5-甲基-7-甲氧基异黄酮绿色合成工艺研究

以3,5-二羟基甲苯为原料,经Hoesch反应得到2,4-二羟基-6-甲基脱氧安息香,再经环合反应得到5-甲基-7-羟基异黄酮,使用绿色合成试剂碳酸二甲酯经甲氧基化反应得到5-甲基-7-甲氧基异黄酮,并获得最佳工艺条件,最优条件下三步反应总收率达47.8%。

异甘草素通过hsa_circ_0027107/miR-651-5p/FOXN2轴抑制肺腺癌的恶性进展

目的探讨circ_0027107在肺腺癌发生、发展中的作用及分子机制,同时探究异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)通过hsa_circ_0027107对肺腺癌的影响。方法肺腺癌基因芯片筛选出显著高表达的hsa_circ_0027107,通过实时荧光定量(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测肺腺癌患者及健康人血浆中,癌细胞和正常细胞中hsa_circ_0027107的表达情况,荧光原位杂检测hsa_circ_0027107在肺腺癌及癌旁组织中的表达情况,体外培养肺腺癌细胞A549和H1299,采用CCK-8和克隆形成检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,评估hsa_circ_0027107在肺腺癌中的功能;通过miRanda、TargetScan数据库预测circ_0027107下游的miR-651-5p,与miRDB、miRTarBase、TargetScan数据库预测miR-651-5p下游蛋白FOXN2,双荧光素酶基因实验报告确定circ_0027107与miR-651-5p、miR-651-5p与FOXN2之间的相互作用关系,并通过相关功能实验验证。结果肺腺癌基因芯片结果显示环状RNA hsa_circ_0027107差异表达明显,荧光原位杂交结果显示肺腺癌患者组织中hsa_circ_0027107的平均荧光强度为低于癌旁组织,miR-651-5p的平均荧光强度为高于癌旁组织,hsa_circ_0027107的低表达与肺腺癌患者的淋巴结转移和临床分期有关。核质分离结果显示hsa_circ_0027107、miR-651-5p都主要在细胞质中表达。过表达hsa_circ_0027107抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,而过表达miR-651-5p可逆转circ_0027107对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响,同时,发现在NCL-H1299、A549中FOXN2表达降低,敲低FOXN2可逆转miR-651-5p对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。研究发现ISL能够明显促进Hsa_circ_0027107的表达,并明显抑制体外肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,同时,功能实验也证实敲低Hsa_circ_0027107的表达能够拯救ISL对肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的抑制。结论肺腺癌组织、细胞、血浆中hsa_circ_0027107低表达,hsa_circ_0027107通过调控miR-651-5p作用于FOXN2抑制肿瘤的恶性生物学表型,ISL通过hsa_circ_0027107抑制肺腺癌的恶性进展。

7-二氟甲氧基-5,4′-二甲氧基金雀异黄素对卵巢上皮性癌细胞增值与迁移侵袭作用机制

目的:探讨7-二氟甲氧基-5,4′-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4′-dimethoxygenistein,DFMG)对卵巢上皮性癌细胞(skov3)增值、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其机制.方法:采用CCK-8法检测不同浓度DFMG对skov3增殖的影响和计算半数药物抑制浓度(IC50),并以IC50结果将不同药物浓度处理分为空白组、溶剂组、DFMG组;应用划痕实验检测各组细胞迁移能力,统计各组的迁移面积,比较迁移率;采用Transwell侵袭实验分析各组细胞侵袭能力,记录、比较各组侵袭入小室的细胞数,应用蛋白免疫印迹(Western blot)、细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR技术分别检测各组细胞的钙粘附蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的蛋白和mRNA表达变化.结果:浓度为40μmol/L的DFMG开始显著抑制skov3的增殖能力,IC50为(113.1±12.1)μmol/L;DFMG能降低细胞迁移及侵袭能力,减少vimentin蛋白及mRNA的表达,增加E-cadherin蛋白及mRNA的表达.结论:DFMG可明显抑制skov3的体外增殖、迁移和侵袭能力,可能与其抑制细胞上皮间质转化有关.

