重组酿酒酵母5-氨基酮戊酸合酶在大肠杆菌的表达

以酿酒酵母基因组为模板,采用PCR扩增出编码成熟5-氨基酮戊酸合酶(第一个氨基酸残基为Asn63)的基因hem1,将其克隆到pMAL-2x中构建重组表达载体,转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),在0.5 mmol.L-1的IPTG诱导下,SDS-PAGE显示分子量约为49 kD的特异条带。重组菌在紫外灯下显示红色荧光,表明酶在大肠杆菌体内活性表达。体外反应表明,在浓度超过0.1 mmol.L-1的IPTG诱导下,酶活力下降,培养基的初始pH值约为6.5,5-氨基酮戊酸产量达最大,且主要分泌到胞外。