肉制品检验中未被0.001%2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色菌落的研究

目的鉴定1批肉制品样品中不能被2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride,TTC)染色菌落的菌落。方法依照GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物检验菌落总数测定》和GB 29921-2013《食品安全国家标准食品中致病菌限量》对样品前处理后进行分离纯化,采用VITEK 2以及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪进行检测鉴定。结果经VITEK 2和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪鉴定,肉制品样品中不能够被0.001%TTC染色的菌落分别为鲁氏不动杆菌和奇异变形杆菌。结论在出现TTC无法染色的情况下,应该采用适当的菌种鉴定方法对样品的颗粒和菌落进行详细区分,进而防止漏检和误检。

2,3,5-三苯基氯化四氮唑浓度对细菌菌落总数测定的影响

目的了解2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)浓度对细菌菌落总数测定的影响,以规范该法在食品细菌菌落总数测定中的应用。方法采用细菌定量培养的方法,观察含不同浓度TTC营养琼脂培养基对不同细菌生长形成菌落数的影响。将不同稀释度的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌纯培养物各1mL,分别依次接种到TTC质量浓度分别为0.02、0.05、0.10g/L的平板计数琼脂中,同时设空白对照和盐水试剂对照,观察菌落生长状况。结果大肠埃希菌在不同TTC浓度培养基中均能正常生长,其形成菌落数不受影响。培养基中含TTC质量浓度≥0.05g/L对金黄色葡萄球菌菌落数形成有明显影响,≥0.02g/L对蜡样芽胞杆菌的菌落数形成有明显影响。结论培养基中含TTC浓度≤0.10g/L对大肠埃希菌生长基本无影响,>0.02g/L对金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌生长均会产生影响。

2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在支原体培养中的应用研究

为了分析细菌培养指示剂2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)在支原体培养中的应用,笔者将牛支原体、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、绵羊肺炎支原体、鸡毒支原体、肺炎支原体分别接种于含有TTC的改良Thiaucourt’s液体培养基(TTC-MTB)和改良Thiaucourt’s固体培养基(TTC-MTA)中,同时以常规酚红指示剂培养基作为对照,观察支原体在2种培养基中的生长情况,并筛选TTC在培养基中的最适指示浓度。结果显示,与常规酚红指示剂相比较,TTC有更为灵敏的培养指示效果;在固体培养基中,TTC指示的支原体红色菌落更有利于菌落的计数及形态的观察;TTC的最佳使用浓度为0.2 mg/mL。本研究可为支原体培养和优化疫苗生产工艺提供参考。

利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)测定细胞活力的方法与应用

目的：利用细胞内脱氢酶对2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）的催化作用建立比目前常用的3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四氮唑（噻唑蓝，MTT）法更可靠的测定细胞活力的方法。方法使用不同浓度的TTC溶液测定细胞活力，并确定TTC的有效浓度范围。在计算所测定值与细胞数量函数关系的基础上，通过与传统测定细胞活力的MTT法进行比较，分析该方法的可行性。结果0．5％～1．0％浓度范围内的TTC溶液可用来测定细胞活力，测定值与细胞数量之间存在线性关系，与MTT法得到的结果基本一致，可避免MTT法测定过程中来自于细胞培养体系中其他抗氧化物质的非特异性干扰。结论 TTC可用于测定细胞活力，可替代常规的MTT法，具有操作简便，费用经济，结果可靠等优点。

不同2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色方式对心肌梗死面积检测的对比

目的比较应用不同2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色方式对心肌梗死面积的检测结果。方法实验在中国医科大学完成,采用Langendorff离体心脏灌注装置建立全心缺血模型。将20只健康SD大鼠（雌雄不拘、2周龄,体重250~300 g）按随机数字表法分为两组,每组10只。A组：TTC经主动脉根部直接灌注,B组：心脏切片后染色。两组鼠心均平衡10 min,阻断灌注30 min,复灌30 min。染色后观察心肌切片改变,计算心肌梗死面积。结果 A组和B组均能很好地对梗死心肌进行标记,且两组心肌梗死面积差异无统计学意义（45.80%±6.07%vs.47.40%±6.80%,P〉0.05）;A组心肌组织切片平整,颜色对比更明显,计算面积较准确,形态美观;而B组心肌组织切片凸凹不平,较难进行后续处理,计算面积不准确,形态不美观。结论 TTC染色是一种较为经济、快捷检测心肌梗死范围的染色方法,且经主动脉根部直接灌注染色法较心脏切片后染色法更简单、易操作,节省费用,染色效果好,染色后标本更平整、美观,有利于拍照和计算心肌的梗死面积。

