5-氮杂胞嘧啶核苷降低小麦成熟胚再生频率

为了研究组蛋白乙酰化对小麦再生的影响,以CB037、Fielder和中国春(CS)的成熟胚为外植体,在培养基中添加不同浓度的5-氮杂胞嘧啶核苷(5-azaC),分析了胚性愈伤组织诱导率、愈伤组织分化率和绿芽诱导率。结果表明,添加50μmol/L 5-azaC,CB037绿芽诱导率为54.72%,与对照79.62%相比,下降水平达到极显著差异;添加10μmol/L和50μmol/L 5-azaC,Fielder胚性愈伤组织诱导率分别为39.13%和35.71%,绿芽诱导率分别为26.09%和25.14%,与对照相比,均有显著性差异的下降;CS在50μmol/L浓度处理时,胚性愈伤组织诱导率为23.89%,与对照30.95%相比,有显著性差异的下降。添加5-azaC降低小麦成熟胚再生频率;随着添加浓度升高,降低效果越明显。5-azaC对小麦再生频率的影响有基因型差异。

5-氮杂胞嘧啶核苷联合hepaCAM腺病毒通过抑制p-AKT诱导膀胱癌细胞T24凋亡

目的:研究5-氮杂胞嘧啶核苷(5-azacytidine,azac)联合肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)腺病毒对膀胱癌细胞T24凋亡的影响及可能机制的探讨。方法:7种不同因素分别处理培养的膀胱癌细胞T24,hoechst 33258染色检测各处理组细胞凋亡率,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞早期凋亡率,RT-PCR检测hepaCAM及B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,bcl-2)mRNA的表达,Western blot检测hepaCAM、p-AKT、total-AKT、bcl-2蛋白的表达。结果:hoechst 33258显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞凋亡率为(45.21±0.06)%,明显高于hepaCAM腺病毒组(15.60±0.02)%和azac组(26.30±0.02)%,差异有统计学意义(P=0.003,P=0.008);FCM显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞早期凋亡率为(16.05±0.06)%,明显高于hepaCAM腺病毒组(3.90±0.02)%和azac组(9.67±0.02)%,差异有统计学意义(P=0.002,P=0.043);RT-PCR显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac与hepaCAM腺病毒联用可以上调hepaCAM mRNA的表达(P=0.004,P=0.000),下调bcl-2 mRNA的表达,差异有统计学意义(P=0.026,P=0.030);Western blot显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac联合hepaCAM腺病毒组可上调hepaCAM蛋白的表达(P=0.003,P=0.003),同时下调p-AKT(P=0.001,P=0.005)和bcl-2(P=0.000,P=0.002)蛋白的表达,差异有统计学意义。结论:azac联合hepaCAM腺病毒可能通过抑制p-AKT的磷酸化水平加速诱导T24细胞凋亡,可为膀胱癌的治疗提供新的思路。

离体条件下5-氮杂胞嘧啶核苷对菊花DNA甲基化和表型性状的影响

采用离体处理的方法,初步研究了5-氮杂胞嘧啶核苷(5-azaC)对菊花的影响。结果表明,500μmol.L-1以上时有致死效应,100μmol.L-1以上时能抑制离体材料的生长发育,而各浓度对菊花的丛生芽均具有抑制作用,且这种抑制作用具有时间累加效应和剂量累计效应。10μmol.L-1以下时使菊花开花时间有不同程度的提早,这一效应具有稳定性,并可通过营养繁殖进行遗传。MSAP技术分析表明,处理材料基因组DNA甲基化水平明显降低,在去处理后的继代过程中仍有部分位点保持低甲基化状态。

