血清与海马内5-羟色胺和5-羟基吲哚乙酸的LC-MS/MS测定及其在白芍抗抑郁功效评价中的应用

[目的]建立一种用于测定血清和海马组织中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)和5-羟基吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid,5-HIAA)含量的液相色谱与串联质谱联用(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分析方法,并应用于中药抗抑郁功效的评价。[方法]取小鼠血清和海马组织,通过蛋白沉淀法进行样品前处理后,利用所建立的LC-MS/MS分析方法测定5-HT和5-HIAA的含量。采用Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温为40℃,流动相为0.1%甲酸水(含2 mmol·L^(-1)乙酸铵):乙腈,流速为1 mL·min^(-1),质谱检测选择多重反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式。将198只小鼠随机分为正常对照组、模型组、盐酸氟西汀组和30个白芍提取物组,每组6只。测定血清和海马中5-HT和5-HIAA含量,并进行悬尾实验与强迫游泳实验。[结果]5-HT和5-HIAA分别在0.1~1000 ng·mL^(-1)和1~500 ng·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好(r>0.999),加样回收率和精密度均符合生物样品的分析要求。白芍提取物组5-HIAA/5-HT值相对于模型组的变化程度,与行为学实验指标变化程度具有一定相关性,且变化程度显著高于行为学实验,组内相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)更小。[结论]建立的LC-MS/MS分析方法操作简便快捷、结果准确、灵敏度高、重现性好、专属性强,可同时测定血清、海马组织中5-HT和5-HIAA的含量,适用于白芍等具有神经保护功效药物的研究及药效评价。

龟羚帕安丸对帕金森病大鼠血清NSE、Cys-C、5-HT、5-HIAA及NE水平的影响

目的观察龟羚帕安丸对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠血清神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)、胱抑素C(Cystatin C,Cys-C)、5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-Hydroxyindoleacetic acid,5-HIAA)及去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)水平的影响。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)立体定向注射法制作PD大鼠模型,造模成功的PD大鼠随机分为模型组,西药组,中药高、中、低剂量组,中西药合用组,每组15只,另设假手术组15只。模型组及假手术组给予等容积生理盐水灌胃,其余组给予相应药物灌胃,连续给药28 d。大鼠腹主动脉取血,用酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠血清NSE、Cys-C、5-HT、5-HIAA及NE的水平。结果模型组大鼠血清NSE及Cys-C水平均明显升高,血清5-HT、5-HIAA及NE水平均明显降低;中药各剂量组、中西药合用组、西药组血清NSE及Cys-C水平均明显降低,5-HT、5-HIAA及NE水平均明显升高。结论龟羚帕安丸具有明显神经保护作用,作用机制与降低NSE及Cys-C水平,增加5-HT、5-HIAA及NE水平,降低脑实质损伤、神经炎症损伤及提高单胺类神经递质有关。

白芷香豆素对炎性疼痛小鼠脑组织中5-羟色胺及5-吲哚乙酸和多巴胺含量的影响

目的观察白芷香豆素(CAD)对炎性疼痛小鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)、5-吲哚乙酸(5-HIAA)及多巴胺(DA)含量的影响。方法昆明小鼠50只分为对照组、模型组及CAD高、中、低剂量组,每组10只。除对照组外,其余各组小鼠右足底部注射完全福氏佐剂(FCA)复制炎性疼痛模型,造模后对照组及模型组灌服生理盐水,CAD高、中、低剂量组分别灌服5、10、15 g·L^(-1)CAD提取液,连续灌胃给药3 d,末次给药后1 h,高效液相色谱法测定脑组织中5-HT、5-HIAA和DA含量。结果模型组小鼠脑组织中5-HT、5-HIAA及DA的含量与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05)。CAD高、中及低剂量组小鼠脑组织中5-HT及5-HIAA的含量与对照组和模型组相比均显著升高(P<0.05,P<0.01)。随着CAD剂量的增加,小鼠脑组织中5-HT和5-HIAA含量也逐渐升高,其中CAD高剂量组5-HT和5-HIAA含量明显高于CAD低剂量组(P<0.05);CAD高剂量组5-HT含量高于CAD中剂量组,差别有统计学意义(P<0.05),5-HIAA含量增加不明显(P>0.05);CAD中剂量组与CAD低剂量组相比,5-HT和5-HIAA含量稍增高但无统计学意义(P>0.05);DA含量CAD高、中及低剂量组比较差别无统计学意义(P>0.05)。结论CAD的镇痛作用机制可能与神经递质5-HT和5-HIAA的含量有关。