改进的TTC染色法显示大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的比较应用不同2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色方法对大鼠心肌缺血再灌注损伤后梗死面积的检测效果。方法将20只SD大鼠（雄性,8周龄,体重250~300 g）按随机数字表法分为两组,每组10只。A组：传统TTC染色法组;B组：改进后的TTC染色法组,分别进行大鼠心肌染色,随后计算心肌梗死面积及测定血清cTnI浓度水平。结果 A组和B组均能较好地标记梗死心肌;A组和B组心肌梗死面积百分比无统计学差异（48.69%±5.37%vs.47.41%±3.28%,P〉0.05）;A组和B组血清cTnI浓度水平无统计学差异（4.51±0.88 ng/mL vs.4.70±0.71 ng/mL,P〉0.05）;但B组心肌切片染色色泽对比度及心肌非梗死区与梗死区区分度均高于A组。结论改进后的心肌TTC染色法采用在体染色,不仅操作简便,节省了实验时间和经费,而且提高了染色效果,能更准确地反映心肌缺血再灌注损伤的程度。因此改进后的心肌TTC染色法是一种经济、简便、快捷、高效的染色方法。

在体和离体心肌TTC染色的对比研究

比较在体和离体2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色方式对心肌梗死面积的效果。A组:TTC下腔静脉直接注射染色;B组:心脏切片后染色,染色后计算心肌梗死面积。A组和B组均能较好地标记梗死心肌,且两组梗死面积差异无统计学意义,(44.50±3.10)%VS(46.29±3.2)6%,(P>0.05);经下腔静脉直接注射TTC染色法较心脏切片后染色法节省时间和用量,染色效果更好。

应用TTC法快速测定北细辛种子生活力

研究北细辛种子生活力的快速测定方法,为北细辛种子利用及安全保存提供技术支撑。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法,设置不同的浸种时间、TTC浓度、染色温度、染色时间的正交试验,对北细辛种子生活力进行测定。影响北细辛种子生活力测定值大小的因素依次为TTC浓度>染色温度>染色时间>浸种时间;最佳条件:温水浸种6h、0.1%TTC溶液、30℃避光染色18h;最佳反应条件下测得种子生活力与发芽率实测值很相近。TTC法可作为北细辛种子生活力测定的标准方法,对北细辛栽培及种质资源保存具有重要意义。

降纤酶对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的作用

目的探讨降纤酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法用线栓法将易卒中型肾血管性高血压大鼠(108只)复制成一侧大脑中动脉闭塞模型,将模型分为降纤酶组和对照组,每组各54只大鼠。给降纤酶组大鼠静脉注射降纤酶,对照组注射等渗盐水,分别在缺血3h再灌注3、6、24h,缺血6h再灌注3、6、24h进行神经功能评分并处死大鼠,每个时间点为9只大鼠,假手术组8只大鼠。用2,3,5氯化三苯基四氮唑染色,计算脑梗死范围,HE染色观察梗死灶边缘区的病理形态,同时以免疫组织化学方法检测尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)和纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)1蛋白的表达。结果降纤酶组与对照组比较,神经功能评分和梗死灶体积均降低,uPA蛋白表达均增加,在缺血3h再灌注3、6、24h和缺血6h再灌注3、6、24h,降纤酶组的灰度值分别为1.240±0.027、1.9±1.1、12±5、2.3±1.2、6.4±2.2和20±7,而对照组分别为1.320±0.043、2.2±1.0、16±7、3.8±1.6、8.3±3.7和24±10,PAI1蛋白表达均减少,并且脑出血发生率低。结论降纤酶有减轻脑缺血再灌注损伤的作用,其可能的机制是减少uPA对梗死灶边缘区微血管基底膜及细胞外间质的降解。

