HPLC法同时测定人血浆中5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷的浓度

目的:建立一种同时测定人体血浆中5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷浓度的HPLC法。方法:以肌苷为内标,血浆样品用硝酸银(10%)沉淀蛋白质,采用C_(18)柱,检测波长为266nm,流动相:0.01mol·L^(-1)磷酸盐(用2mol·L^(-1)氢氧化钠溶液调pH为7.0)-甲醇(96∶4),流速1.0mL·min^(-1),柱温为45℃。结果:5-氟尿嘧啶和5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷分别在0.1～20μg·mL^(-1)(r=0.9997)和0.2～40μg·mL^(-1)(r=0.9997)浓度范围内线性关系良好,最低检测浓度分别为5和10ng·mL^(-1),方法回收率分别为98.2%～101.2%、99.5%～102.3%,日内、日间RSD均小于6%。结论:方法灵敏、快速、准确,适用于临床上测定5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷的血药浓度及药动学的研究。

5-氟尿嘧啶-2’-脱氧核苷经胃左动脉介入灌注后的药代动力学实验研究

目的研究术前经胃左动脉行介入灌注后5鄄氟尿嘧啶鄄2’鄄脱氧核苷(FUDR)的药代动力学变化。方法将20头健康幼猪随机分成2组,分别于术前经胃左动脉行介入化疗(IAC)或全身性静脉化疗(SC)。标本中FUDR的浓度用高效液相色谱(HPLC)法测定。结果IAC组胃壁和胰腺中FUDR的曲线下面积(AUC0鄄49)明显高于SC组;注药后60min时部分胃周淋巴结中的FUDR平均浓度明显高于SC组;在心脏和肾脏中明显低于SC组。结论术前经胃左动脉行介入化疗后,FUDR的药代动力学变化明显优于全身性静脉化疗。本实验为在临床上术前采用经胃左动脉介入化疗治疗胃癌提供了实验性依据。

5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记实验性牙移动大鼠血管内皮祖细胞的研究

目的探讨5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记大鼠外周血血管内皮祖细胞(EPCs)的最佳标记时间与剂量。方法建立实验性牙移动大鼠模型,密度梯度离心分离大鼠外周血EPCs并体外培养;免疫细胞化学、荧光化学鉴定细胞表面抗原;终浓度分别为5、10、15μmol/L的BrdU标记EPCs,并于标记后12、24、48、72、96h检测各组BrdU的标记率,筛选BrdU的最佳标记计量和时间。结果所培养细胞CD34、CD133呈阳性表达,且DiI-ac-LDL、FITC-UEA-1呈双荧光阳性;终浓度为10μmol/L的BrdU标记细胞72h后标记率达(66.8±2.9)%,与5μmol/L组相比差异有统计学意义(P<0.05),与15μmol/L组相比无统计学意义(P>0.05)。各浓度BrdU对细胞均无毒性影响。结论成功分离、培养了实验性牙移动大鼠外周血EPCs;终浓度为10μmol/L的BrdU标记EPCs72h后可获得较高标记率。本实验可为研究EPCs的趋化、分化机制奠定基础。

5-溴脱氧尿嘧啶核苷体外标记肌源性干细胞:最佳浓度及时间

背景:肌源性干细胞移植入动物体内可以修复骨、肌肉、软骨或神经系统的损伤,但要了解其在体内的迁移、增殖及分化的情况,还需要一种有效、安全的标记方法来追踪其在体内的变化。目的:观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞的效果,探讨其最佳标记浓度和时间。方法:采用差速贴壁法体外分离SD大鼠肌源性干细胞,免疫细胞化学染色法鉴定第2代细胞并进行细胞计数。以终浓度5,10,15,20μmol/L的5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞,检测其最佳标记浓度,免疫细胞化学染色法分析其标记率;通过MTT法、锥虫蓝排斥实验观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷对细胞增殖的影响。结果与结论:免疫细胞化学染色显示肌源性干细胞呈Desmin阳性,阳性率为(85.7±6.0)%;经5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的肌源性干细胞与未进行标记细胞在活力和增殖上相比未见明显差异(P>0.05),标记后的肌源性干细胞活细胞率可达(92.3±2.1)%。其中浓度为10,15,20μmol/L标记组标记效果均优于5μmol/L标记组,10μmol/L为最佳工作浓度,最佳标记时间为3d,标记率为(70.9±4.5)%,随时间延长无明显变化。证实应用5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞后,对细胞的活力及增殖情况无影响,标记率也能达到细胞移植对其示踪的要求。

