5-氮-2′-脱氧胞苷对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的检测去甲基化药物5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-dC)对结肠癌细胞株SW620、COLO205和HT29生物学行为的影响,并研究该药物对多个基因表达的影响。方法5-aza-dC处理对各结肠癌细胞生长周期、凋亡、细胞迁移和侵袭能力的影响分别采用流式细胞术、Annexin V/Propidium Iodide法、细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测。采用RT-PCR法检测抑癌基因THBS1、TIMP3、RASSF1A和癌基因c-myc、c-fos、bax在5-aza-dC处理前后各结肠癌细胞株中的表达改变情况。结果5-aza-dC处理后,3株结肠癌细胞的生长周期均明显阻滞于G2/M期,细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。划痕实验后72h,对照组结肠癌细胞明显向划痕的中央迁移,而药物处理组结肠癌细胞迁移不明显。5-aza-dC处理后,结肠癌细胞的侵袭能力较未处理组降低(P<0.05)。5-aza-dC可恢复结肠癌细胞中多个抑癌基因的表达,但是对癌基因的表达没有影响。结论5-aza-dC对结肠癌细胞有阻滞细胞生长周期、促进凋亡及抑制细胞迁移和侵袭能力等作用,该作用可能是通过恢复多个抑癌基因的表达来实现的。

5-氮-2′-脱氧胞苷对人膀胱癌细胞系T_(24)细胞及其Apaf-1、APC基因甲基化状况的影响

目的观察5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响及其对凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、结肠腺瘤性息肉病(APC)基因甲基化表达状况的影响。方法应用不同浓度的5-Aza-CdR处理人膀胱癌T24细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞生长抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡的变化情况;以甲基化特异性PCR方法(MSP法)检测膀胱癌T24细胞株中Apaf-1及APC基因的甲基化状态。结果膀胱癌T24细胞中Apaf-1、APC基因分别呈半甲基化及高甲基化,5-Aza-CdR作用后T24细胞中Apaf-1及APC基因启动子区域均呈去甲基化状态;T24细胞的生长受到明显抑制,0.50、1.00、2.50、5.00μmol/L 5-Aza-CdR作用T24细胞72h后,细胞生长抑制率分别为0.50%、5.40%、20.40%、23.00%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量和时间依赖关系。72h后G0/G1期的比例增加,S期比例明显减少,细胞凋亡率明显增加,5.00μmol/L 5-Aza-CdR组凋亡率为(40.35±3.63)%,对照组为(8.17±1.52)%,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 5-Aza-CdR能逆转膀胱癌T24细胞中的Apaf-1及APC基因甲基化,恢复该基因的表达,诱导膀胱癌T24细胞凋亡。

5-氮-2′-脱氧胞苷和曲古抑菌素A对子宫内膜腺癌细胞的抑制作用

目的:研究去甲基化制剂5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)在体内外对子宫内膜腺癌Ishikawa细胞的抑制作用。方法:以5-Aza-CdR和TSA单独或联合作用Ishikawa细胞,锥虫蓝拒染法观察药物对肿瘤细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡和分析细胞周期,Western blotting检测肿瘤细胞凋亡信号通路中caspase-8活化及多聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解情况。建立裸鼠Ishikawa细胞移植瘤模型,观察两抑制剂作用下的移植成瘤率、肿瘤的体积和重量。结果:5-Aza-CdR和TSA对Ishikawa细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量、时间依赖性;两制剂联合作用时抑制作用更强(P<0.05)。5-Aza-CdR或TSA均可诱导细胞凋亡,联合作用后细胞的凋亡率更高(P<0.05);5-Aza-CdR和TSA联合应用使细胞发生明显的G1期阻滞;5-Aza-CdR和TSA诱导了caspase-8活化及PARP裂解。荷瘤小鼠予5-Aza-CdR和TSA治疗后移植瘤生长速度减慢,移植瘤体积和重量明显减少。结论:5-Aza-CdR与TSA能抑制Ishikawa肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡,两者联合作用时强度明显增加;其机制与两制剂诱导caspase-8活化及PARP裂解有关。