5-氮杂胞嘧啶核苷诱导小鼠骨髓间充质干细胞凋亡

目的研究5-氮杂胞嘧啶核苷（5-AZA）对小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）凋亡的影响。方法从小鼠股骨和胫骨骨髓中分离BMSCs；利用免疫荧光染色检测间充质干细胞特异性标记分子CD44和CD90在BMSCs上的表达；应用0、10和20μmol／L的5-AZA体外诱导培养BMSCs48h，应用4′，6-二眯基-2-苯基吲哚（DAPI）染色和荧光标记的半胱天冬酶抑制剂（FLICA）凋亡试剂盒检测5-AZA处理后细胞的凋亡率；应用Westernblot检测凋亡相关蛋白AnnexinV和Caspase-3在处理后的细胞表达水平。结果实验中，BMSCs阳性表达间充质干细胞特异性标记蛋白CD44和CD90。DAPI染色和Caspase-3染色均显示10和20μmol／L5-AZA可增加BMSC的凋亡率；对照组、10μmol／L组5-AZA和20μmol／L5-AZA组DAPI染色阳性凋亡率分别为（21．086±2．601）％、（34．467±3．724）％和（46．512±3．864）％，Caspase-3染色阳性凋亡率分别为（5．354±0．735）％、（15．4624-2．385）％和（28．190±4．190）％，组间比较差异均有统计学意义（P均＜0．01）。Westernblot检测显示AnnexinV和Caspase-3在5-AZA处理后表达均显著增高；对照组、10μmok／L组5-AZA和20μmol／L5-AZA组AnnexinV相对表达水平分别为（26．612±2．184）％、（42．873±4．313）％和（50．056±4．457）％，Caspase-3的相对表达水平分别为（19．231±2．683）％、（38．618±5．385）％和（91．235±7．116）％，组间比较差异均有统计学意义（P均＜0．01）。结论常规剂量的5-AZA可诱导BMSCs凋亡。

干扰素α、5-AZA-CdR对白血病细胞HL-60和K562的作用

【目的】探讨细胞因子干扰素α(INFα)和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-AZA-CdR)对白血病细胞HL-60和K562的作用机制。【方法】1000U/mL INFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K562 48h,通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位(Δψm)和细胞凋亡的情况。【结果】INFα和5-AZA-CdR使HL-60和K562 Xaf1 mRNA表达增加,且与5-AZA-CdR呈剂量依赖性,其中5-AZA-CdR(5μmol/L)的作用最明显;XIAP mRNA表达无变化。INFα使HL-60和K562 Bax表达增加,Bcl-2和Bcl-xl表达无改变;5-AZA-CdR降低HL-60 Bcl-2、Bcl-xl、Bax表达,增加K562 Bax表达,不影响K562 Bcl-2和Bcl-xl。INFα和5-AZA-CdR都能使线粒体膜电位降低、细胞凋亡增加。除细胞凋亡外INFα和5-AZA-CdR对HL-60和K562的Xaf1 mRNA、Bcl-2家族成员以及Δψm无协同作用。【结论】INFα和5-AZA-CdR促进HL-60和K562细胞凋亡,其作用机制可能与上调Xaf1 mRNA的表达,下调Bcl-2(Bcl-xl)/Bax和降低线粒体膜电位有关。

5-AZA-CdR联合EGCG对HL-60和K562的影响

目的探讨细胞因子INFα和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-AZA-CdR)能否诱导HL-60和K562 Xaf1表达,以及Xaf1表达诱导剂联合表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有协同抗癌作用。方法(1)1000U/mlINFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K56248h,通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达并比较差异。(2)最佳Xaf1表达诱导剂联合EGCG作用于白血病细胞,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位和细胞凋亡的情况。结果(1)随5-AZA-CdR剂量增加,HL-60和K562Xaf1 mRNA表达增加,INFα也能诱导Xaf1表达,以5-AZA-CdR(5μmol/L)的作用最强;INFα和5-AZA-CdR均不影响XIAP mRNA的表达。(2)5-AZA-CdR和EGCG可改变HL-60和K562细胞Bcl-2(Bcl-xl)和Bax的表达,降低线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,二者联合作用被加强。结论(1)INFα和5-AZA-CdR能诱导HL-60和K562Xaf1 mRNA的表达,且5-AZA-CdR的作用具有剂量依赖性。(2)5-AZA-CdR和EGCG在体外能诱导白血病细胞凋亡,并具有协同效应。