5-羟吲哚乙酸在胃癌早期诊断中的临床应用

目的通过分析5-羟吲哚乙酸(HIAA)对胃癌早期诊断的价值,探讨5-HIAA是否可以作为临床实验室指标对早期胃癌进行有效筛查,以提高胃癌早期诊断率。方法选取50名健康体检者、12例胃炎患者及70例胃癌患者进行分组,分别收集晨尿,检测5-HIAA水平,并与病理结果及癌胚抗原(CEA)、糖链抗原(CA) 72-4等血清学指标比较分析,获得相应的诊断效能参数,评价5-HIAA用于胃癌早期诊断的临床价值。结果 5-HIAA在胃癌组中阳性率明显高于胃炎和正常对照组(P<0. 05),胃炎与正常对照组的阳性率无统计学差异(P>0. 05); 5-HIAA用于检测胃癌具有较高的灵敏度(73. 33%)和特异性(70. 00%),与病理诊断结果符合率为72. 86%;联合检测5-HIAA与CEA、CA72-4,灵敏度(96. 3%)和特异性(76. 92%)均显著高于单独检测5-HIAA(P<0. 05)。结论 5-HIAA用于辅助诊断早期胃癌具有积极的参考价值,且5-HIAA与CEA、CA72-4等联合检测时灵敏度更好、特异性更强,可以发挥更好的互补作用。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定抑郁大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸

目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法,同时检测抑郁模型大鼠脑脊液中5-羟色胺及其代谢产物5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的水平,并观察氟西汀治疗后抑郁模型大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-HIAA的含量变化。方法将24只SD大鼠随机分为对照组、模型组和氟西汀治疗组,每组8只。造模第35天,待行为学测试后取大鼠脑脊液,用蛋白沉淀法进行前处理,然后采用UPLC-MS/MS测定5-羟色胺和5-HIAA的含量。色谱柱为ACE C18-PFP柱(4.6 mm×150 mm,3μm),流动相为乙腈-0.2%甲酸水,梯度洗脱,流速为0.4mL/min,柱温为25℃,质谱检测采用动态多反应监测(DMRM)模式。结果大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-HIAA分别在0.10～100.00 ng/mL和1.00～1 000.00 ng/mL浓度范围内线性关系良好(r>0.999),日内和日间精密度均<15.00%,提取回收率为86.86%～98.49%,基质效应为89.80%～95.25%,样品稳定性良好。与对照组比较,模型组大鼠脑脊液中5-羟色胺的含量降低(P<0.01),5-HIAA含量上升(P<0.01);与模型组比较,氟西汀组大鼠脑脊液中5-羟色胺含量上升(P<0.01),5-HIAA含量降低(P<0.01)。结论本实验所建立的方法操作简便,结果准确,灵敏度高,重现性好,适用于检测抑郁大鼠脑脊液中5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸水平。

钩藤碱对大鼠脑内去甲肾上腺素、5-羟吲哚乙酸的影响

目的测定钩藤碱对大鼠脑内去甲肾上腺素 (norepinephrine ,NE)、5 羟吲哚乙酸 (5 hydroxyindoleaceticacid ,5 HIAA)影响 ,进一步探讨钩藤碱的镇静作用机制。 方法利用脑微透析方法收集药前及药后纹状体、海马及大脑皮质的细胞外液 (透析液 )。经反相高效液相电化学法 (HPLC -ECD)检测其NE、5 HIAA的变化。结果Rhy增高正常鼠脑纹状体及海马细胞外液中 5 HIAA的含量 ,降低海马和皮层中NE的含量。结论钩藤碱的镇静作用 ,可能与其改变脑内单胺类递质及其代谢产物的含量有关。

胃癌、慢性胃炎患者血、唾液、胃液中5-羟色胺与5-羟吲哚乙酸检测的临床意义

测定正常人及胃癌、慢性胃炎(浅表性或萎缩性)患者的血、唾液按刘氏及Shellenberger方法测定5—羟色胺(5-HT)与5—羟吲哚乙酸(5—HIAA)的含量,其正常参考值(x±S)分别为:血液0.151±0.04μg/ml与0.194±0.07μg/ml;唾液0.0745±0.05μg/ml与0.1096±0.05μg/ml.与正常值比较,患者血中5-HT及5-HIAA量均增高(p<0.01),而唾液中仅5-HIAA增高(p<0.05).经胃镜抽取胃液作5-HT及5-HIAA测定则胃癌患者胃液中5-HT含量(x±S)为0.2834士0.1436μg/ml,显著高于慢性胃炎患者胃液中的含量(p<0.05),但二者5-HIAA含量并无显著差异.