5-氮-2′-脱氧胞苷对人肺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的:通过体外实验观察DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮-2′脱氧胞苷(5-aza-2′deoxycytidine,5-aza-dC)对人肺腺癌细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响,初步探讨其在治疗肺部肿瘤的作用及可能机制。方法:分别以0.5、2.0、10.0μmol/L的5-aza-dC处理人肺腺癌A549细胞,用MTT法测定药物干预72h后的光密度值,计算抑制率,流式细胞仪检测5-aza-dC对肺癌细胞株细胞周期及凋亡的影响,实时定量PCR检测相关基因p21、CyclinD1、Bax和Bcl-2mRNA的表达。结果:5-aza-dC能抑制人肺癌细胞株A549的增殖,且呈浓度依赖性;G0/G1期细胞比例下降,S期及G2/M期细胞比例明显高于对照组,出现G2/M细胞周期阻滞;同时,5-aza-dC能诱导A549细胞凋亡;与对照组比较,各药物干预组p21mRNA表达升高(均P<0.01),而CyclinD1mRNA表达无明显变化(P>0.05);与对照组比较,各药物干预组Bax、Bcl-2mRNA表达均明显降低(均P<0.01),且Bax/Bcl-2增高。结论:5-aza-dC能抑制肺癌细胞株的增殖、引起G2/M细胞周期阻滞,并促进凋亡,其机制可能与p21基因的上调及Bax/Bcl-2比值改变有关。

5-氮-2′-脱氧胞苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡研究

[目的]探讨5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导膀胱癌EJ细胞凋亡机制。[方法]以不同浓度的5-Aza-CdR作用于膀胱癌EJ细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖程度,原位凋亡细胞检测技术(TUNEL)和流式细胞术(FCM)检测5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞凋亡和细胞周期的影响。[结果]EJ细胞加入不同浓度的5-Aza-CdR(0.625,1.25,2.50,5.00mg/ml),与对照组相比各组EJ细胞增长速度减慢。与对照组相比,不同浓度的各组5-Aza-CdR(0.625,1.25,2.50,5.00mg/ml)可以显著降低EJ细胞的增殖比和增高EJ细胞的凋亡指数(P<0.05),且与5-Aza-CdR呈浓度依赖关系(P<0.05);不同浓度的5-Aza-CdR作用EJ细胞后G0/G1期细胞明显增加(P<0.05)。[结论]5-氮-2′-脱氧胞苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡并使EJ细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制膀胱癌EJ细胞的增殖。

5-氮-2′-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响

目的探讨DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-dC)联合组蛋白去乙酰化抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响。方法人肺腺癌细胞株A549细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养。实验分4组,5-aza-dC组:细胞接种20h后,加入5μmol/L的5-aza-dC;TSA组:细胞接种20h后,加入300nmol/LTSA;5-aza-dC+TSA组:细胞接种20h后,加入5μmol/L5-aza-dC,24h后再加入300nmol/L TSA;对照组:DMEM培养液中加入等量的二甲基亚砜(DMSO)。MTT比色法测定各处理因素对A549细胞生长的影响;Annexin V/PI双染法测定各组细胞培养72h后的凋亡情况;应用RT-PCR检测各组细胞培养72h后细胞CCAAT增强子启动蛋白α(C/EBPα)mRNA的表达。结果 (1)5-aza-dC及TSA呈时间依赖性地抑制A549细胞的生长,而在同一时间不同组别比较联合用药组细胞生长抑制率较单用药组明显增加[12h:35.51%vs21.63%,19.59%;24h:43.19%vs32.39%,30.60%;36h:54.85%vs38.83%,37.35%;48h:60.69%vs45.79%,43.84%;60h:68.92%vs50.60%,50.20%;72h:74.54%vs59.23%,57.82,P<0.05];(2)5-aza-dC和TSA能够诱导A549细胞凋亡,且联合用药组A549细胞凋亡率(75.35±1.46)%明显高于5-aza-dC(49.76±1.32)%(P<0.05)和TSA组(50.88±1.06)%(P<0.05);(3)5-aza-dC和TSA能够上调C/EBPαmRNA的表达,联合用药组中C/EBPαmRNA表达量(0.581±0.024)明显高于5-aza-dC组(0.402±0.016)(P<0.05)和TSA组(0.394±0.031)(P<0.05),有统计学意义;(4)5-aza-dC组与TSA组在抑制A549细胞生长、诱导细胞凋亡、增强C/EBPαmRNA的表达方面比较,差别均无统计学意义(P>0.05)。结论与单用5-aza-dC或TSA相比,联合应用两种药物能够更好的抑制人肺腺癌A549细胞的增殖、诱导细胞凋亡和增强C/EBPα基因mRNA的表达。

