DMF运载5-氟尿嘧啶在大鼠体内分布浓度的定量检测

用溴尿嘧啶作内标,制备生物样本、沉降蛋白、酯萃法提取待测组分,建立氟尿嘧啶浓度测定方法,检测"右旋糖酐-磁性层状复合氢氧化物-氟尿嘧啶"(Dextran-Magnetic LDH-Fluorouracil,DMF)给药干预大鼠体内组织中的氟尿嘧啶浓度。结果表明溴尿嘧啶内标HPLC法回收率高(>90%)、精密度好、结果重现性好(RSD<3%)、测试稳定性高;在外加磁场和多次给药干预条件下,测得不同实验组动物组织的药物浓度有统计学意义,满足验证DME磁靶向缓控释性能的分析要求。

高效液相色谱法定量分析5-氟尿嘧啶注射液

目的：建立了高效液相色谱法分离测定5-氟尿嘧啶（5-Fu）注射液的含量.方法：采用SYMMETRY C18柱（150mm×3.9 mm,5μm）,流动相为磷酸水溶液（pH 5.0）-甲醇（90∶10）,流速为0.8 mL·min^-1,检测波长为265 nm,柱温为35℃.结果：该方法的线性范围为0.001～0.5 g·L^-1,r=0.999 9,平均回收率为100.1%,RSD为0.08%～1.2%.结论：本法简便、快速,准确度高,能较好地定量分析5-氟尿嘧啶注射液.

微滴式数字PCR定量检测转基因玉米品系VCO-01981-5

建立基于QX100微滴式数字聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)平台的我国未批准转基因玉米品系VCO-01981-5的二重微滴式数字PCR定量检测方法。该方法选择基因组中单拷贝的玉米内源基因hmg和VCO-01981-5品系边界序列为定量靶序列,分别设计不同的PCR扩增引物和TaqMan探针,并对两种探针用不同的荧光进行标记,然后将上述探针和引物置于同一个PCR反应体系中以同时定量两个靶标序列。特异性实验结果显示该法只有VCO-01981-5品系的两个靶序列才都有扩增信号。灵敏度、线性和准确性实验结果显示在定量结果相对标准偏差不大于25%时,最低可稳定定量5个拷贝的VCO-01981-5品系特异性序列分子和4个拷贝的内源基因hmg分子;而在高达50 ng模板DNA以下范围内,PCR反应模板量与测定样品拷贝数之间呈高度正相关,相关系数达0.99以上;平均误差小于10%。结果表明本研究建立的该玉米品系定量方法特异性强,稳定性好,精确性、准确性以及灵敏度高,定量范围广,可用于进、出口农产品和食品中该转基因玉米品系成分的定量检测。此外,该法还可为其他转基因玉米品系及其他转基因作物品系建立类似定量检测方法提供参考。

人胃癌细胞5-氟尿嘧啶耐药机制的研究

目的：探讨人胃腺癌SGC7901／R耐药细胞株产生耐药的机制。方法：以人胃腺癌5-FU耐药细胞株SGC7901／R和其亲本细胞SGC7901为对象，MMT法进行体外药敏实验，：RT-PCR法检测胸腺嘧啶合成酶(TS)，胸腺嘧啶激酶(TK)，乳清酸磷酸核糖转移酶(OPRT)，多药耐药相关蛋白(MRP)，多药耐药基因(mdr-1)的转录情况，流式细胞仪测定肿瘤细胞内药物蓄积浓度。结果：SGC7901／R耐药细胞对5-FU耐药性能确切，并对顺铂(DDP)，柔红霉素(DNR)存在不同程度的交叉耐药。TS，mdr-1在耐药细胞SGC7901／R中表达显著增强，TK表达减少，OPRT在两种细胞中表达无显著差别。MRP在两种细胞都没有表达。耐药细胞SGC7901／R内DNR药物蓄积浓度降低。结论：人胃腺癌5-FU耐药细胞株SGC7901／R耐药机制与嘧啶合成途径中重要的酶TS和TK表达的改变相关，5-FU耐药细胞株具有多药耐药(MDR)的特性，这与mdr-1基因翻译的P-糖蛋白的泵功能增强有关。

表儿茶素没食子酸酯影响5-氟尿嘧啶与人血清白蛋白结合的热力学研究

目的:联合用药有利于增强抗癌药物的疗效,降低毒副作用.茶成分影响5-氟尿嘧啶(FU)与人血清白蛋白(HSA)结合的热力学值得研究.方法:本文利用等温滴定量热结合荧光光谱、动态光散射、圆二色光谱研究了不同温度和pH下FU与HSA的结合情况以及表儿茶素没食子酸酯(ECG)对二者结合情况的影响.结果:拟合数据后得到结合位点数n、结合常数Ka、焓变ΔH^0、熵变ΔS^0和吉布斯自由能变ΔG^0等热力学参数,结果表明FU与HSA之间的作用力为疏水、氢键和范德华力,ECG能够抑制FU与HSA的结合增加FU的游离浓度从而提高疗效.圆二色光谱数据表明HSA的二级结构发生轻微改变.结论:本研究能够为探明茶成分增强FU治疗癌症临床疗效的机制提供帮助,同时也为ECG和FU的联合用药提供指导.

