5-氮杂脱氧胞苷酸诱导ER阴性细胞ERα,ERβ恢复表达的实验研究

目的:观察5-氮杂脱氧胞苷酸(5-Aza-dC)对ERα、ERβ阴性细胞株MDA-MB-435的ERα、ERβ的恢复表达作用。方法:采用不同终浓度(1、2.5、5、10、20μmol/L)5-Aza-dC处理ERα、ERβ阴性细胞株MDA-MB-435 96h,通过逆转录PCR(Reverse transcript PCR,RT-PCR)方法检测5'-Aza-dC处理后ER阴性MDA-MB-435乳腺癌细胞株DNMT1、ERα、ERβmRNA变化情况。结果:不同浓度5-Aza-dC均可明显抑制DNMT1 mRNA表达,20μmol/L的5-Aza-dC对DNMT1 mRNA抑制作用最为明显;采用不同浓度5-Aza-dC处理MDA-MB-435细胞96h后,ERα、ERβmRNA表达水平随5-Aza-dC浓度增大而增加,差别具有显著性(P<0.05)。结论:DNMT抑制剂5-Aza-dC可以浓度依赖性地恢复ER阴性细胞中ERα,ERβmRNA表达,说明ERα,ERβ基因启动子甲基化是引起ERα、ERβ蛋白失表达的重要机制之一。

急性白血病细胞系中SFRP基因启动子甲基化及去甲基化诱导表达的研究

目的:探讨分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)基因家族启动子CpG岛异常甲基化状态与急性白血病(AL)发生发展的关系,以及DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷酸(5-Aza-CdR)去甲基化诱导SFRP基因表达作用的可能机制。方法:采用甲基化特异性PCR检测不同AL细胞系(Molt-4、Jurkat、HL-60和NB4)和不同浓度5-Aza-CdR作用下Jurkat细胞系中SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因启动子区的甲基化状态,采用实时荧光定量RT-PCR检测SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5 mRNA表达,采用半定量RT-PCR检测DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA表达。结果:在正常人细胞中不存在SFRP基因的甲基化。SFRP1、SFRP2和SFRP5基因在HL-60、NB4、Molt-4和Jurkat细胞系中均呈完全甲基化状态;SFRP4基因在NB4、Molt-4和Jurkat细胞系中完全甲基化,在HL-60细胞系中则部分甲基化。5-Aza-CdR可逆转SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因的高甲基化状态,并能够下调DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA水平,诱导SFRP基因恢复表达。结论:在AL细胞系中,SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因出现高甲基化,与AL的发生密切相关,可能成为AL新的基因标志物。5-AzaCdR通过抑制DNMT表达,逆转SFRP基因的甲基化状态,恢复其表达。