高效液相荧光检测法同时测定人体内5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸

目的建立高效液相荧光检测法(HPLC-FLD)来同时测定人体血浆、血小板、脑脊液中5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸的含量。方法样本经预处理后用高效液相色谱仪进行测定。色谱柱为KromasilC18(250mm×4.6mm,7μm),流动相:甲醇和0.1mol/L磷酸二氢钾(15:85),流速1.5ml/min,Ex=254.nm,EM=338nm,柱温为35℃。结果5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸得到良好分离,线性范围5-羟色胺为1.1328～1160ng/ml,5-羟吲哚乙酸为0.9765～2000ng/ml,日内RSD分别为0.743%和1.470%,日间RSD分别为1.310%和2.043%;5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸的平均回收率:血浆中分别为98.32%、98.50%,血小板中分别为91.41%、88.05%,脑脊液中分别为92.84%、93.51%。结论该法具有取样量少、简单、快速、准确、灵敏等特点,可作为临床检测的常规方法。

复方仙灵脾注射液对大鼠缺血脑组织5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸及β-内啡肽含量的影响

目的:观察复方仙灵脾注射液对大鼠缺血脑组织神经递质和神经肽含量的影响,探讨其治疗缺血性中风的作用机理。方法:用三动脉阻断法造成急性不完全脑缺血模型,运用荧光分光光度测定法和放射免疫法测量各组大鼠大脑5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HLAA)和β-内啡肽(β-EP)含量。结果:复方仙灵脾组5-HT含量上升,5-HIAA含量相应降低,与川芎嗪对照组比较,无显著性差异(P>0.05),β-EP含量降低,与川芎嗪组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论:复方仙灵脾注射液可改善缺血脑组织单胺神经递质和神经肽的代谢失衡,纠正化学突触传递紊乱而保护神经细胞。

HPLC法同时测定尿多酸肽注射液中4-羟基苯乙酸及5-羟基吲哚乙酸的含量

目的 以HPLC法同时测定尿多酸肽注射液中4 - 羟基苯乙酸及5 - 羟基吲哚乙酸的含量。方法 采用MightysilRP C1 8(2 5 0mm×4 . 6mm ,5 μm)色谱柱,以1 %的甲酸溶液为流动相A ,乙腈为流动相B ,梯度洗脱,柱温30℃,流量1ml·min-1 ,检测波长2 82nm。结果 4 羟基苯乙酸在1 .0～1 4 0 . 0 μg·ml-1 范围内,色谱峰面积与对照品浓度呈现良好的线性关系,r=1 . 0 0 0 ;平均回收率为1 0 0 . 7%(RSD为0 . 6 %,n =9)。5 羟基吲哚乙酸在0 .1～2 0 . 0 μg·ml-1 范围内,色谱峰面积与对照品浓度呈现良好的线性关系,r=1 . 0 0 0 ;平均回收率为99 .7%(RSD为0 .6 %,n =9)。结论 该方法灵敏度高,准确,选择性、重复性好。

吗啡依赖条件性位置厌恶大鼠伏隔核壳区5-羟色胺及其代谢产物5-羟吲哚乙酸水平检测分析

目的探讨吗啡依赖条件性位置厌恶大鼠伏隔核壳区5-羟色胺及其代谢产物5-羟吲噪乙酸水平的动态变化,揭示吗啡依赖戒断厌恶动机的神经生化机制。方法将60只雄性SD大鼠立体定位术后进入实验,按随机数字表法分为慢性吗啡注射+纳洛酮催瘾组(MN组)、慢性吗啡注射+生理盐水催瘾注射组(MS组)及慢性生理盐水注射+纳洛酮催瘾组(SN组);同时与条件性位置训练箱搭配建立条件性位置厌恶模型,采用在体微透析技术分别在术后第3d一第5d,条件性位置厌恶建立前后、条件性位置厌恶消退期及重建期7个时点收集伏隔核壳区细胞外液,采用高效液相色谱-电化学方法检测透析液中5-羟色胺及其代谢产物5-羟吲噪乙酸水平。结果条件性位置厌恶建立前,3组大鼠在伴药侧停留时间比较差异无统计学意义(P>0.05);条件性位置厌恶建立后,MN组大鼠在伴药侧停留时间显著短于MS组,SN组(P<0.01),条件性位置厌恶消退训练后,3组大鼠在伴药侧的停留时间比较差异无统计学意义(P>0.05),条件性位置厌恶重建后,MN组在伴药侧停留时间显著短于MS组,SN组(P<0.01)。吗啡注射后,MS组和MN组伏隔核壳区的5-羟色胺及5-羟吲噪乙酸水平显著高于SN组(P<0.05);条件性位置厌恶建立后,MN组5-羟色胺及5-羟明噪乙酸浓度显著低于MS和SN组(P<0.05);条件性位置厌恶消退后,MN组5-羟色胺及5-羟吲噪乙酸水平逐渐升高,与基线值比较差异无统计学意义(P>0.05);条件性位置厌恶重建后,MN组5-羟色胺及5-羟噪乙酸水平显著低于MS和SN组(P<0.05)。结论伏隔核壳区内5-羟色胺参与吗啡依赖戒断所致条件性位置厌恶相关中枢厌恶动机,可能是阿片依赖的临床治疗的潜在靶点之一。

