膳食5’-核苷酸对酒精性肝损伤大鼠肠道菌群的影响

目的:研究膳食5’-核苷酸对酒精性肝损伤大鼠肠道菌群的影响,并进一步探讨可能的作用机制。方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照组、酒精组、葡萄糖等热量对照组、普通饲料组、质量分数0.04%、0.16%5’-核苷酸干预组,连续饲养7周,测定大鼠体质量、脏体比、血清乙醇体积分数、血清转氨酶活力、血脂水平及总蛋白含量等相关指标;平板培养大鼠粪便中的乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌、肠球菌,计算大鼠粪便中各种细菌的菌落数。结果:膳食5’-核苷酸能够增加酒精引起的大鼠体质量降低,轻度抑制血清乙醇体积分数的升高,抑制酒精引起丙氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶活力和甘油三酯水平等升高(P<0.05),增加血清总蛋白、白蛋白及球蛋白含量(P<0.05);并能够增加肝体比,减少盲体比(P<0.05);膳食5’-核苷酸能够增加肠道乳酸杆菌数量,同时减少大肠杆菌及肠球菌的数量(P<0.05)。结论:膳食5’-核苷酸能够改善酒精引起的大鼠肝脏损伤,调节肠道菌群可能是其作用机制之一。

香菇中5'-核苷酸的高效液相色谱-质谱分析

采用高效液相色谱/质谱法,对香菇中5'-核苷酸进行了分析。在ODS柱上,以含0.05%磷酸的水-甲醇(90/10,V/V)为流动相进行了分离。以HPLC与LC/MS联合定性香菇中5'-核苷酸为5'-肌苷酸,5'-鸟苷酸,5'-尿苷酸和5'-腺苷酸。采用外标法定量,它们的标准加入回收率分别为100.4%、99.0%、97.8%、和97.2%,相对标准偏差分别为2.07%、2.18%、1.91%和2.76%,检出限分别为2.5、2.1、3.2、和3.5μg/ml。该方法准确可靠,简便易行。

啤酒酵母RNA降解产物5'-核苷酸的高效液相色谱分析

研究了高效液相色谱法同时测定啤酒酵母RNA降解产物4种5'-核苷酸的适宜条件。应用HypersilODS2色谱柱,在260 nm检测波长下,以0.08 mol/L KH2PO4缓冲溶液(pH2.5)作流动相,10 min内可完成CMP、UMP、AMP、GMP含量的同时测定,最小检测限分别为0.2 mg/L、0.2 mg/L、0.1 mg/L和0.3 mg/L,平均回收率分别为99.21%、100.39%、100.07%和99.88%,相对标准偏差(RSD)分别为2.27%、2.83%、2.05%和1.85%。

混合5’-核苷酸的分离与检测

以核酸酶P1酶解RNA产物为材料,对离子交换树脂分离混合5’-核苷酸的工艺条件进行研究,并通过建立的RP-HPLC检测方法鉴定单核苷酸分离效果。结果表明,阳离子交换树脂NH-1可使4种单核苷酸有效分离,洗脱顺序依次为UMP→GMP→CMP→AMP;最佳分离条件为:色谱柱径高比=1∶20,RNA酶解液上样浓度20g/L,吸附时间8h,洗脱流速0.5mL/min。确定RP-HPLC C18反相柱的色谱条件为:流动相KH2PO4-甲醇,在30mmol/L KH2PO4(pH 5.5)以及0.5mL/min流速条件下,按照KH2PO4∶甲醇=100∶0→97∶3,15min,97∶3→95∶5,1min进行梯度洗脱。通过外标法对混合单核苷酸的分离效果进行检测,证明增加吸附时间是改善分离效果的重要因素。

前列腺癌组织肝激酶B1,Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5 mRNA表达水平与临床病理特征和预后的相关性研究

目的研究前列腺癌患者癌组织中肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)及Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5(Rab guanine nucleotide exchage factor-5,Rab EX-5)mRNA表达及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测92例前列腺癌组织和80例良性前列腺增生组织中LKB1及RabEX-5 mRNA的表达,比较LKB1,RabEX-5 mRNA表达组间差异及与临床病理特征的关系。Pearson线性相关分析LKB1与RabEX-5 mRNA表达的相关性。Kaplan-Meier生存分析LKB1,RabEX-5 mRNA表达与前列腺癌患者生存预后的关系。多因素COX回归分析影响前列腺癌患者生存预后的危险因素。结果与前列腺增生组织相比,前列腺癌组织中RabEX-5 mRNA表达明显升高(1.311±0.374 vs 0.457±0.083),差异有统计学意义(t=20.758,P=0.000),而LKB1 mRNA表达显著降低(0.373±0.052 vs 1.234±0.268),差异有统计学意义(t=30.181,P=0.000)。LKB1,RabEX-5 mRNA表达与Gleason评分、骨转移、TNM分期有关(t=2.419~9.965,均P<0.05),与年龄、前列腺特异抗原(PSA)水平无关(t=0.379~1.453,均P>0.05)。前列腺癌组织中LKB1与RabEX-5 mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.402,P=0.000)。低LKB1表达组3年总体生存率低于高LKB1表达组(χ^(2)=55.605,P=0.000),高RabEX-5表达组3年总体生存率低于低RabEX-5表达组(χ^(2)=29.435,P=0.000)。多因素COX回归分析结果表明,Gleason评分≥7分(OR=2.671,P=0.018)、骨转移(OR=1.528,P=0.031)、TNM分期为Ⅲ期(OR=1.634,P=0.037),LKB1 mRNA低表达(OR=1.764,P=0.008)及RabEX-5 mRNA高表达(OR=2.587,P=0.000)是影响前列腺癌患者生存预后的危险因素(P<0.05)。结论前列腺癌组织中RabEX-5 mRNA表达升高,而LKB1 mRNA表达降低,二者共同参与前列腺癌的发生发展,有望成为评估前列腺癌患者预后的组织肿瘤标志物。