5-氮-2′-脱氧胞苷对胆管癌细胞株生长周期及凋亡的影响

目的 研究甲基化抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷对胆管癌细胞株生长周期及凋亡的影响,初步探讨其应用于临床治疗的可能性。方法 应用MTT法检测不同浓度的5-氮-2’-脱氧胞苷对胆管癌细胞株QBC939存活率的影响,应用流式细胞术检测5-氮-2’-脱氧胞苷对QBC939细胞生长周期及凋亡率的影响。结果 5-氮-2’-脱氧胞苷在浓度为0.5μmol/L时即可以抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,24 h半数致死量为5.0 μmol/L,细胞周期中处于G0/G1期的细胞比例增多,凋亡的发生率增高,而且以上作用与药物浓度及作用时间在一定范围内呈正相关。结论 5-氮-2’-脱氧胞苷可能通过消除某些抑癌基因的启动子甲基化状态,使其重新表达而抑制胆管癌细胞的生长,并促进其凋亡。

5-氮-2′-脱氧胞苷选择性上调癌-睾丸抗原在腺样囊性癌细胞系的表达

目的:探讨5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5DC)对癌-睾丸抗原(cancer-testis anti-gens,CTAs)在腺样囊性癌细胞株ACC-2(低转移株)和ACC-M(高转移株)中表达的调节作用。方法:采用RT-PCR检测5DC处理后6种癌-睾丸抗原(MAGE-1,MAGE-C2,NY-ESO-1,SCP-1,KU-CT-1,SLLP-1)在ACC-2和ACC-M中的表达情况;采用免疫细胞化学染色观察其中3种抗原在蛋白水平的表达。结果:RT-PCR显示:正常对照组,MAGE-1和MAGE-C2在ACC-2和ACC-M中均表达,而NY-ESO-1仅在ACC-M中表达。不同浓度的5DC处理后,MAGE-1、MAGE-C2在ACC-2和ACC-M中的表达增强(P<0.05);NY-ESO-1表达无明显改变。免疫细胞化学结果显示:5DC处理后,MAGE-1和MAGE-C2在两个细胞系的表达增强。结论:5DC可选择性增强MAGE-1和MAGE-C2在ACC-2和ACC-M的表达,提示MAGE-1和MAGE-C2可作为腺样囊性癌的潜在靶向抗原。

5-氮-2′-脱氧胞苷对人脑星形细胞瘤细胞侵袭力的影响及机制探讨

目的观察特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人脑星形细胞瘤细胞侵袭力的影响,并探讨其机制。方法分别将终浓度为0、1×10-7、5×10-7、1×10-6mol/L 5-Aza-CdR加入星形细胞瘤细胞作用48 h,采用Boyden小室观察星形细胞瘤细胞的侵袭力,采用明胶酶谱分析法检测星形细胞瘤细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达变化。结果随着5-Aza-CdR浓度的升高,星形细胞瘤细胞穿膜细胞数呈升高趋势,proMMP-9及MMP-9的表达呈增高趋势(P均<0.05)。结论5-Aza-CdR可增强人脑星形细胞瘤细胞侵袭力,可能与DNA低甲基化上调MMP-9表达有关。