5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷标记大鼠骨髓间充质干细胞的有效性

背景:深入准确地研究骨髓间充质干细胞在体内外增殖、分化的规律,寻找安全、有效、灵敏度高、特异性强、简便的标记活细胞的方法至关重要。目的:探索5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞的有效性及对其增殖能力的影响。方法:全骨髓贴壁法培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞至第3代。将细胞以5×107L-1浓度接种于96孔板中,掺入法加入终浓度为0,10,20,50μmol/L5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷,分别在培养24,48和72h检测5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷标记细胞的阳性率、标记后的细胞形态,并绘制标记细胞的生长曲线。结果与结论:各浓度组标记率均随标记时间延长而升高(P<0.05);各时间点标记率随标记浓度的升高而增加,但其差别无显著性意义(P>0.05)。10μmol/L5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶标记骨髓间充质干细胞72h即可获得良好的标记率。标记前后各组间充质干细胞生长曲线均呈"S"形。说明在实验浓度范围内应用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷体外标记骨髓间充质干细胞有效,不影响细胞的增殖,且10μmol/L5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞72h即可获得良好的标记率。

5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞的技术探讨

①目的 探讨 5 -溴脱氧尿嘧啶核苷 (BrdU)标记骨髓间充质干细胞的可行性。②方法 利用密度为 1 .0 73g mL的Percoll分离骨髓的单核细胞 ,以含 1 0 %胎牛血清的低糖DMEM培养基培养与扩增MSCs细胞 ,纯度可达 95 %左右。用BrdU标记骨髓间充质干细胞 2 4、48、72和 96小时后的检测标记率。③结果 随着标记时间的延长 ,标记率逐渐增高 ,标记 72小时后标记率在 85 %以上。④结论 用BrdU标记骨髓间充质干细胞的最佳时间是 72小时 ,最佳浓度为 1 0 μg mL。

5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记在喉黏膜干细胞的研究

目的以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,5-BrdU)为标记对小鼠喉黏膜可能存在干细胞进行初步研究。方法选取出生3 d的昆明小鼠36只,随机分为A、B和C组,每组12只。A组小鼠皮下注射100μg/g的5-BrdU,B组小鼠皮下注射50μg/g的5-BrdU,C组小鼠皮下注射生理盐水。第8周后分别处死各组小鼠,并取小鼠喉黏膜进行免疫组化检测,计算其标记滞留细胞的阳性率。结果 8周后,注射了5-BrdU的A组与B组小鼠喉黏膜鳞状上皮有标记滞留细胞表达但两组间表达无统计学意义(t=0.06,P=0.949)。C组小鼠喉黏膜鳞状上皮无标记滞留细胞表达。结论 A、B两组小鼠喉黏膜存在标记滞留细胞,此标记滞留细胞具有喉黏膜成体干细胞的一些特点,可能是成体干细胞的来源。

E-5-(2-溴乙烯基)-2'-脱氧尿嘧啶的简便合成方法研究

以2'-脱氧尿嘧啶为原料,在糖苷羟基未保护情况下,经过羟甲基化、选择性氧化、Knoevenagel缩合和Hunsdiecker反应等4步反应,简便地合成了抗病毒药物E-5-(2-溴乙烯基)-2'-脱氧尿嘧啶,为工业化生产提供了可靠的依据.

海绵疣孢菌FIM06031产生的2'-脱氧尿嘧啶核苷

目的研究分离自海绵的菌株FIM06031产生的次级代谢产物。方法系统发育、形态特征和生理生化特性分析鉴定菌株FIM06031到属水平。有机溶媒提取菌株FIM06031发酵液,用正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和高速逆流色谱等方法对菌株次级代谢产物进行分离和纯化。通过紫外光谱、红外光谱、核磁共振氢谱(1H)和碳谱(13C)等分析对化合物FW03101进行结构鉴定。结果与结论菌株FIM06031属于疣孢菌属(Verrucosispora),定名为Verrucosispora sp.FIM06031,其中一个代谢产物FW03101与2'-脱氧尿嘧啶核苷(2'-Deoxyuridine)同质。本文首次报道从疣孢菌中分离到2'-脱氧尿嘧啶核苷。