九州虫草5′-核苷酸的毛细管区带电泳分析

用超声波对九州虫草4个样品进行预处理,添加较高浓度的标准溶液,采用毛细管电泳法检测电泳图谱中各峰峰高、峰面积的变化,测定了各样品中的5′-核苷酸组分及含量。结果表明,在九州虫草的各部分中均可检测到高含量的鸟苷酸,其中以菌丝体的含量最高(0.90 mg/g),其他核苷酸只在菌丝体中检测到,分别为5-′UMP 0.46 mg/g,5-′GMP 0.90 mg/g,5-I′MP 0.98 mg/g,5-′XMP 1.19 mg/g。该方法快速简便,重现性好,能有效地测定样品中核苷酸类成分。

尿5′-核苷酸磷酸二酯酶的测定方法

目的 :建立一种测定尿 5 ` -核苷酸磷酸二酯酶 (5′- NPD)的新方法 ,试图为临床诊断提供一项检测早期肾损害的生化指标。方法 :以 5′- [5 -碘吲哚酚 - (3) ]胸腺嘧啶核苷酸铵盐作为检测尿 5′-核苷酸磷酸二酯酶的底物 ,在 p H9.0缓冲体系中进行酶促反应后 ,在波长 A5 80 nm下测定尿 5′- NPD的吸光度 (OD)值。结果 :该法重复性 :cv =1.98% ;尿5′- NPD酶活力与 OD值的线性关系 :Y=4.116 X+0 .0 2 76 ,r =0 .993.用该法分别检测 30例肾病患者和 5 0例正常人的尿 5′- NPD,肾病患者的尿 5′- NPD酶活力明显高于正常人 (P <0 .0 1)。结论 :提示尿 5′-

血清miR-122-5p、miR-618、miR-202联合检测对原发性肝癌的诊断价值分析

目的分析血清微小核糖核苷酸-122-5p(miR-122-5p)、微小核糖核苷酸-618(miR-618)、微小核糖核苷酸-202(miR-202)联合检测对原发性肝癌的诊断价值。方法选取应急总医院2022年1月~2023年1月收治的原发性肝癌患者118例纳入原发性肝癌组,另择同期120例良性肝脏疾病患者纳入良性组,120例健康体检者为健康对照组,回顾性收集临床资料。比较3组研究对象血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平,通过Pearson相关性分析分析血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平之间的相关性;以原发性肝癌组作为阳性组,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-122-5p、miR-618、miR-202单独及联合检测对原发性肝癌的诊断价值。结果原发性肝癌组血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平低于良性组和健康对照组,良性组低于健康对照组,差异有统计学意义(F=193.644、88.486、105.045,P<0.05)。年龄≥60岁、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、乙型肝炎病毒(HBV)感染、肿瘤数目多发的原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平更低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202间表达水平均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线结果显示,miR-122-5p、miR-618、miR-202单独及联合检测对原发性肝癌的预测价值分析曲线下面积(AUC)分别为0.839、0.814、0.807、0.932,灵敏度分别为85.59%、84.75%、79.66%、88.98%,特异度分别为75.00%、68.75%、70.00%、85.42%,联合检测均为最高。结论随着原发性肝癌发生及病情进展患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202表达水平降低,联合检测对原发性肝癌的诊断价值较高。

5′-核苷酸的合成方法比较

5′-核苷酸在农业、食品和医药行业有着广泛的用途。比较了目前5′-核苷酸的工业和实验室合成方法,包括化学合成法,微生物发酵法,酶解法和酶催化法。

不锈钢微滤膜在5′-核苷酸生产过程中的应用

采用不锈钢微滤膜,对酶解RNA制备5′-核苷酸中杂蛋白的分离工艺进行了研究。考察了压力、温度对膜渗透通量、杂蛋白截留率以及透过液中杂蛋白含量等的影响,确定最佳工艺操作条件为:压力3.8 kg.cm-2、温度20℃,此时杂蛋白截留率达到66.7%、膜透过液中杂蛋白含量约为0.1 mg.mL-1。研究表明,滤饼层模型能较好地解释不锈钢膜的膜污染问题,通过考察膜渗透通量的恢复率,确定了最佳膜清洗方案,整个清洗过程只需要110 min,操作简捷,膜渗透通量能完全恢复。