5-氮-2′-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞凋亡及DNA错配修复基因表达的影响

目的:观察5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,又称5-aza-CdR)对卵巢癌细胞SKOV3和3AO增殖凋亡及DNA错配基因hMLH1和hMLH2表达的影响。方法:以特异性甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR0.5、5、50μmol/L处理人卵巢癌细胞SKOV3和3AO3d,继续常规培养7d后,采用MTT比色法观察细胞经药物处理前后的增殖活性,用流式细胞术分析5-aza-CdR对细胞凋亡影响,以半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞经5-aza-CdR处理前后DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2mRNA表达水平的改变。结果:人卵巢癌细胞SKOV3和3AO经5-aza-CdR处理后,与对照组比较,0.5、5、50μmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随着5-aza-CdR浓度增加,细胞增殖速度下降。SKOV3经5-aza-CdR0.5、5、50μmol/L处理后细胞的凋亡率分别为(10.59±1.57)%、(17.52±1.72)%、(34.10±1.45)%,3A0经0.5、5、50μmol/L5-aza-CdR处理后细胞的凋亡率分别为(11.11±2.21)%、(17.24±1.11)%、(26.53±2.00)%,与对照组相比均有统计学意义(P<0.01);且凋亡率与剂量成正相关(FSKOV3=227.6,PSKOV3<0.01;F3AO=108.4,P3AO<0.01)。经5-aza-CdR处理后的两株卵巢癌细胞中hMLH1和hMLH2的mRNA表达量有不同程度的增加(P<0.01),且与药物存在剂量依赖性。结论:在人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中,5-aza-CdR可部分逆转hMLH1和hMLH2的失活,恢复其生长调控功能,抑制肿瘤细胞生长,并诱导细胞凋亡。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对苯并[a]芘致海马神经元毒性的保护作用

目的探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-cdR)对苯并[a]芘(B[a]P)致海马神经元毒性的保护作用。方法体外培养海马神经元至第5天,观察并鉴定细胞。实验设立对照组,B[a]P组(20μmol/L B[a]P)和B[a]P+5-Aza-cdR组(20μmol/L B[a]P+10μmol/L 5-Aza-cdR)。观察细胞形态;检测细胞活力、DNA甲基转移酶蛋白和基因表达水平;测定细胞中的总甲基化水平和细胞凋亡情况。结果与对照组比较,B[a]P组海马神经元活性降低(P<0.05);细胞凋亡率升高(P<0.05);DNMT3A、DNMT3B基因和DNMT1、DNMT3A蛋白表达水平上升(P<0.05);总甲基化水平升高(P<0.05)。与B[a]P组比较,B[a]P+5-Aza-cdR组提高了海马神经元活性(P<0.05);降低细胞凋亡率(P<0.01);DNMTs基因和蛋白表达水平明显下降(P<0.05);总甲基化水平下降(P<0.01)。结论5-Aza-cdR对B[a]P诱导的海马神经元损伤有保护作用。

乳腺癌组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达水平与患者术后5年内生存的相关性

目的探究乳腺癌(BC)组织长链非编码RNA癌易感性候选基因2(lncRNA CASC2)、微小RNA-532-3p(miR-532-3p)表达与患者术后5年内生存的相关性。方法选择2015年1月—2018年6月大同市第五人民医院普通外科收治BC患者127例,术中收集BC组织及癌旁正常组织,荧光定量PCR法检测BC组织和癌旁正常组织中lncRNA CASC2、miR-532-3p表达;对BC患者术后进行为期5年的随访,记录患者5年内生存和死亡情况。比较癌旁正常组织和BC组织lncRNA CASC2及miR-532-3p表达,BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达在不同临床病理特征中的差异,生存组和死亡组临床病理特征和BC组织中lncRNA CASC2及miR-532-3p表达的差异。分析BC组织lncRNA CASC2、miR-532-3p表达的相关性;BC组织中lncRNA CASC2和miR-532-3p表达与术后5年内生存的关系;影响BC患者术后5年内生存的因素;lncRNA CASC2、miR-532-3p对BC患者术后5年内生存的预测价值。结果BC组织中lncRNA CASC2表达水平低于癌旁正常组织,miR-532-3p表达水平高于癌旁正常组织(t/P=38.239/<0.001,49.406/<0.001);肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、淋巴结转移者比例lncRNA CASC2低表达组高于高表达组,而miR-532-3p低表达组低于高表达组(lncRNA CASC2:χ^(2)/P=17.361/<0.001、17.052/<0.001、14.694/<0.001、13.173/<0.001;miR-532-3p:χ^(2)/P=10.733/0.001、9.813/0.002、10.134/0.001、7.444/0.006);127例BC患者术后随访5年,生存99例(生存组),死亡28例(死亡组),肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、淋巴结转移者比例及miR-532-3p表达水平死亡组高于生存组,而lncRNA CASC2表达水平死亡组低于生存组[χ^(2)(t)/P=5.211/0.022、27.149/<0.001、27.990/<0.001、4.590/0.032、19.155/<0.001、10.818/<0.001];BC组织中lncRNA CASC2与miR-532-3p表达呈负相关(r/P=-0.561/<0.001);lncRNA CASC2高表达组BC患者术后5年内总生存率为89.23%(58/65),高于lncRNA CASC2低表达组66.13%(41/62)(χ^(2)/P=9.854/0.002);miR-532-3p高表达组BC患者术后5年内总生存率为65.57%(40/61),低于miR-532-3p低表达组89.39%(59/66)(χ^(2)/P=10.466/0.001);肿瘤直径≥2 cm、TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移、lncRNA CASC2低表达、miR-532-3p高表达均是影响BC患者术后5年内生存的独立危险因素[HR(95%CI)=2.255(1.192~4.263)、2.143(1.252~3.666)、3.089(1.386~6.887)、2.219(1.223~4.026)、2.606(1.174~5.788)、2.855(1.592~5.120)];lncRNA CASC2、miR-532-3p及二者联合预测BC患者术后5年内生存的AUC分别为0.840、0.852、0.908,二者联合预测的AUC大于lncRNA CASC2、miR-532-3p各自单独预测的AUC(Z/P=2.246/0.025、2.033/0.042)。结论BC组织中lncRNA CASC2表达下调,miR-532-3p表达上调,且术后5年内死亡的BC患者较存活患者变化更显著,二者表达与临床病理特征相关,对预测BC患者术后5年内生存情况价值较高。

