新型金雀异黄素衍生物抑制骨肉瘤MG-63细胞迁移和侵袭的作用及机制

目的检测新型金雀异黄素衍生物HNPG对骨肉瘤MG-63细胞迁移和侵袭的抑制作用及其可能分子生物学机制。方法体外培养骨肉瘤MG-63细胞,用MTT检测HNPG对MG-63细胞的增殖抑制作用;用划痕实验检测HNPG对MG-63细胞迁移抑制作用;用Transwell检测HNPG对MG-63细胞侵袭的抑制作用;用PI染色FCM检测HNPG对MG-63细胞G1期的阻滞作用;用AV-PI染色FCM检测HNPG对MG-63细胞凋亡的诱导作用;用Western blotting检测HNPG对MG-63细胞p53、bcl-2和bax蛋白表达的调节作用。结果HNPG在体外呈时间和浓度依赖性抑制MG-63细胞增殖,24 h的IC50为(4.8±0.6)μmol/L,5μmol/L的HNPG作用MG-63细胞24 h增殖抑制率为(45.2±4.6)%,较NS组的(0.40±0.02)%显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),划痕愈合率为(38.24±2.48)%,较NS组的(71.23±4.62)%显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),侵袭抑制率为(44.66±2.06)%,较NS组的(0.34±0.03)%显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),伴随着细胞G1期比例增高(78.65±3.48)%,较NS组的(64.40±2.02)%显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率增高(24.63±2.12)%,较NS组的(2.75±0.20)%显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);同时p53和bax蛋白表达上调,而bcl-2蛋白表达下调,与NS组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HNPG在体外可以显著抑制MG-63细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与其阻滞细胞于G1期、上调p53蛋白表达,进而激活bax蛋白表达、抑制bcl-2蛋白表达、诱导细胞凋亡所致。

亚毒性浓度HNPG体外对X线照射人骨肉瘤Saos-2细胞增殖抑制的增敏作用及机制

目的:检测亚毒性浓度5-羟基-4’-硝基-7-丙酰氧基金雀异黄素(HNPG)体外X线照射对骨肉瘤Saos-2细胞增殖抑制的增敏作用及其可能分子生物学机制。方法:体外培养骨肉瘤Saos-2细胞,用MTT法检测亚毒性浓度HNPG体外对X线抑制Saos-2细胞增殖的增敏作用;用FCM检测亚毒性浓度HNPG体外对X线诱导Saos-2细胞凋亡、活性氧表达、膜电位变化的增敏作用;用ELISA检测亚毒性浓度HNPG体外对X线调节Saos-2细胞SOD、CAT、GSH和MDA的增敏作用;用Western blot检测亚毒性浓度HNPG体外对X线调节Saos-2细胞bcl-2、bax、cyt-c和cleaved-caspase-3蛋白的增敏作用。结果:亚毒性浓度HNPG体外可增强X线抑制Saos-2细胞增殖作用,提高X线诱导Saos-2细胞凋亡率,同时增强X线对Saos-2细胞SOD、CAT、GSH下调,促进MDA、ROS上调,增强线粒体膜电下降,与NS组、HNPG组和X线组比较组间差异有统计学意义(P<0.05);伴随着bax、cyt-c和cleaved-caspase-3蛋白表达上调,bcl-2蛋白表达降低,与NS组、HNPG组和X线组比较组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:亚毒性浓度HNPG在体外能增敏X线对骨肉瘤Saos-2细胞的增殖抑制作用,其机制可能与其促进X线调节细胞内SOD、CAT和GSH表达,上调活性氧含量,损伤线粒体内膜,诱导细胞线粒体途径凋亡相关。

DFMG对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞的CD40/CD40L相互作用及E-选择素的释放的影响

目的:7-二氟甲氧基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4'-dimethoxygenistein,dFMG)对溶血性磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)损伤模型的保护作用,探讨其是否通过抑制CD40/CD40L相互作用E-选择素的释放相关。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)。Annexin V/PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率,用流式细胞仪检测CD40/CD40L的表达,酶联免疫吸附法检测E-选择素的释放。结果:LPC(10μmol/L)处理HUVE-12(6h、12h、24h和48h),24h的细胞凋亡率为(30.98%±2,04%)(P<0.05)。DFMG预孵育降低LPC诱导HUVE-12的细胞凋亡率,CD40/CD40L的表达降低及E-选择素的释放减少(P<0.05)。结论:DFMG拮抗LPC诱导HUVE-12细胞凋亡作用与减少CD40的表达及E-选择素的释放有关。

DFMG拮抗LPC诱导主动脉内皮细胞凋亡

目的研究7-二氟甲氧基-5、4’-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4’-dimethoxy-genistein,DFMG)对溶血性磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)诱导人主动脉内皮细胞(human aorta en-dothelial cells,HAEC)凋亡的影响。方法体外培养HAEC。Annexin V/PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率。ELISA法测定Caspase-3、8和9活性。Western blotting分析细胞色素c和死亡受体-4、-5表达。结果 LPC(10μmol/L)处理HAEC 24 h,细胞凋亡率为(31.6%±4.1%)(P<0.001)。DFMG预孵育降低LPC诱导HAEC细胞凋亡率,Caspase-3、-8和-9活化及细胞色素C和死亡受体-5表达(P<0.05)。结论 DFMG拮抗LPC诱导HAEC细胞凋亡作用与阻断LPC激活死亡受体和线粒体凋亡途径有关。