HPLC-电化学检测法测定大鼠脑内的去甲肾上腺素和5-羟吲哚乙酸

目的 建立大鼠脑内单胺递质及其代谢产物的测定方法。方法 大鼠脑组织匀浆液用高氯酸沉淀蛋白后 ,上清液直接用于HPLC分析。采用Irregular HC18色谱柱 ,流动相组成为 0 .1mol·L-1NaH2 PO4 甲醇 0 .0 1mol·L-1EDTA - 0 .2mol·L-1辛基磺酸钠 (87∶15∶1∶2 .5 ,pH3.7) ,流速为 0 .8ml/min ,温度为 35℃ ,电化学检测器工作电压为 0 .8V。结果 去甲肾上腺素和 5 羟吲哚乙酸分别在 6 .8～ 6 80ng·ml-1和 3.8～ 380ng·ml-1范围内线性关系良好 ,去甲肾上腺素测定的日内和日间的RSD分别为7.5 %和 8.1% ,5 羟吲哚乙酸测定的日内和日间的RSD分别为 2 .0 %和 7.5 % ,两者回收率分别为 10 3.0 %和 6 1.6 % ,检测限分别可达 2ng·ml-1和 1ng·ml-1。结论 本法用于脑内单胺递质及其代谢物的测定 ,快速、简便。

低频rTMS对脑梗死合并睡眠障碍患者血清5-HIAA、神经肽、NSE及5-HT水平的影响

目的探讨低频重复经颅磁刺激(rTMS)对脑梗死合并睡眠障碍患者血清5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、神经肽、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及5-羟色胺(5-HT)水平的影响。方法前瞻性选取2022年1月至2023年6月齐齐哈尔医学院第五附属医院(大庆龙南医院)收治的92例脑梗死合并睡眠障碍患者作为研究对象,按照随机数字表法分为观察组及对照组,每组各46例。对照组接受单独常规干预,观察组低频rTMS联合常规干预。观察两组疗效,治疗前和治疗后4周的匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分以及血清5-HIAA、神经肽、NSE、5-HT水平,并观察比较两组患者不良反应发生情况。结果观察组总有效率为95.65%,高于对照组(82.61%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后4周,两组PSQI、NIHSS评分均低于治疗前,观察组的PSQI、NIHSS评分分别为(6.05±1.12)、(10.12±2.15)分,均低于对照组[(7.35±1.56)、(14.26±2.58)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后4周,两组5-HIAA、神经肽、5-HT水平均较治疗前升高,NSE均较治疗前降低,且观察组治疗后4周的血清5-HIAA、神经肽、5-HT水平分别为(2349.56±548.56)ng/L、(7.76±1.54)μg/mL、(37.89±5.89)ng/mL,均高于对照组[(2012.58±359.85)ng/L、(6.45±1.42)μg/mL、(31.26±5.81)ng/mL],NSE水平为(17.02±2.25)μg/L,低于对照组[(21.12±2.59)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论低频rTMS治疗脑梗死合并睡眠障碍疗效显著,不仅能有效改善患者睡眠质量、神经缺损症状,还能改善其血清5-HIAA、神经肽、NSE、5-HT水平,安全性较高。

RP-HPLC法测定尿多酸肽注射液中5-羟基吲哚乙酸和4-羟基苯乙酸的含量

目的:建立高效液相色谱法测定尿多酸肽注射液中5-羟基吲哚乙酸和4-羟基苯乙酸的含量。方法:采用 C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相 A 为1%的三氟乙酸溶液,B 为乙腈-甲醇(75:25);流速1.0 mL·min^(-1),梯度洗脱;检测波长:275nm;进样量.20μL;柱温:40℃。结果:被测组分与相邻峰完全分离;5-羟基吲哚乙酸的线性范围为4-400 ng(r=0.9995),最低检测限为0.3 ng,精密度的 RSD 均小于1.89%(n=3),平均回收率为(102.2±1.5)%(n=9);4-羟基苯乙酸的线性范围为100-2800ng(r=0.9999),最低检测限为1.2 ng,精密度的 RSD 均小于0.72%(n=3),平均回收率为(96.64±1.14)%(n=9)。结论:方法简便灵敏,结果准确可靠,已用于尿多酸肽注射液的质量控制。

