草和东风草的质量控制。

牛蒡根提取物指纹图谱研究

目的研究不同产地牛蒡根药材的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,为其质量控制提供依据。方法采用HPLC法测定湖北、安徽、江西、辽宁、山东等9个产地的14批市售牛蒡根药材,色谱条件为安捷伦ZORBAX SB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,乙腈-0.04%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长330 nm,流速 1.0 mL·min^(-1),柱温35℃,检测时间60 min。结果牛蒡根提取物中所含成分的各色谱峰均得到了有效分离,在测定的14批药材中,以3,5-二咖啡酰奎宁酸对照品为参照峰建立了牛蒡根的HPLC指纹图谱共有模式图,不同产地的样品相似度均在0.9以上,有11个共有峰,确定为特征指纹峰。结论该HPLC 指纹图谱具有可靠性,可为进一步研究制订牛蒡根的质量标准提供依据。

波长切换HPLC同时测定鼻通丸中6种成分含量

目的建立波长切换高效液相色谱(HPLC)同时测定鼻通丸中的氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸的方法。方法采用Agilent TC-C18(4.6 mm×250mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速0.9 mL/min,柱温30℃,进样量为10μL。结果氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸6个成分质量浓度分别在2.850~57.00μg/mL(r=0.9991),2.480~49.60μg/mL(r=0.9995),2.120~42.40μg/mL(r=0.9999),2.740~54.80μg/mL(r=0.9998),2.380~47.60μg/mL(r=0.9996),3.060~61.20μg/mL(r=0.9999)范围内与峰面积呈良好线性关系;6个组分的回收率分别为98.77%,97.53%,96.98%,99.29%,98.85%,100.03%,相应RSD分别为1.12%,1.33%,0.80%,1.19%,1.40%,0.95%。供试品溶液在室温条件下12 h内稳定,RSD≤1.33%。结论所建立的波长切换HPLC同时测定鼻通丸中氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸的方法,可为鼻通丸的质量控制提供依据。

灯盏花化妆品原料的抗氧化活性及质量控制研究

对灯盏花化妆品原料(EBCI)的抗氧化活性进行研究,同时建立其中两种指标成分的含量测定方法。采用DPPH、ABTS、·OH清除法考察EBCI的自由基清除活性,同时用H_(2)O_(2)诱导HHF-1细胞氧化损伤模型考察EBCI对细胞存活率和细胞中谷胱甘肽(GSH)含量的影响;建立了HPLC法同时测定EBCI中野黄芩苷和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的含量测定方法。结果显示EBCI具有DPPH、ABTS和·OH自由基清除能力,IC_(50)分别为46.93、91.36和89.37μg/mL,在4、20μg/mL质量浓度下能显著提高氧化损伤HFF-1细胞的存活率且能显著提高细胞中GSH含量。野黄芩苷和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸分别在0.0093~0.3722、0.0085~0.3409 mg/mL范围内呈现良好线性关系,加样回收率分别为103.47%、103.38%(RSD均小于2%)。结果表明EBCI具有抗氧化作用;所建立的含量测定方法简便、稳定、准确可靠,可用于EBCI质量控制。

UPLC法同时测定连花清瘟胶囊中5种活性成分的含量

目的：建立同时测定连花清瘟胶囊中绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷A、3，4-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸含量的方法。方法：采用超高效液相色谱法。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱，流动相为甲醇．乙腈-0．1％磷酸溶液（梯度洗脱），流速为0．4ml／min，柱温为40℃，检测波长为237nm，进样量为5μl。结果：绿原酸、隐绿原酸、连翘酯苷A、3，4-二咖啡酰奎宁酸、4，5-二咖啡酰奎宁酸检测质量浓度分别在0．035-0．7、0．011～0．21、0．042-0．83、0．031～0．61、0．009-0．18mg／ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0．9999、0．9999、0．9997、0．9999、0．9998）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤2．06％；平均加样回收率分别为97．2％、98．2％、98．1％、97．5％、96．5％，RSD分别为1．62％、2．26％、2．22％、2．05％、1．29％（n=6）。结论：该方法简单、快速、准确，可用于快速评价连花清瘟胶囊的质量。

HPLC-DAD法测定不同产地欧亚旋覆花中7种活性成分

目的：建立HPLC-DAD法同时测定欧亚旋覆花中绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、芦丁、菠叶素、槲皮素、木犀草素、6-甲氧基木犀草素。方法 Diamonsil C18色谱柱（200 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈–0.4%枸橼酸水溶液，梯度洗脱；体积流量1 mL/min；柱温30℃；检测波长360 nm；进样量：10μL。结果绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、芦丁、菠叶素、槲皮素、木犀草素、6-甲氧基木犀草素分别在0.118～2.360、0.261～5.220、0.030～0.600、0.052～0.140、0.081～0.162、0.041～0.820、0.030～0.600μg与峰面积呈良好的线性关系。平均回收率分别为97.22%、97.43%、97.52%、99.48%、98.87%、98.76%、98.39%，RSD 值分别为0.92%、1.16%、1.50%、1.56%、0.79%、0.76%、1.62%（n＝6）。结论该方法准确、简便、重复性好，可用于欧亚旋覆花药材中成分的质量控制。

Box-Behnken设计结合通量衰减探索热毒宁注射液醇沉中间体的纳滤分离规律

该文采用Box-Behnken设计结合通量衰减技术,探索热毒宁注射液醇沉中间体的纳滤分离规律,明确高浓度乙醇溶液环境的纳滤分离适用性。结果表明,建立的纳滤分离数学模型成立,可以用于分析考察因素与成分分离行为的内在关系。其中,纳滤膜相对截留分子质量、pH对绿原酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的分离行为影响分别符合孔径筛分和电荷效应原理,跨膜压力差带来的浓差极化效应降低成分截留率,乙醇引起膜面溶胀导致膜通量衰减、有效分离孔径下降,其中绿原酸和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸对pH和乙醇浓度的敏感度强于3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸。成分结构与纳滤分离因素存在一定相关性,且分离规律是电荷效应、孔径筛分、浓差极化、孔道位阻等多种效应综合的结果。

UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中热毒宁注射液13个潜在质量标志物及其药动学研究

目的基于中药质量标志物(qualitymarker,Q-Marker)概念,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法建立同时测定血浆中热毒宁注射液13个潜在Q-Marker含量的方法,并用于大鼠体内血药浓度测定及药动学研究,以证明其体外-体内传递过程的可测性。方法采用Waters AQUITY UPLC C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸水-乙腈梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min;柱温为35℃,自动进样器温度为4℃;进样量为2μL。以氯霉素为内标,采用电喷雾离子源(ESI),负离子源,多反应离子检测(multiple reaction monitoring,MRM)模式,同时定量血浆中13个Q-Marker(栀子苷、京尼平苷酸、京尼平龙胆双糖苷、山栀苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、裂环氧化马钱子苷、裂环马钱子酸、獐牙菜苷)含量。采用Phoenix WinNonlin8.1软件非房室模型计算药动学参数。结果13个化合物在检测范围内线性关系良好。大鼠血浆中内源性物质不干扰测定,该方法回收率、基质效应、精密度、准确度和稳定性均符合生物样品的测定要求。尾iv热毒宁注射液后在大鼠血浆中可检测到上述13个化合物,裂环马钱子酸在血浆中暴露量最大,栀子苷和绿原酸次之。各化合物在体内半衰期较短,消除速率快;表观分布容积提示所有化合物呈广泛组织分布。结论该方法可以同时定量血浆中热毒宁注射液的13个成分,证明了上述成分体外-体内传递过程的可测性;药动学研究表明上述成分还具有血浆-组织/靶器官传递性,可作为热毒宁注射液安全性和有效性评价的潜在Q-Marker。

清热解毒颗粒剂不同制备工艺下量值传递规律研究

目的:基于清热解毒颗粒剂指纹图谱和多组分含量测定,考察2种不同制备工艺下的量值传递情况。方法:建立清热解毒颗粒剂HPLC指纹图谱方法,标定30个共有峰,并对其中6个成分进行定量,通过比较2个厂家(湖南A厂和河南B厂)同一处方不同制法的样品、2种制法下的标准制剂及其中间体(制法Ⅰ和制法Ⅱ),以指纹图谱共有峰传递情况、多组分含量转移率计算、出膏率等为指标,分析清热解毒颗粒剂不同工艺造成的量值传递差异。结果:湖南A厂建立的对照指纹图谱明显峰信息更丰富、峰面积更高,多组分含量测定中主要体现在黄芩苷、栀子苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、龙胆苦苷的含量差异。标准制剂中采取制法Ⅰ的样品哈巴俄苷、黄芩苷、栀子苷转移率明显高于制法Ⅱ,连翘酯苷A和龙胆苦苷转移率稍高,4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸无显著差异。平均出膏率制法Ⅰ为17.9%,制法Ⅱ为11.3%。结论:阐明2种制法对不同药味的物质传递影响,为清热解毒颗粒剂采用不同工艺时的质量评价提供参考。

HPLC同时测定苍耳子中6个化学成分的含量

目的:用HPLC同时测定苍耳子中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸6个化学成分的含量。方法:采用Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min-1,检测波长254 nm,柱温35℃。结果:新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、噻嗪双酮苷、1,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸色谱峰分离良好。进样量分别在0.012～1.2、0.028～2.8、0.012～1.2、0.014～1.4、0.024～2.4、0.011～1.1μg范围内线性关系良好。平均回收率(n=6)分别为102.3%、96.4%、99.1%、103.1%、103.0%、103.4%,RSD分别为1.8%、1.1%、1.8%、1.5%、2.0%、1.9%。结论:建立的苍耳子HPLC含量测定方法可用于苍耳子的质量控制。

川东獐牙菜的化学成分研究

目的研究龙胆科植物川东獐牙菜Swertia davidi干燥全草的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、凝胶色谱等方法进行化学成分的分离纯化,通过理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果从川东獐牙菜全草70%乙醇提取物中分离得到16个化合物,分别鉴定为熊果醇(1)、齐墩果酸(2)、5-羧基-3,4-二氢-1H-2-苯并吡喃-1-酮(3)、3β,12β-二羟基-孕烷-16-烯-20-酮(4)、当药黄素(5)、日当药黄素(6)、异金雀花素(7)、6-去甲氧基-7-甲基茵陈色原酮(8)、3-乙酰氧基-28-羟基-12-烯-乌苏烷(9)、龙胆苦苷(10)、N-正二十五烷-2-羧基苯甲酰胺(11)、4-O-2-羟基-6-甲氧基苯乙酮苷(12)、槲皮素-3-O-β-D-木糖-(1→2)-β-D-半乳糖苷(13)、8-表金吉苷(14)、3,5-二咖啡酰奎宁酸(15)、2-甲基苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(16)。结论所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

炒制对苍耳子中6种主要成分含量的影响

目的研究炒制对苍耳子中6种主要成分含量的影响。方法采用Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸进行梯度洗脱,流速1 m L·min-1,柱温35℃,检测波长254 nm。结果苍耳子炒制后新绿原酸和隐绿原酸的含量明显升高;绿原酸、1,5-和4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量明显下降。结论酚酸类成分不稳定,苍耳子应炒至黄褐色为宜。