二氢嘧啶脱氢酶在大肠癌的表达及其与5-氟尿嘧啶化疗敏感性的研究

本研究通过免疫组织化学检测大肠癌中二氢嘧啶脱氢酶（DPD）的表达情况,结合体外药敏试验,探讨DPD表达水平与5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗敏感性的相关性,从中分析药物代谢相关酶的表达情况,为临床开展耐药指标筛查,指导大肠癌个体化疗提供理论依据。

气相色谱-质谱联用定量检测溶液中的5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷

气相色谱-质谱联用是一种实用、灵敏、准确的二噁烷检测方法。5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷的挥发性较弱,本文采用甲醇/四氯化碳萃取预处理,建立气相色谱串联质谱法鉴别并测定缓冲液中的5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷含量的方法。利用外标法建立的标准曲线线性关系良好,能够满足所测浓度范围的定量分析,测试的稳定性较高。

分子信标用于p53 mRNA的体外定量检测

根据p53基因的序列设计并合成了能特异性检测p53mRNA的分子信标(MB),发展了一种快速定量测定细胞内总RNA提取物中p53mRNA的方法.采用鼻咽癌(CNE2)细胞系和经RNA干扰技术降低p53基因表达的CNE2-p53RNAi细胞系,抽提总RNA并用MB检测,验证了MB的检测对象是p53mRNA.将该方法应用于多种肿瘤细胞内p53基因表达水平的分析,表达变化趋势与经典的mRNA分析方法RT-PCR检测结果相符.在此基础上,用MB对5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理的肺腺癌细胞(A549)进行了p53mRNA的体外定量检测,结果表明采用MB能够快速地获知该药物对细胞内p53mRNA表达影响的信息.

粪便miRNA675-5p联合qFIT检测对结直肠癌筛查的诊断价值

目的探讨粪便miRNA675-5p联合qFIT在结直肠癌筛查中的诊断价值。方法纳入2016年1月至2021年12月于武汉科技大学附属天佑医院和十堰市太和医院就诊的173例患者,收集其临床资料及粪便标本,包括48例结直肠癌组、46例腺瘤组、42例息肉组、37例正常对照组。采用qRT-PCR法检测粪便miRNA675-5p,定量粪便免疫化学检测(qFIT)检测粪便潜血。采用ROC曲线评估qFIT及miRNA675-5p联合qFIT检测对结直肠癌及腺瘤的诊断价值。结果结直肠癌组的qFIT值[259.94(36.25,758.55)]明显高于腺瘤组[0(0,13.42)]、息肉组[0(0,0)]、正常对照组[0(0,0)],差异有统计学意义(均P<0.01);腺瘤组高于息肉组和正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结直肠癌组qFIT敏感度为85.4%,特异度为100%;腺瘤组qFIT敏感度为28.3%,特异度为97.3%。联合检测(miRNA675-5p联合qFIT)结直肠癌组敏感度100%,特异度89.2%;腺瘤组敏感度71.7%,特异度86.5%。结直肠癌组、腺瘤组联合检测优于qFIT单独检测,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论miRNA675-5p联合qFIT检测能够提高早期结直肠癌筛查诊断效能。

电化学方法检测抗癌药物氟尿嘧啶的最新研究进展——新材料修饰电极助力提升检测效果

5-氟尿嘧啶自合成以来,被广泛地应用于消化道癌和其他实体瘤的治疗。虽然获得了很好的疗效,然而,它的毒副作用也越来越引起科研人员的重视。为了进一步研究治疗过程中,该药在人群中产生的差异、以及环境污染与职业暴露对其的影响,我们总结了近年来5-氟尿嘧啶的检测方法,对比发现电化学检测凭借其检测限低,重现性好,预处理简单,实验操作简便等优势在众多方法中脱颖而出,特别是新型材料在修饰电极方面的应用,进一步提升了检测效果。