异甘草素和3-甲氧基异甘草素对人肝癌Bel-7402细胞的抗癌活性

肝癌多药耐药（ MDR）不仅限制了化疗效果,也是导致肝癌复发转移的重要原因,如何逆转多药耐药性已是肿瘤药物干预研究的热点。人肝癌Bel-7402细胞株作为一种体外模型,在新型抗癌候选药物研究中较为常用。国内学者利用此种模型从天然药物中筛选出了对肝癌Bel-7402细胞具有明显抑制活性的黄芩苷、虫草素、蜂毒素、蛇葡萄素、川芎嗪等天然活性成分,并探讨其在肝癌的辅助治疗、逆转耐药性等方面的应用价值[1-4]。本课题组研究发现,甘草查耳酮成分异甘草素（ isoliquiritigenin, ILG）对人宫颈癌SiHa细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡活性,并对正常细胞的毒性低,从而显示较好的先导化合物的潜力[5]。本研究参照前期研究方法[6]对天然化合物ILG及其衍生物3-甲氧基异甘草素（3-OM-ILG）进行人工合成制备,并应用人肝癌 Bel-7402细胞为体外模型,用MTT法和流式细胞仪法对两种化合物的抗肝癌活性及促进癌细胞凋亡作用进行对比研究。

RP-HPLC法测定7-二氟亚甲基-5,4′-二甲氧基异黄酮的含量

目的:建立和评价7-二氟亚甲基-5,4'-二甲氧基异黄酮(简称Gen-10)的反相高效液相色谱含量测定方法。方法:色谱柱为Hypersil GOLD C_(18)硅胶柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.0025 mol·L^(-1)磷酸氢二钠水溶液(55:45),流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长为254 nm,柱温为25℃,进样20μL。结果:Gen-10在0.1～35μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,回归方程为A=96.7C+3.77,r=0.9999;日内精密度RSD为0.051%(n=5),日间精密度RSD为0.059%(n=5);对照品溶液在12 h内稳定,检测限为0.02 ng;加样回收率为98.9%,RSD=1.3%(n=6)。结论:此方法简便、易行、灵敏、准确,可作为Gen-10含量测定的方法。

3-甲氧基异甘草素的合成及其对宫颈癌细胞的影响

目的以异甘草素（ILG）为先导化合物进行化学合成其衍生物3-甲氧基异甘草素（3-MO-ILG）,探讨其体外抗宫颈癌活性。方法采用硼酸催化高温法、羟基保护法、微波辅助碱催化法3种方法进行羟醛缩合反应而制备目标化合物;以人宫颈癌Si Ha细胞为体外模型,用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法测定对癌细胞增长的抑制率;用流式细胞仪测定促进癌细胞凋亡作用,以顺铂作为阳性对照组。结果用硼酸催化高温法、羟基保护法、微波辅助碱催化法3种方法所得到的3-甲氧基异甘草素产率分别为8.9%、9.27%和57.60%。3-甲氧基异甘草素对Si Ha细胞具有较强抑制增殖作用,当药物浓度为20～150μg/mL、作用时间为24 h时,其抑制率可达93.5%;当作用时间达到72 h时,抑制率最强。3-甲氧基异甘草素在100μg/mL时,对Si Ha细胞早期凋亡率为38.6%,晚期凋亡率为1.4%,具有明显的促细胞凋亡作用。结论微波辅助碱催化方法在查尔酮类化合物的合成中具有产率较高的方法。3-甲氧基异甘草素对Si Ha细胞具有较强抑制增殖作用,并且具有明显浓度和时间依赖性;同时对Si Ha细胞具有明显的促细胞凋亡作用。

一种新型芒柄花素衍生物4′-甲氧基-7-乙氧基异黄酮的合成、晶体结构及量子化学研究

以芒柄花素为先导化合物,合成了一种新型的衍生物4′-甲氧基-7-乙氧基异黄酮,通过X射线单晶衍射法对它的结构进行了表征.为了研究化合物的电子结构,在其晶体结构基础上进行了量子化学计算.采用密度泛函理论(DFT),B3LYP方法,对其进行优化,优化结果与实验吻合良好并且被用于后面前线分子轨道及自然电荷布居分析的计算.

天然产物5,7-二甲氧基-4′-羟基异黄酮的合成

以4-羟基苯乙酸和3,5-二甲氧基苯酚为原料,通过一条包括苄基化、酰氯化、酯化、氢化、Fries重排、以及Vilsmeier-Haack反应等6步反应的路线合成了天然产物5,7-二甲氧基-4′-羟基异黄酮,目标产物的总收率为33%.利用1HNMR、13C NMR及元素分析确证了化合物的结构.