5-杂氮-2’-脱氧胞苷和5-氟尿嘧啶对食管癌细胞系中E-Cadherin和TIMP3基因甲基化状态及蛋白表达的影响

目的:观察去甲基化药物5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和5-氟尿嘧啶(5-FU)对食管癌细胞系EC1和EC9706(均存在E-Cadherin甲基化改变和TIMP3基因未发生甲基化改变)中2种基因甲基化状态及蛋白表达的影响。方法:用5-Aza-CdR和5-FU分别作用于EC1和EC9706细胞,应用甲基化特异性PCR检测2种药物处理前后细胞中E-Cadherin基因和TIMP3基因的甲基化状态,应用免疫细胞化学方法检测TIMP3和E-Cadherin蛋白的表达。结果:5-Aza-CdR或5-FU处理后两种食管癌细胞系中TIMP3基因仍为非甲基化;5-Aza-CdR作用后,两种食管癌细胞系中E-Cadherin基因的甲基化状态发生了逆转,而5-FU作用后,E-Cadherin基因的甲基化状态无改变。EC1和EC9706经5-Aza-CdR处理后TIMP3蛋白表达无改变,而经5-FU处理后表达增强(P<0.05),EC1和EC9706经两种药物处理后E-Cadherin蛋白表达均增强(F=116.835、119.628、191.700和210.532,P<0.001)。结论:5-Aza-CdR能够有效逆转EC1和EC9706细胞中E-Cadherin基因甲基化状态,并使其蛋白恢复表达;对TIMP3基因的甲基化状态和蛋白表达影响不大。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷与5-氟尿嘧啶的协同抗胃癌作用

目的:观察甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-Deoxycytidine,5-Aza-CdR)对胃癌细胞的作用,并进一步明确他与传统化疗药5-氟尿嘧啶(5-Fu)之间的相互关系.方法:选取野生型P53的胃癌AGS和突变型P53的BGC-823细胞用2.5mol/L5-Aza-CdR分别处理0-96h,MTT检测5-Aza-CdR处理前后细胞活力的变化.为了进一步探讨5-Aza-CdR的抗胃癌作用机制,我们用AnnexinⅤ检测细胞早期凋亡、caspases活性检测凋亡诱导通路及Westernblot检测下游相关蛋白的表达.结果:与未用5-Aza-CdR处理的空白对照组细胞相比,5-Aza-CdR时间依赖性地抑制了胃癌AGS和BGC-823细胞的生长活性(P<0.01).在探讨其作用机制时我们发现,5-Aza-CdR的抗胃癌毒性作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的.但细胞的不同P53状态可触发不同的细胞凋亡路径:在野生型AGS细胞中,5-Aza-CdR的凋亡机制是通过内源性的凋亡通路(caspase9)所介导的;但在BGC-823细胞中,5-Aza-CdR的促凋亡效应是独立于caspase凋亡路径的,因为我们并未观察到5-Aza-CdR处理后细胞caspases活性及蛋白表达水平的增加.尤为有意义的是,当5-Aza-CdR与5-Fu联合应用后,他显著增加了AGS和BGC-823细胞对5-Fu的敏感性.结论:以上数据明显证明5-Aza-CdR可作为一种卓有成效的抗胃癌药,特别是他与传统化疗药的协同抗癌效应,将对5-Aza-CdR未来在临床上的应用提供实践指导意义.

3′,5′-二辛酰基-5-氟尿嘧啶脱氧核苷的合成及性质研究

目的 研究 5 氟尿嘧啶脱氧核苷 (FUdR)的前体药物 3′ ,5′ 二辛酰基 5 氟尿嘧啶脱氧核苷 (DO FUdR)的合成路线、降解规律和体外抗肿瘤细胞增殖活性。方法 通过酯化反应合成了DO FUdR ,采用MS ,NMR等进行了鉴定 ;HPLC测定DO FUdR在不同pH值缓冲液和小鼠组织匀浆中浓度的变化 ,计算其在不同介质中的降解速率常数 ,并测定了DO FUdR的溶解度和分配系数 ;3 H TdR掺入法测定了DO FUdR对U2 5 1星型胶质瘤细胞体外增殖活性的抑制作用。结果 合成化合物为DO FUdR ;其在缓冲溶液和组织匀浆中的降解过程符合表观一级反应 ;与FUdR具有相似的抗胶质瘤细胞增殖活性。结论 DO FUdR是一种值得进行进一步研究和开发的前体药物。

5-炔基-2′-脱氧尿苷的合成及其对掺入到寡核苷酸中的影响

目的为寻找具有较好反义活性的药物 ,设计并合成了一类 2′ 脱氧尿苷 5 位修饰的寡核苷酸。方法以 5′ O (4,4′ 二甲氧三苯甲基 )脱氧碘苷为起始原料 (Ⅰ ) ,用双 (三苯基膦 )氯化钯和碘化亚铜偶合末端炔烃 ,得到一系列相应的 5 炔基脱氧尿苷 (Ⅱ )。化合物Ⅱ的 3′ 位经 (2 氰乙基N ,N 二异丙基 )氯化亚磷酰胺缩合后 ,应用标准固相DNA合成法掺入到寡核苷酸中。结果共合成了 4条 2′ 脱氧尿苷 5 位带炔基修饰的寡核苷酸 ,考察了它们的杂交性质 ,测定了与互补DNA的解链温度Tm 值。结论此类修饰的寡核苷酸与对照的天然寡核苷酸杂交亲和力有一定的提高 ,其中丙炔基修饰的寡核苷酸解链温度Tm 值上升约 2 2℃。