A549肺腺癌多细胞球体药敏实验、Mdr1、MRP表达以及^(99m)Tc-MIBI摄取研究

目的探讨A549肺腺癌多细胞球体的多药耐药基因(mdr1)和多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达,甲氧基异丁基异腈(MIBI)摄取结果能否预测化疗效果。方法①血浆高峰浓度的化疗药物顺铂(DDP)、长春花碱酰胺(VDS)、氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶,5-FU)、羟喜树碱(HCP)、丝裂霉素(MMC)、多柔比星(阿霉素,ADM)分别进行药物敏感性实验。②单层贴壁细胞培养。96孔板1个,每组4孔,2×104细胞/孔。③MTT检测观察疗效。细胞加化疗药后培养48h,然后加MTT5mg/mL,每孔20μL,4h后用酶标仪(490nm)测量吸光度值。④RT-PCR检测A549细胞和MCF-7耐药株的mdr1和MRP表达,β2-MG作内参照。⑤96孔板内每孔一个球体,每孔掺入99mTc-MIBI9.25×104Bq(2.5μCi),分别于60和120min结束掺入并测量γ计数。结果①A549细胞药敏实验对DDP不敏感,对MMC、VDS、ADM、5-FU、HCP敏感。②MCF-7长春新碱耐药株(MCF-7/VCR)对DDP、VDS不敏感,对MMC、ADM、5-FU和HCP较敏感。③A549细胞及球体的Mdr1/β2-MG为0,MRP/β2-MG分别为0.76和0.62;MCF-7耐药细胞的mdr1/β2-MG和MRP/β2-MG分别为35和4.36。④A549多细胞球体对99mTc-MIBI120min的摄取值高于60min摄取值(P<0.05)。结论A549多细胞球体的mdr1和MRP表达水平较低以及MIBI摄取阳性提示无多药耐药性产生,与化疗药物敏感性检测结果基本一致。A549细胞对DDP耐药说明除mdr1和MRP之外,还存在与转运蛋白间接相关的其他耐药机制。

基因多态性检测在5-氟尿嘧啶治疗胃癌患者中的应用

目的探讨基因多态性检测在5-氟尿嘧啶临床治疗效应评价中的作用。方法收集1例胃癌患者用5-氟尿嘧啶治疗后的临床疗效和药物不良反应等相关信息,检测相关基因多态性,并分析其在临床治疗中的作用。结果该患者二氢嘧啶脱氢酶(DPD)基因检测位点均为野生型;亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因检测位点则均为突变杂合型,MTHFR活性降低,叶酸代谢异常,5-氟尿嘧啶敏感性增加;ABCB1 3435位点基因型为TT突变纯合型,易引起严重腹泻,且具有较高淋巴转移风险。结论基因多态性检测有助于制订和调整给药方案,实现个体化治疗。

高效液相色谱分析法测定磷酸-5'-吡哆醛质量分数

建立了磷酸-5＇-吡哆醛的高效液相色谱定量检测方法。实验采用C18反相色谱柱（5μm,250 mm×4.6mm）;流动相为乙腈-水,二者体积比为（10-30）∶（70-90）;流速为1.0 m L/min;柱温为30℃;检测波长为388 nm;进样量为10.0μL（将测定主成分质量分数的进样样品用水溶解并稀释成0.2 g/L）。实验结果表明,磷酸-5＇-吡哆醛的线性方程为y=7 575.6x＋4 801.8,r=0.999 95,检出限为0.2 g/L。

5-氟尿嘧啶聚乳酸载药纳米微粒对人胃癌和结肠癌细胞株的体外杀伤效应

目的探讨5-氟尿嘧啶聚乳酸载药纳米微粒(5-Fu-PLA-NP)对人胃癌和结肠癌细胞株的体外杀伤效应.方法超声乳化法制备5-Fu-PLA-NP载药纳米微粒;用噻唑蓝(MTT)比色法从1～10 d连续检测1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4mol/L浓度5-Fu-PLA-NP和5-Fu对人胃癌细胞株MGC803和结肠癌细胞株SW620的体外杀伤效应,并计算出2种药物的半数抑制率浓度IC50和对肿瘤细胞的生长抑制率.结果 5-Fu-PLA-NP的体外累积药物释放率在7 d时为75.7%,10 d时达94.3%;5-Fu的杀伤效应在1～7 d时呈时间依赖关系,7 d后进入平台期;5-Fu-PLA-NP则在1～10 d均呈时间依赖关系;7 d时两者在不同剂量的杀伤效应均呈剂量依赖关系,并且两者间差异无统计学意义.结论 5-Fu-PLA-NP具有药物缓释效应,可延长药物对人胃癌与结肠癌细胞的有效作用时间;并且载药纳米微粒没有降低5-Fu成分的生物学活性.