异虎耳草素-β-环糊精包合物的制备

以 β 环糊精为包合材料 ,制备异虎耳草素 β 环糊精包合物 ,以提高异虎耳草素的水溶性。结果表明 ,包合是成功的 ;异虎耳草素用 β 环糊精包合后在水中的溶解度比包合前提高 60倍。

7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素对小鼠急性毒性研究

目的研究化合物7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素对小鼠的急性毒性。方法给小鼠按剂量2000mg·kg^-1一次性灌胃7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素,连续观察9天,统计死亡率,计算出LD50值。结果小鼠按剂量2000mg·kg^-1给予7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素后,均无明显中毒反应出现,也无死亡现象。结论 7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素毒性极低,属低毒范围。

5,7-二甲氧基白杨素对HepG2细胞生长的影响研究

目的:通过对5,7-二甲氧基白杨素对HepG2细胞生长影响的研究,为寻找有开发前景的肝癌治疗活性新化学实体提供理论和实验依据。方法:通过MTT比色法测定观察对体外培养HepG2细胞和人胚肝(L-02)细胞增殖活性的影响,并评价其对人肝癌细胞作用选择性;细胞计数法观察活细胞及死细胞数,计算细胞存活率,绘制细胞生长曲线。结果:MTT比色法结果显示,以不同浓度的dMChR分别处理HepG2细胞48h,其IC50值为3.22μM,其中16.0μM的dMChR作用HepG2细胞48h的相对抑制率达79.59%,而相应浓度的ChR和5-FU的抑制率分别为35.28%和74.01%。且对HepG2细胞的增殖活性抑制作用选择指数达21.03;细胞计数显示:不同浓度的dMChR、5-FU和ChR均对体外培养HepG2细胞具有抑制生长作用,呈剂量依赖性,其作用效价高于ChR(P<0.05),而与5-FU类似;绘制生长曲线发现dMChR显著抑制HepG2细胞的生长,呈时间依赖性,其抑制作用强于先导化合物ChR,而与5-FU相似。结论:dMChR抑制HepG2细胞增殖活性作用强,对L-02细胞增殖活性抑制作用弱,其抑制HepG2细胞增殖活性作用具有相对选择性。

DR5上调在5-烯丙基-7-二氟甲氧基白杨素增强TRAIL诱导人肺癌A549细胞凋亡中的作用

目的:观察5-烯丙基-7-二氟甲氧基白杨素(AFMC))是否协同肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡.并探讨其机制是否涉及死亡受体5(DR5)的上调.方法:体外培养人肺腺癌A549细胞和人胚肺WI-38细胞.碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带;Western Blotting检测DR5蛋白表达.结果:单独用亚毒性浓度的AFMC(1.0μmol/L)或TRAIL(30μg/L)处理A549细胞,细胞凋亡率不超过5%.AFMC(1.0μmol/L)联合TRAIL(30μg/L)的A549细胞凋亡率增高(37.80%,P<0.01);而WI-38细胞仅有极少量的细胞凋亡(P>0.05).DNA琼脂糖凝胶电泳显示:两者合用A549细胞呈现典型的DNA梯形条带图谱,而WI-38细胞未出现DNA梯形条带;Western Blotting分析发现:AFMC呈浓度和时间依赖性上调A549细胞DR5的表达,DR5特异性抑制剂DR5/Fc嵌合蛋白能有效降低两者合用诱导的A549细胞凋亡率(P<0.05).然而,AFMC对WI-38细胞DR5表达无明显影响.结论:亚毒性浓度的AFMC选择性增强TRAIL诱导人肺癌A549细胞凋亡.其机制可能与其上调DR5表达有关.

6-甲氧基-5-氰基异喹啉的合成研究

以间甲氧基苯甲醛为起始原料,20℃下与硝基甲烷反应2h得到3-甲氧基-β-硝基苯乙烯,收率88%。氢化铝锂为还原剂,无水四氢呋喃作溶剂,室温条件下反应4h,得到3-甲氧基苯乙胺,收率85.4%。100℃条件下,先与甲醛水溶液反应,再与20%盐酸反应得到6-甲氧基四氢异喹啉,收率80%。在RaneyNi作用下,190℃反应5h脱氢得到6-甲氧基异喹啉,收率86.5%。然后浓硫酸介质中,N-溴代丁二酸亚胺作用下,-5℃反应5h得到6-甲氧基-5-溴代异喹啉,收率93%。无水二甲基亚砜溶剂,氰化亚铜190℃反应2h氰解得到5-氰基-6-甲氧基异喹啉,收率95%。该化合物是一种重要的药物中间体和染料中间体,产品经过核磁共振和红外光谱检验确定结构。

3-氨基-5-甲氧基异唑的合成与表征

以3,3,3-三甲氧基丙腈为原料,通过两步反应合成了3-氨基-5-甲氧基异口恶唑,采用单因素实验探讨了氧气、搅拌时间、光照等对合成反应的影响,并通过核磁共振氢谱等对产物进行了表征。在优化反应条件下,3-氨基-5-甲氧基异口恶唑收率可达79.35%、纯度可达98.91%。