尿液5-羟吲哚乙酸对消化道病变筛查的意义

目的探讨尿液5-羟吲哚乙酸(HIAA)对消化道良、恶性病变筛查的价值。方法随机抽取健康体检者515例和组织学已证实的消化道良、恶性病变住院患者321例新鲜清洁晨尿,检测尿液5-HIAA并检测尿液5-HIAA阳性人群幽门螺杆菌及肿瘤标志物。结果健康体检者5-HIAA阳性率(10.1%)显著低于消化道病变者(47.0%,P<0.001),其中消化道良性病变(炎症、息肉)者5-HIAA阳性率为37.3%,消化道恶性病变者5-HIAA阳性率为50.6%。恶性病变者5-HIAA阳性率显著高于良性病变(P<0.05)。5-HIAA阳性消化道病变者肿瘤标志物水平显著高于5-HIAA阳性的健康体检者(P<0.001)。结论消化道病变患者尿液5-HIAA阳性率明显高于健康人群,恶性病变患者更高。尿液5-HIAA可与其他肿瘤标志物结合作为消化道病变筛查项目。

高效液相色谱－电化学检测法同时测定血浆中5－羟色胺和5－羟吲哚乙酸

高效液相色谱－电化学检测法同时测定血浆中５－羟色胺和５－羟吲哚乙酸唐爱国，吴轰，高洁生，杨锡兰（湖南医科大学附属第二医院中心实验室长沙４１００１１）１前言测定血液中的５－羟色胺（５－ＨＴ）和５－羟吲哚乙酸（５－ＨＩＡＡ）可为多种疾病的诊断和治疗以及精...

转染结构性雄烷受体对丝裂霉素C和5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮的细胞毒性的影响

研究丝裂霉素C(MMC)及其衍生物5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮[5-(aziridin-1-yl)-3-hydroxymethyl-1-methylindole-4,7-dione,629]的细胞毒性,以及结构性雄烷受体(constitutive androstane receptor,CAR)转染对其生物学效应的影响。将质粒mCAR/pCR3转染HepG2细胞,经G418耐药性筛选获得转染CAR的g2car细胞,以转染空载体pCR3(HepG2/pCR3)作为对照。用RT-PCR检测质粒和CYP2B6 mRNA的表达,用MTT法评价MMC和629对g2car细胞和HepG2细胞在有氧和乏氧条件下的细胞毒性。RT-PCR检测到CAR和CYP2B6 mRNA在g2car细胞中有表达,在HepG2细胞中无表达;此外,在乏氧情况下,MMC和629的细胞毒性比在有氧情况下均有所增加(P<0.05),并且转染CAR以后,两者的细胞毒性均增加,但对MMC的影响较明显(P<0.05),对629的影响不明显(P>0.05)。提示CAR可在转录水平调节药物的代谢,提高药物的毒性;CYP2B6可以主要代谢MMC,但不主要代谢629。转染CAR基因可以增加细胞CYP2B6 mRNA的表达,并可引起MMC和629毒性的改变。

尿液中5-甲氧基吲哚乙酸的方波伏安法快速检测研究

研究了5-甲氧基吲哚乙酸(MIAA)的电化学行为和机理,并采用方波伏安法建立了尿液中MIAA的快速分析方法。在0.2mol/L的NH3-NH4Cl缓冲溶液(pH=9.2)中,MIAA在+0.5V(vs.Ag/AgCl)电位处产生一个吸附控制的不可逆阳极氧化峰。峰电流与MIAA浓度在4.0×10-6～1.0×10-4mol/L范围内呈良好的线性关系;检出限为9.8×10-7mol/L,RSD为3.5%。将本法应用于尿样中MIAA含量的快速检测,回收率为91%～99%,样品全分析在10min以内,具有快速、简便和低成本的特点,可以用于松果体腺功能评价。

老年高血压患者血小板5-羟色胺及血浆5-羟吲哚类物质的变化

本文对26例老年原发性高血压患者测定血小板5-羟色胺(5-HT)及血浆5-羟吲哚类物质(5-HIs)。结果表明,老年高血压患者血小板5-HT显著低于正常老年对照组;而血浆5-HIs则显著增高,二者呈显著负相关,提示5-HT与老年高血压的血管阻力增高有关。