原代肿瘤细胞三维立体培养药物敏感性检测在乳腺癌个体性化疗中的应用研究

背景与目的研究乳腺癌患者化疗药物敏感性差异,探讨原代肿瘤细胞三维立体培养法化疗药物敏感性检测（CD-DST）在乳腺癌个体性化疗中的意义。 方法采用CD-DST法检测乳腺癌原发病灶肿瘤组织120例（粗针吸活检10例，手术110例）对5种乳腺癌常用化疗药物（紫杉醇、表阿霉素、5-氟尿嘧啶、顺铂、诺维本）的敏感性，观察检测成功率、患者问药物敏感性的个体差异及检测结果与临床应用效果的吻合度。

复硝酚钠原药中3种有效成分的高效液相色谱分析

建立了快速、可同时测定复硝酚钠原药中5-硝基-2-甲氧基苯酚钠(SD1)、二水合4-硝基苯酚钠(SD2)和2-硝基苯酚钠(SD3)3种有效成分的高效液相色谱(HPLC)分析方法。通过对流动相和检测波长的优化,得到3种成分的最佳色谱体系。采用Eclipse XDB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以V(甲醇)∶V(水)=60∶40为流动相进行洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,在335 nm波长下,3种有效成分在7 min内能达到基线分离。SD1、SD2和SD3的峰纯度因子均大于999;线性范围分别为0.6～286.7、0.5～518.5和0.5～272.0 mg/L,相关系数r均大于0.999;定量限(LOQ)分别为0.6、0.5和0.5 mg/L;其质量分数分别为15.8%、50.0%和33.0%,标准偏差分别为1.7%、1.0%和1.3%。该方法可在较短时间内使在色谱柱上不易保留和分离的复硝酚钠中的3种组分同时分离,操作简单、快捷,结果准确、可靠,为复硝酚钠原药的质量控制提供了一种准确可行的分析方法。

土鳖虫含药血清与化疗药物联合对人肝癌细胞增殖的影响

目的:观察土鳖虫含药血清作用前后肝癌HepG-2细胞化疗药物相关基因表达水平的改变,探讨其可能的分子机制。方法:以肝癌HepG-2细胞为研究对象,使用实时荧光定量RT-PCR方法检测土鳖虫含药血清作用前后肝癌HepG-2细胞化疗药物相关基因TS、ERCC1表达水平的变化。采用MTT法检测10%土鳖虫含药血清与5-FU、DDP单独、联合用药对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用。结果:实时荧光定量RT-PCR结果显示,10%土鳖虫含药血清对TS基因表达有下调作用,对ERCC1基因表达有上调作用。药物敏感实验中,在单用土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞还未产生抑制作用时,联合5-FU或DDP用药抑制率即高达69.315%或74.775%,显示土鳖虫含药血清与5-FU或DDP联合用药有明显的协同作用。结论:土鳖虫乳剂作为一种新型抗肿瘤中药制剂,经过动物体内代谢后所得血清与常用化疗药物5-FU、DDP有明显的协同作用,可能与药物相关重要基因表达的变化有关,但与DDP协同作用的机理有待进一步研究。

棉花含糖量测试方法的研究进展

为了研究测定棉花含糖量的最佳方法，本文通过分析3大类棉糖检测的方法原理和15种应用，得出了未来测定棉花含糖量的测试方法也将朝着快速、准确且低成本的趋势发展。DNS法即3，5-二硝基水杨酸比色法的英文简称，其检测原理是根据3，5-二硝-3-氨基-5-硝基水杨酸，在一定浓度范围内，还原糖的量和反应液的颜色呈正比。

4羟基丁酸尿症6例临床及实验室研究

目的探讨4羟基丁酸尿症患儿临床特征及实验室诊断方法。方法2012年6月至2013年6月天津市儿童医院收治的6例4羟基丁酸尿症患儿，应用头磁共振成像（MRI）、尿气相色谱一质谱（GC／MS）半定量检测及ALDH5A1基因突变分析多层面分析。结果6例均存在精神运动发育落后。3例存在癫痫发作。5例起病年龄〈1岁。4例头MRI示双侧对称性苍白球病变。6例尿GC／MS半定量检测示尿4羟基丁酸与内标比值增高（1252．4—9059．8）；ALDH5A1基因突变分析示不同位点均可出现突变（2例为c．1568C〉T纯合突变，余4例分别为c．691G〉A，c．1568C〉T；IVS9—2delA，C．1568C〉T；c．527G〉A，c．691G〉A；c．904G〉A，O．1022C〉A复合杂合突变）。结论头MRI双侧对称性苍白球病变是本病影像学特征。尿GC／MS为本病诊断依据。ALDH5A1基因不同位点均可发生突变，为本病基因诊断依据。