通心络对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨通心络对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法将31只雄性Wistar大鼠,根据不同给药方案随机分为24h对照组(7只)、24h通心络组(7只)、5d对照组(7只)、5d通心络组(7只)以及假手术组(3只)。各组在造模前用等渗盐水或通心络灌胃预处理7d。依据线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞90min脑缺血再灌注模型。观察不同时间点的神经功能缺失评分,计算2,3,5氯化三苯基四氮唑染色下的梗死体积。结果脑缺血再灌注24h后的梗死体积对照组为(94.4±19.9)mm3,通心络组为(72.1±13.4)mm3;神经功能缺失评分对照组为(3.3±0.6)分,通心络组为(2.6±0.6)分。再灌注5d后的梗死体积对照组为(123.9±18.6)mm3,通心络组为(100.2±12.8)mm3;神经功能缺失评分,对照组为(2.1±0.4)分,通心络组为(1.2±0.4)分,两组比较,差异均有显著意义(P<0.01～0.05)。结论通心络对大鼠大脑中动脉阻塞后的脑缺血再灌注损伤可能具有保护作用。

芹菜素对大鼠脑缺血再灌注后的转化生长因子-β_1表达的影响

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在大鼠脑缺血再灌注后不同时间的表达变化及芹菜素对其表达的影响。方法采用改良线栓法建立大鼠脑缺血再灌注后不同时间损伤模型。随机分为假手术组、模型组、芹菜素组和地塞米松组,各手术组按再灌注时间不同又分为再灌注6 h组、24 h组、72 h组、7 d组4个亚组。各组麻醉清醒后均给予神经行为学评分,每组1只,大鼠予2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色观察脑梗死灶,6只免疫组化法测定转化生长因子-β1的表达。结果在芹菜素72 h组神经行为学评分低于模型72 h组(P<0.05);各手术组均出现白色梗死灶;缺血再灌注后TGF-β1表达增加,于24、72 h达高峰,芹菜素组能显著提高TGF-β1的表达,与模型组比较差异显著(P<0.05)。结论芹菜素可增加脑缺血再灌注后TGF-β1的表达,提示芹菜素可能通过TGF-β1促进脑组织损伤的修复,达到神经损伤的保护作用。

一种应用振动切片技术的改良TTC切片染色法

目的探索一种更为合理便捷且可相对精准测量小鼠局灶性脑缺血模型梗死灶体积的2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)切片染色法。方法光化学栓塞法制备小鼠局灶性脑缺血模型,使用激光散斑检测缺血,TTC染色法对梗死灶进行染色评估。改良的TTC切片染色法是使用振动切片机切片后将脑片放入TTC染色液染色;而传统的TTC切片染色法是将小鼠脑组织先置于-20℃冰箱冷冻40 min,然后直接目测切片或使用小鼠脑模具手动切片后放入TTC染色液进行染色,最终将两种方法的染色效果进行对比。结果与传统的TTC切片染色法相比,使用振动切片机的改良TTC染色法降低了小鼠脑片破碎损伤的概率,对其脑细胞的损伤更小,进而最大程度保持了脑片的完整性;并且非梗死区域脑组织染色均匀,可更清晰地凸显梗死灶的范围,成功实现了微米级别厚度的小鼠脑片制备,使其梗死灶体积的计算更加精准客观。结论针对小鼠局灶性脑缺血模型,使用振动切片技术改良的TTC染色法明显优于传统的TTC切片染色法,不仅染色效果更为均匀,且可较为精确地计算小鼠脑缺血梗死灶的体积。

TTC在乳及乳制品菌落总数检测中的应用

检测乳及乳制品菌落总数，为达到菌落在培养基中清晰可辨，在平板计数琼脂培养基中添加2，3，5－三苯基氯化四氮唑（TTC）。以灭菌乳、发酵乳、冰淇淋为样品基质，分别加入适当菌含量的大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、枯草芽胞杆菌工作菌悬液，制备适当浓度的TTC平板计数琼脂，同时以不添加TTC的平板计数琼脂作为对照，对同一样品进行菌落计数并同国标方法结果进行对比。TTC平板计数琼脂终浓度在0.001%-0.002%时能够使菌落显色，且与不添加TTC的对照组对比结果一致。在检测成分复杂的乳及乳制品样品时添加适宜浓度的TTC，有助于菌落的辨认，能够提高检验人员菌落计数的准确性，可用于检测乳及乳制品中菌落总数。