中药单体川楝素介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制研究

目的 探究中药单体川楝素介导的hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制。方法 选取南通第三人民医院乳腺外科于2020年4月—2022年4月收治的乳腺癌患者40例为研究对象,患者均在医院进行手术,取患者乳腺癌及癌旁组织作为实验材料,采用定量荧光聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)对其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平进行测定;取乳腺癌细胞株T47D细胞,加入不同浓度的川楝素,比较不同浓度川楝素对细胞增殖的抑制率;对所选乳腺癌细胞株系进行预处理,A组不进行特殊处理,B组中加入0.5μmol/L的川楝素,C组对乳腺癌细胞进行转染,敲除hsa-miR-671-5p,并向其中加入0.5μmol/L的川楝素,比较其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平,上述实验重复3次。结果 与正常癌旁组织相比较,乳腺癌组织中提取的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA在乳腺癌组织中均低表达,具有正相关性(r=0.965,P<0.05)。随着川楝素浓度的升高,乳腺癌细胞增殖的抑制率逐渐升高,且与0μmol/L浓度组比较均具有统计学意义(P<0.05)。对数据进行处理,得出乳腺癌细胞在24 h及48 h的半数抑制浓度分别为0.78μmol/L、0.49μmol/L。与A、C组相比较,B组的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A、C组相比较,B组24 h及48 h侵袭细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间侵袭细胞数量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 川楝素通过介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控hsa-circ-0025583及SYNGR2水平,进而影响乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力,抑制乳腺癌细胞的生长。

circFAT1调节miR-211-5p/CCND2轴对糖尿病心肌病大鼠心肌损伤的影响

目的探讨circFAT1对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌损伤的影响及对miR-211-5p/细胞周期蛋白D2(CCND2)轴的调节机制。方法利用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素建立DCM大鼠模型,并随机分为DCM组、circ-NC组、circFAT1组、circFAT1+激动剂-NC组和circFAT1+miR-211-5p激动剂组,以喂食普通饲料的大鼠作为对照组,每组20只。实时PCR检测心肌组织中circFAT1、miR-211-5p、CCND2水平;Western blotting检测心肌组织CCND2蛋白表达;生化分析仪检测大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平;心脏超声检测大鼠心功能;HE和Masson染色观察心肌组织病理形态;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证circFAT1、miR-211-5p、CCND2之间的靶向关系。结果与对照组相比,DCM组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)水平降低(P<0.05),FBG、TC、TG、左心室舒张末期直径(LVEDd)、左心室收缩末期直径(LVEDs)、胶原容积分数(CVF)、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均升高(P<0.05);与DCM组相比,circFAT1组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,LVEF、LVFS水平升高(P<0.05),FBG、TC、TG、LVEDd、LVEDs、CVF、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05);miR-211-5p激动剂逆转了circFAT1对DCM心肌损伤的缓解作用,且CCND2 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论circFAT1通过调控miR-211-5p/CCND2轴减轻DCM大鼠心肌组织损伤。