碳酸胍体系中6种5′-单磷酸核苷酸的毛细管电泳分离研究

报告了在碳酸胍体系中研究 6种 5′ 单磷酸核苷酸的分离工作 ,考察了分离条件对分离结果的影响。在最佳条件下 ,TMP、AMP、CMP、GMP、IMP、UMP等 6种核苷酸的线性范围分别为 :5～ 3 5 0、2～ 3 0 0、1 0～ 40、5～ 3 5 0、1 0～ 40 0和 1 0～ 40 0mg/L ;其检出限分别为 :1、0 .5、2、1、2和 2mg/L。初步探讨了胍基与不同核苷酸之间的相互作用及这种作用对毛细管电泳分离的影响。并将实验结果与普通碳酸盐体系作了比较。

水解核糖核酸生产5′-核苷酸的条件优化及初步鉴定

以啤酒废酵母中提取的核糖核酸为原料,利用单因素试验和响应面优化试验优化了核酸酶P1催化水解核糖核酸的条件,并利用离子交换层析法对水解液中5′-核苷酸进行了初步分离鉴定。结果表明:最佳水解条件为核糖核酸质量浓度7.5 g/L、水解液初始pH 5、水解温度54℃、水解时间2.0 h。通过分离初步确定核糖核酸水解液中含有尿嘧啶核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、胞嘧啶核苷酸和腺嘌呤核苷酸。

5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸对人胃癌BGC823细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的研究5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleotide,AICAR)对人胃癌BGC823细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法分别将0.5、1、2和3mmol·L^(-1) AICAR作用于人胃癌BGC823细胞24、48和72h后,应用MTT法检测细胞增殖情况;Western blot法检测BGC823细胞内磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated-Adenosine monophosphate activated protein kinase,p-AMPK)蛋白的表达。2mmol·L^(-1) AICAR作用24h后,应用划痕愈合实验、Transwell小室法分别检测细胞的迁移和侵袭能力;结果 MTT法检测结果显示,0.5、1、2和3mmol·L^(-1) AICAR分别作用24、48和72h后,人胃癌BGC823细胞的增殖能力均被抑制,随着AICAR作用浓度增加和作用时间的延长,对BGC823细胞抑制作用逐渐增强,呈时间和剂量依赖性(P均<0.01);与对照组相比,2mmol·L^(-1) AICAR作用后,BGC823细胞的迁移和侵袭能力均减弱(P均<0.01);随着AICAR作用浓度增加和作用时间延长,p-AMPK蛋白表达逐渐增加(P均<0.01)。结论 AICAR可抑制BGC823细胞的增殖、迁移和侵袭能力;AICAR通过上调BGC823细胞内p-AMPK蛋白表达而发挥肿瘤抑制作用。

5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸联合干扰素对K562细胞的影响

目的:研究5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸(AICAR)联合干扰素(IFN-ɑ-2b)对慢性粒细胞白血病K562细胞的增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;Wright-Giemsa方法染色,光学显微镜下观察细胞形态;FITC AnnexinV/PI双染法分析细胞凋亡率的变化;免疫细胞化学法检测野生型P53蛋白的阳性表达率。结果:不同浓度AICAR于不同作用时间24、48和72 h对K562细胞均有抑制作用,抑制程度呈时间、剂量依赖性(r=0.71,r=0.84)。AICAR与IFN-ɑ-2b联合应用后可以有效抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,联合作用72 h时细胞的抑制率可达(45.26±2.54)%,联合作用48 h早期凋亡率达(33.72±0.23)%,与对照组及单用AICAR和单用IFN-ɑ-2b相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。AICAR与IFN-ɑ-2b联合作用促进野生型P53蛋白的表达。结论:AICAR和(或)IFN-ɑ-2b能抑制细胞增殖,促进K562细胞凋亡,2药联合具有协同抗瘤效应,其作用机制可能与促进野生型P53蛋白高表达有关。

麦芽根中5′-磷酸二酯酶的制备及性质

从麦芽根中提取 5′-磷酸二酯酶 ,酶活可达 474U/ m L。将所得酶液用于水解酵母核糖核酸 ,得到 5′-CMP、UMP、GMP、AMP 4种单核苷酸。最佳反应条件为 :底物 RNA浓度为0 .0 1 g/ m L,每毫升底物的酶用量为 3 0 U,酶解温度 70°C,p H7.0 ,时间 2 h,5′-核苷酸转化率达80 %。

分体式中空纤维酶膜反应器制备5’—核苷酸的研究

以高性能杂萘联苯聚醚砜酮(PPESK)中空纤维超滤膜为基础设计了分体式酶膜反应器(REMR),研究了REMR催化酵母RNA水解生产5’-核苷酸的工艺条件,分析了酶解反应不完全的原因,考察了RNA浓度、酶浓度、pH、反应温度对酶解率的影响。结果表明:当RNA浓度为2%(w/v),核酸酶P1浓度为100mg/L,pH为5.2,体系温度为65℃时,反应5h酶解率可达85%;对于已污染的膜,热碱反洗、NaClO反洗可分别使纯水通量恢复至新膜的82%和67%。