TTC在菌落总数检测中的应用探讨

目的:在检测样品中的菌落总数时,为了区分平板上生长的菌落与样品颗粒,在平板计数琼脂中添加2,3,5-三苯基氯化四氮唑,观察不同浓度的2,3,5-三苯基氯化四氮唑对菌落计数的影响。方法:根据国标《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》(GB 4789.2—2016),在每100 mL PCA琼脂培养基中分别添加0.05 mL、0.10 mL、0.15 mL、0.20 mL、0.25 mL、0.30 mL、0.35 mL、0.40 mL和0.50 mL 1%的2,3,5-三苯基氯化四氮唑,并同时将不添加2,3,5-三苯基氯化四氮唑溶液的PCA琼脂培养基作为对照,观察菌落生长情况。结果:当100 mL平板计数琼脂中2,3,5-三苯基氯化四氮唑含量在2.0~3.5 mg时,实验中所选取的标准菌株菌落能着色且生长状态良好。结论:培养基中2,3,5-三苯基氯化四氮唑含量过低,细菌不易着色;过高,会抑制细菌生长,影响对样品中菌落结果的判断。

呼吸缺陷型啤酒酵母菌株的重离子束辐照诱变筛选及其线粒体的限制性酶切分析

利用单核能为5.19MeV/u的22Ne5+辐照啤酒酵母菌株,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl-2H-Tetrazoliumchloride,TTC)筛选培养基快速筛选呼吸缺陷型酵母菌株。通过一种新型而简便的限制性酶切分析手段,发现辐照后的呼吸缺陷型酵母菌株线粒体DNA发生明显变化,主要表现在与对照相比线粒体DNA出现大片段缺失,同时出现了少量新的条带,并在此基础上初步探讨离子束辐照诱变产生呼吸缺陷型酵母菌株的诱变机理。

小鼠脑片Formazan定量测量方法评价缺血性损伤及神经保护作用

目的 建立一种定量测量 2 ,3,5 三苯基四氮唑(TTC)红色还原产物formazan的方法 ,用于评估离体脑片缺血性损伤以及依达拉奉和ONO 10 78的神经保护作用。方法 以TTC为底物在小鼠脑片生物合成formazan标准品 ,并进行分离、纯化和鉴定。小鼠脑片以缺氧缺糖 (OGD)方法诱导损伤 ,用分光光度法在 4 90nm处测量皮质和纹状体formazan合成量。依达拉奉和ONO 10 78加入培养液 ,观察其神经保护作用。结果 合成并纯化了formazan标准品 ,其纯度为 0 993,线性测量范围在 0 0 5～ 1g·L-1。OGD减少formazan合成 ,与处理时间有依赖性。依达拉奉 (0 0 1～ 1μmol·L-1)抑制OGD诱导的formazan合成减少 ,而ONO 10 78无作用。结论 定量测量formazan是一种评价离体脑片损伤及药物神经保护作用的有用方法。

评价小鼠脑片缺血性损伤及药物保护作用定量方法的改进

目的 :通过改进和完善脑片孵育装置、脑片缺血性损伤的定量指标 ,建立一种简单、准确评价小鼠脑片缺血性损伤及药物神经保护作用的新方法。方法 :设计和制作脑片孵育装置 ,并验证其适用性。以 TTC为底物在小鼠脑片生物合成 formazan标准品 ,并作分离、纯化和鉴定。以缺氧缺糖 (OGD)方法诱导小鼠脑片损伤 ,用分光光度法在 4 90 nm处测量皮质和纹状体 formazan量 ,并观察依达拉奉和 ONO- 10 78的保护作用。结果 :脑片孵育装置具有良好的平行性和可操作性。获得了纯度为 99.3%的 formazan对照品 ,在 0 .0 5～ 1mg/ml间与 4 90 nm的吸收度有良好的线性关系 (r=0 .9997)。随 OGD时间延长 ,脑片皮质和纹状体 formazan量逐渐减少 ;依达拉奉对此有显著保护作用 ,而 ONO- 10 78无效。结论 :脑片孵育新装置及 formazan定量方法效率高、定量准确、简单易行 ,可用于缺血性脑损伤保护药物的筛选。