miR-93-5p通过PI3K/AKT通路调控HepG2细胞自噬

目的:探究miR-93-5p对HepG2细胞增殖、自噬、葡萄糖消耗以及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路的影响。方法:高浓度葡萄糖诱导构建胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,设计合成miR-93-5p inhibitor和NC,结合自噬抑制剂3-MA,将细胞分为Control组、IR组、IR+inhibitor NC组、IR+inhibitor组、IR+3-MA+inhibitor组。CCK8法检测各组细胞增殖活力,试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和细胞糖原合成情况,Western-Blot法检测细胞自噬基因微管相关蛋白1轻链3(autophagy genes microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-I、LC3-II、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)蛋白、PI3K/AKT通路蛋白(AKT、p-AKT)的表达。结果:与对照组相比,IR组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达下降(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均增加(P<0.01)。与IR组和IR+inhibitor NC组相比,IR+inhibitor组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达增加(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均下降(P<0.01)。与IR+inhibitor组相比,3-MA能逆转miR-93-5p inhibitor的作用。结论:miR-93-5p通过PI3K/AKT通路促进HepG2细胞自噬,进而抑制胰岛素抵抗,缓解糖尿病造成的机体损伤。

LncRNA LBX2-AS1调节miR-873-5p/G6PD轴对胃癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)瓢虫同源盒2反义RNA1(LBX2-AS1)调节微小RNA-873-5p(miR-873-5p)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)轴对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:以SGC7901细胞为研究对象,将其随机分为Control组、sh-NC组、sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组、sh-LBX2-AS1+miR-873-5p inhibitor组;qRT-PCR法检测LncRNA LBX2-AS1、miR-873-5p、G6PD的表达;MTT法和平板克隆实验检测SGC7901细胞增殖;划痕实验检测SGC7901细胞迁移;Transwell实验检测SGC7901细胞的侵袭;Western blot检测SGC7901细胞中MMP-2、PCNA、MMP-9、G6PD蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测LncRNA LBX2-AS1与miR-873-5p,miR-873-5p与G6PD之间的相互作用;小鼠荷瘤实验验证敲除LncRNALBX2-AS1对CC肿瘤生长及G6PD表达的影响。结果:sh-LBX2-AS1组SGC7901细胞中A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、LncRNA LBX2-AS1、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达低于sh-NC组、Control组,miR-873-5p表达高于sh-NC组、Control组(P<0.05);与sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组相比,sh-LBX2-AS+miR-873-5p inhibitor组miR-873-5p表达降低,A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.05)。LncRNA LBX2-AS1靶向负调控miR-873-5p,miR-873-5p靶向负调控G6PD。实验组移植瘤质量、体积、Ki-67阳性率、G6PD阳性率低于对照组(P<0.05)。结论:敲除LncRNA LBX2-AS1可能抑制GC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能是调节miR-873-5p/G6PD轴实现的。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