1,4,5,8-四甲氧基萘-2-甲醛的合成

对紫草素合成中间体1,4,5,8-四甲氧基萘-2-甲醛的制备工艺进行了改进,由萘茜在溴化四丁基铵催化下进行还原甲基化的收率由文献报道的44%提高到90%,标题化合物总收率72%(以对二甲氧基苯计)。

中间体6-氯-5-甲氧基吲哚合成工艺研究

以3-氯-4-甲氧基苯胺和水合氯醛、盐酸羟胺为原料,通过Sandmeyer异亚硝基乙酰替苯胺合成法制备得6-氯-5-甲氧基靛红,再由硼氢化钠/三氟化硼乙醚体系还原制备得目标化合物,总收率达49.52%（以3-氯-4-甲氧基苯胺计）。实验考察了酰胺化反应温度和反应时间、成环反应温度、还原体系种类及还原剂用量对反应收率的影响,较佳的酰胺化反应温度和反应时间为90℃回流反应10 min,较优的成环反应温度为80～85℃,选用更加安全的硼氢化钠/三氟化硼乙醚体系作为还原剂,较优的还原剂用量比为n（硼氢化钠）∶n（三氟化硼乙醚）∶n（6-氯-5-甲氧基靛红）=4.0∶2.5∶1.0。所有产物结构均通过1HNMR、13CNMR和元素分析等进行了表征。

HPLC法同时测定玉真散中天麻素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、欧前胡素、异欧前胡素的含量

目的:建立HPLC法同时测定玉真散中天麻素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、欧前胡素、异欧前胡素含量。方法:色谱柱为Phenomenex Gemini C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为25℃,流速为1.0 ml·min^(-1),流动相为甲醇-水梯度洗脱,检测波长为230 nm,进样量为5μl。结果:天麻素在2.68~214.00μg·ml^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为100.2%,RSD为0.9%(n=6);升麻素苷在5.22~418.00μg·ml^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 7),平均回收率为99.9%,RSD为0.9%(n=6);5-O-甲基维斯阿米醇苷在4.57~365.80μg·ml^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 5),平均回收率为99.7%,RSD为1.0%(n=6);欧前胡素在5.22~417.20μg·ml^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率为99.0%,RSD为0.9%(n=6);异欧前胡素在5.29~423.20μg·ml^(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为100.2%,RSD为0.8%(n=6)。结论:该方法简单、准确,可同时测定5种成分的含量,可用于玉真散的质量控制。

6-氟-5-甲氧基吲哚合成工艺研究

以3-氟-4-甲氧基苯胺、水合氯醛和盐酸羟胺为原料,通过Sandmeyer异亚硝基乙酰替苯胺合成法制备得6-氟-5-甲氧基靛红,再经过硼氢化钠/三氟化硼乙醚体系还原制备得6-氟-5-甲氧基吲哚。考察了酰胺化反应温度和反应时间、成环反应温度及还原体系对反应收率的影响,通过1HNMR、13CNMR、元素分析等手段对产品结构进行了表征。较佳的酰胺化反应温度和反应时间为90℃回流反应2min,较优的成环反应温度为65℃,选用更加安全的硼氢化钠/三氟化硼乙醚体系作为还原剂。本文首次报道了由6-氟-5-甲氧基靛红还原制备6-氟-5-甲氧基吲哚的工艺,与现有6-氟-5-甲氧基吲哚合成工艺相比,避免了使用剧毒品,具有更安全,反应条件温和,步骤少,操作简便,总收率较高(54.96%),成本较低的优点,适合批量制备5-甲氧基-6-卤代吲哚,具有广阔的工业应用前景。

99mTc-甲氧基异丁基异腈静息/运动负荷心肌灌注显像反向分布的研究

目的初步探讨^99mTc-甲氧基异丁基异腈(methoxy isbutyl isonitrile,MIBI)静息/运动负荷心肌灌注显像反向分布的发生原因。方法回顾性分析我院行^99mTc-MIBI静息/运动负荷心肌灌注显像患者127例,其中反向分布15例。分析反向分布累及左室部位,比较反向分布与非反向分布两组患者性别、年龄、糖尿病病史、心肌梗死病史、经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)史的差异。结果 15例反向分布患者共10例累及左室下后壁,男8例,女2例,10例患者中8例无左室下后壁存在病变的临床证据支持。反向分组年龄低于非反向分布组(P=0.01)、男性占比高于非反向分布组(P=0.04)。两组间糖尿病病史、心肌梗死病史、PCI史差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 MIBI静息/运动负荷心肌灌注显像反向分布以男性最为多见,左室下后壁受累为主,多数与伪影有关,但反向分布与心脏微小血管病变、冠状动脉血运重建术、冠状动脉痉挛等的关系,还需要进一步研究。