通过核糖核苷酸还原酶M2逆转肝癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药

目的:探讨核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)在肝癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药中的作用,并开发潜在的策略来提高肝癌细胞对5-FU的敏感性。方法:利用Western blot检测5-FU耐药肝癌细胞(BEL/5-FU)与非耐药肝癌细胞(BEL7402)中RRM2蛋白的表达差异;通过用RNA干扰技术下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达或RRM2抑制剂3-AP(Triapine)抑制RRM2活性;CCK-8和集落形成实验用于检测细胞的增殖能力;使用高内涵细胞成像系统仪检测与分析细胞凋亡。结果:BEL/5-FU细胞中RRM2的表达量是BEL7402细胞的2.5倍。RNA干扰技术能够下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达,并使5-FU对BEL/5-FU细胞的半数抑制浓度(IC_(50))下降约50%,同时细胞集落形成能力也显著减弱。3-AP与5-FU联合处理BEL/5-FU细胞,使5-FU对BEL/5-FU细胞的IC_(50)下降约40%,细胞集落形成能力减弱,并促进5-FU导致的细胞凋亡。结论:RRM2与肝癌细胞对5-FU的耐药相关,本研究通过抑制RRM2的活性来逆转肝癌细胞对5-FU的耐药,为提高肝癌的5-FU化疗疗效提供新靶点和新思路。

胸腺嘧啶和5-溴脱氧尿嘧啶诱导小鼠白血病细胞同步化

目的；用胸腺嘧啶和５－溴脱氧尿嘧啶联合作用小鼠红白血病细胞，建立白血血病细胞同步化方法。方法：参照遗传学人外周血细胞同步化方法，细胞生长状态好的加入胸腺嘧啶，培养一定时间后加入５－溴脱氧尿嘧啶培养４．５－５小时后加入积水仙素，常规制备中期染色体标本，根据分裂相的多少了解同步化的效率。结果：经诱导后可获得大量中期染色体分裂相。

N^4-烷基-5-甲基-2′-脱氧胞苷的合成

3′,5′- O-二苯甲酰胸苷在三氯氧磷存在的条件下与 1,2 ,4-三唑缩合可得到 1- (3′,5′- O-二苯甲酰 - β- D-呋喃核糖 ) - 4- (1,2 ,4-三唑 - 1-基 ) - 5 -甲基 -嘧啶 - 2 - (1H) -酮 ,再用不同的胺取代核苷 C4上的三唑基团可制备一系列全新的N4-烷基取代的 5 -甲基胞苷。方法简便 ,收率高。

2'-脱氧-5-氟尿苷的合成工艺改进

目的:改进2'-脱氧-5-氟尿苷的合成工艺。方法:参照文献方法,以氟尿嘧啶为起始原料,经硅醚化、缩合、溴化、氢化和皂化等工艺合成2'-脱氧-5-氟尿苷,并对其关键步骤进行了改进。结果:该合成工艺对2'-脱氧-5-氟尿苷有较高的收率,总收率为34.31%。结论:工艺更趋于合理,操作条件更为简单,三废易于处理,适合于工业化生产。

5-AZA-CdR联合EGCG对HL-60和K562的影响

目的探讨细胞因子INFα和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-AZA-CdR)能否诱导HL-60和K562 Xaf1表达,以及Xaf1表达诱导剂联合表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有协同抗癌作用。方法(1)1000U/mlINFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K56248h,通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达并比较差异。(2)最佳Xaf1表达诱导剂联合EGCG作用于白血病细胞,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位和细胞凋亡的情况。结果(1)随5-AZA-CdR剂量增加,HL-60和K562Xaf1 mRNA表达增加,INFα也能诱导Xaf1表达,以5-AZA-CdR(5μmol/L)的作用最强;INFα和5-AZA-CdR均不影响XIAP mRNA的表达。(2)5-AZA-CdR和EGCG可改变HL-60和K562细胞Bcl-2(Bcl-xl)和Bax的表达,降低线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,二者联合作用被加强。结论(1)INFα和5-AZA-CdR能诱导HL-60和K562Xaf1 mRNA的表达,且5-AZA-CdR的作用具有剂量依赖性。(2)5-AZA-CdR和EGCG在体外能诱导白血病细胞凋亡,并具有协同效应。

2-溴-3,3,3-三氟丙烯的合成与应用

介绍了2溴3,3,3三氟丙烯的用途及合成方法。