2型糖尿病合并甲状腺功能亢进患者血清Sema 5A、IGFBP-3水平与糖代谢指标的相关性分析

目的分析2型糖尿病合并甲状腺功能亢进(以下简称甲亢)患者血清信号素5A(Sema 5A)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)水平与糖代谢指标的相关性。方法选取2021年6月至2022年6月邯郸市中心医院收治的73例2型糖尿病合并甲亢患者作为合并组,56例单纯2型糖尿病患者作为糖尿病组,另选取同期在邯郸市中心医院体检的68例健康者作为对照组。比较对照组、糖尿病组、合并组血清Sema 5A、IGFBP-3水平,比较糖尿病组、合并组临床资料[体质量指数、糖尿病病程、空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、胰岛素(FIN)、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)、三碘甲腺原氨酸(T_(3))、甲状腺素(T_(4))、游离三碘甲腺原氨酸(FT_(3))、游离甲状腺素(FT_(4))、促甲状腺素(TSH)、促甲状腺激素受体抗体(TRAB)及甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAB)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]。采用多因素Logisitic回归分析2型糖尿病并发甲亢的危险因素,采用Pearson相关分析2型糖尿病合并甲亢患者血清Sema 5A、IGFBP-3水平与糖代谢指标的相关性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Sema 5A、IGFBP-3对2型糖尿病合并甲亢的诊断价值。结果合并组血清Sema 5A、IGFBP-3水平高于对照组和糖尿病组,且糖尿病组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。合并组糖尿病病程长于糖尿病组,血清HOMA-IR、FIN、HbA1c、T_(3)、T_(4)、FT_(3)、FT_(4)、TRAB、TPOAB水平高于糖尿病组,TSH水平低于糖尿病组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logisitic回归分析结果显示,HOMA-IR、TPOAB、Sema 5A、IGFBP-3水平升高,TSH水平降低为2型糖尿病并发甲亢的危险因素(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,2型糖尿病并发甲亢患者血清Sema 5A、IGFBP-3水平与HOMA-IR、FBG、2 h PG、FIN、HbA1c、HDL-C水平均呈正相关(P<0.05)。2型糖尿病并发甲亢患者血清Sema 5A、IGFBP-3水平与LDL-C水平呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Sema 5A、IGFBP-3诊断2型糖尿病合并甲亢的曲线下面积(AUC)分别为0.854、0.804,2项指标联合诊断的AUC为0.900,且2项指标联合诊断的AUC高于Sema 5A、IGFBP-3单独诊断的AUC(Z联合-Sema 5A=2.156,P=0.043;Z联合-IGFBP-3=2.873,P=0.004)。结论2型糖尿病合并甲亢患者血清Sema 5A、IGFBP-3水平升高,且二者与糖代谢指标密切相关。

长链非编码RNA DLEU2通过miR-30a-5p/CD61对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸淋巴细胞白血病缺失基因2(LncRNA DLEU2)通过靶向微小核糖核酸(miR)-30a-5p/整合素β3(CD61)对人结肠癌SW1116细胞生长和增殖的影响。方法取人结肠癌细胞株SW1116培养并随机分为si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-30a-5p mimics组、miR-30a-5p抑制剂阴性对照(NC inhibitor)+si-LncRNA DLEU2组及miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组,同时设置未转染细胞为空白组;转染48 h后,采用荧光显微镜检测细胞转染效率,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞LncRNA DLEU2和miR-30a-5p表达、CD61、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、c-Myc mRNA和蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR检测LncRNA DLEU2与miR-30a-5p的靶向关系、miR-30a-5p与CD61的靶向关系;制作雄性胸腺BALB/c裸鼠异种移植瘤模型评估LncRNA DLEU2对肿瘤生长的影响。结果si-NC组、si-LncRNA DLEU2组、miR-NC组、miR-30a-5p mimics组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组、miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组转染效率均>85%;与空白组及si-NC组比较,si-LncRNA DLEU2组、NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组增殖抑制率上升(P<0.05),DLEU2表达下降(P<0.05),miR-30a-5p表达增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达减少(P<0.05);与NC inhibitor+si-LncRNA DLEU2组比较,miR-30a-5p inhibitor+si-LncRNA DLEU2组细胞增殖抑制率下降(P<0.05),miR-30a-5p表达下降,CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达上升(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-30a-5p mimics组miR-30a-5p表达、增殖抑制率增加(P<0.05),CD61、CyclinD1、c-Myc mRNA和蛋白表达下降(P<0.05);LncRNA DLEU2可直接靶向调控miR-30a-5p、miR-30a-5p可直接靶向调控CD61,抑制LncRNA DLEU2表达可降低BALB/c裸鼠移植瘤生长(P<0.05)。结论沉默LncRNA DLEU2可抑制人结肠癌细胞株SW1116生长和增殖,其机制可能与靶向miR-30a-5p抑制CD61表达,抑制CyclinD1、c-Myc表达相关。

miR-210-5p对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响及作用机制分析

[目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖能力,茜素红染色观察钙盐矿化结节形成能力,用实时荧光定量PCR检测miR-210-5p水平及成骨分化标志物BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA表达水平,进而用蛋白免疫印迹法检测BMP2、Smad1、Smad5和Runx2蛋白表达水平.[结果] miR-210-5p模拟物组细胞增殖活力显著升高(P<0.01),矿化结节显著增加,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);miR-210-5p抑制物组细胞增殖活力显著降低(P<0.01),矿化结节显著降低,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).[结论] miR-210-5p可能通过调控BMP2/Smad信号通路促进小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化.