5-Aza诱导骨髓间充质干细胞治疗大鼠心肌梗死及对凋亡蛋白的影响

目的探讨5-Aza诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗大鼠心肌梗死及对凋亡蛋白的影响机制。方法构建SD大鼠心肌梗死模型随机分为4组,每组15只:对照组、模型组、MSCs组和5-Aza-MSCs组。分离获取MSCs并进行体外增殖,5-Aza-MSCs组用5-Aza进行趋化诱导BMSCs分化为心肌细胞,并给予治疗组大鼠移植。HE染色法观察心肌组织病理学改变;采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡的发生;采用Caspase 3活性检测试剂盒检测凋亡蛋白Caspase-3表达;采用Western blot法检测Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad、Bak蛋白的表达。结果 MSCs组和5-AZA-MSCs组心肌凋亡数量比模型组显著降低,5-Aza-MSC组心肌凋亡数量最低(P<0.05)。MSCs组和5-AZAMSCs组Bcl-2、Bcl-xl蛋白含量表达比模型组显著上升,Bax、Bad、Bak蛋白表达明显下降,5-AZA-MSCs组更为明显(P<0.05),5-AZA-MSCs组bcl-2/bax的比值最大,说明5-AZA-MSCs组抗凋亡能力最强。MSCs组和5-AZA-MSCs组Caspase 3含量比模型组显著降低,5-AZA-MSCs组下降更为明显(P<0.05)。结论 5-Aza诱导MSCs向心肌细胞分化,并可有效改善大鼠心肌梗死,抑制促凋亡蛋白的表达。

5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷联合吉西他滨对胰腺癌细胞株原钙黏蛋白8基因表达的影响

目的研究5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷（5-Aza—CdR）对胰腺癌细胞株Capan-2原钙黏蛋白8（protocadherin8，PCDH8）基因DNA启动子甲基化的转录调控，以及联合吉西他滨对癌细胞生长抑制与凋亡的影响。方法采用MTT法、流式细胞术检测5-Aza—CdR及联合吉西他滨对Capan-2细胞的抑制率与凋亡率。应用甲基化特异性PCR（MSP）、RT—PCR和Westernblot的方法检测不同浓度5-Aza—CdR处理细胞前后PCDH8基因的甲基化状态、mRNA表达水平和蛋白表达水平。结果5-Aza-CdR能使胰腺癌细胞Capan-2增长速度减慢，呈浓度依赖性，联合吉西他滨显著抑制细胞生长；5-Aza—CdR联合吉西他滨与单药组、对照组相比，可显著诱导细胞凋亡。不同浓度的5-Aza—CdR可逆转PCDH8基因在胰腺癌细胞Capan-2的甲基化，恢复mRNA表达水平和蛋白表达水平，并呈一定的浓度正相关。结论5-Aza—CdR可有效逆转PCDH8基因在胰腺癌细胞株Capan-2的高甲基化状态，解除DNA高甲基化导致的基因沉默，重新诱导基因mRNA转录和蛋白表达，同时可抑制胰腺癌细胞生长，与吉西他滨有协同抗肿瘤作用。

DNA甲基化抑制剂作用机理及其在植物发育生物学研究中的应用

本文综述了DNA甲基化抑制剂作用机理及其在植物发育生物学研究中的应用。DNA甲基化抑制剂使甲基基团不能转移到腺嘌呤或胞嘧啶,导致DNA甲基化反应受阻,从而使基因组甲基化水平降低。DNA甲基化抑制剂已被用于因DNA甲基化引起的植物表观遗传研究中,同时它可以代替低温促进植物提早开花,并可能在植物性状改良中得到进一步的研究和应用。