抑制泛素羧基末端水解酶L1对小鼠脑缺血/再灌注损伤的影响

目的评估抑制泛素羧基末端水解酶L1(UCHL1)对小鼠脑缺血/再灌注损伤的影响。方法将雄性BALB/c小鼠随机分为假手术(sham)组、缺血/再灌注(I/R)组、UCHL1小干扰RNA(siRNA)组和scramble si RNA(control)组,每组10只小鼠。采用小鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)60 min后再灌注24 h建立I/R模型。其中si RNA组和control组在MCAO前24 h将10μl UCHL1 si RNA或scramble si RNA通过侧脑室注入脑内。采用RTPCR和Western blotting方法检测各组小鼠脑组织中UCHL1表达;采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评估各组小鼠脑梗死体积和水肿率;采用神经行为学评分法评估各组小鼠神经症状评分。结果与sham组相比,I/R组缺血半影区UCHL1 m RNA和蛋白水平显著增高(P<0.05);而si RNA组UCHL1蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05);与此同时,I/R组小鼠脑梗死体积、水肿率及神经行为学损伤明显增加,而si RNA组小鼠脑梗死体积和水肿率及神经行为学损伤进一步加重(P<0.05)。结论抑制UCHL1可加重小鼠脑缺血/再灌注损伤。提示,MCAO后诱导UCHL1表达对小鼠脑缺血/再灌注损伤具有保护作用。

^(131)I标记番泻苷A在正常小鼠体内分布和评价心肌活性研究

采用Iodogen法标记番泻苷A得到131I标记番泻苷A溶液,并研究131I标记番泻苷A在小鼠体内分布和用于检测坏死心肌细胞的可行性。将标记物静脉注射到正常小鼠体内,分别在给药4、24、48h后处死,测定标记物在主要脏器的分布。采用结扎左冠状动脉前降支法建立大鼠急性心肌梗死模型,考察131I标记番泻苷A给药24h后,在主要脏器、梗死心肌上分布,并采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色和磷屏自显影对心脏切片进行组织学分析。结果显示:131I标记番泻苷A在小鼠血中清除较快,肾脏的放射性摄取高。131I标记番泻苷A主要分布在大鼠的梗死心肌区域,梗死心肌与正常心肌放射性摄取比为11.9。TTC染色和磷屏自显影对比证明,131I标记番泻苷A对坏死心肌具有较强靶向性。结果表明,131I标记番泻苷A能选择性的在大鼠坏死心肌区域聚集,在心肌梗死诊断方面具有较好的开发前景。

采用磁共振弥散加权成像序列检测大脑中动脉闭塞模型大鼠的下丘脑梗死

目的·检测并分析大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠的下丘脑梗死情况。方法·对15只体质量200～250 g、年龄6～8周的Sprague-Dawley大鼠采用线栓法建立短暂性MCAO大鼠模型,梗死90 min后,拔出栓线进行再灌注。采用磁共振弥散加权成像(diffusion weighted MR imaging,DWI)序列活体检测MCAO模型大鼠再灌注1 h及24 h下丘脑和大脑的梗死体积,分析下丘脑梗死体积与大脑梗死体积的关系;采用2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(2, 3, 5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色检测大鼠再灌注24h下丘脑和大脑的梗死发生情况,并与再灌注24hDWI扫描检测的结果进行对比。结果·15只Sprague-Dawley大鼠成功建立了MCAO/再灌注模型。再灌注24 h,DWI序列检测下丘脑梗死的发生比例为100%,而TTC染色显示下丘脑梗死的比例仅为40%,表明DWI扫描比TTC染色更加敏感(P=0.001)。采用DWI序列检测再灌注1 h及24 h下丘脑梗死的体积分别为(8.59±2.89) mm^3和(11.65±3.19) mm^3;下丘脑梗死体积与大脑梗死体积显著相关(r=0.573,P=0.025),下丘脑梗死体积的变化也与大脑梗死体积的变化显著相关(r=0.554,P=0.032)。结论·采用DWI序列对短暂性MCAO模型大鼠下丘脑梗死进行检测比采用TTC染色更为敏感,且采用DWI序列检测时发现下丘脑梗死体积与大脑梗死体积显著相关。