乙醇对大鼠胃底5-羟色胺2B受体表达水平影响的研究

目的:检测口服乙醇后大鼠胃底5-羟色胺2B(5-HT2B)受体表达水平的变化,探讨乙醇对大鼠胃底收缩的影响。方法:提取实验处理组及对照组总RNA,用半定量RT-PCR法检测5-HT2B受体mRNA表达水平。扩增大鼠5-HT2B受体基因,扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测,并用GDS8000凝胶成像及分析系统分析电泳条带密度。结果:大鼠胃底5-HT2B受体表达水平在给予乙醇2h后增高,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:乙醇可引起大鼠胃底5-HT2B受体表达水平增高。

肠易激综合征患者5-羟色胺及5-羟色胺2B受体变化的研究

目的观察肠易激综合征(IBS)患者血浆和结肠黏膜5-羟色胺(5-HT)及5-HT2B受体的表达情况,并探讨5-HT及5-HT2B受体在IBS发病机制中的作用。方法选取2016年1月~2017年5月于大连市友谊医院消化内科确诊的48例腹泻型IBS(IBS-D)及便秘型IBS(IBS-C)患者,其中IBS-D患者26例(IBS-D组),IBS-C患者22例(IBS-C组);另选取28例同期行结肠癌或结肠息肉筛查且结肠镜检查结果阴性者作为对照组。应用腹部症状评分量表对受试者进行评分,采用ELISA法检测受试者的血浆5-HT及5-HT2B受体浓度。结肠镜下获取升结肠处结肠黏膜标本,采用逆转录PCR检测5-HT mRNA及5-HT2B受体mRNA的表达水平,并分析血浆5-HT及5-HT2B受体水平与腹部症状评分的相关性。结果 IBS-D及IBS-C组患者的腹部症状评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);IBS-D及IBS-C组患者的血浆5-HT及5-HT2B受体浓度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);IBS-D及IBS-C组患者结肠黏膜组织5-HT及5-HT2B受体mRNA表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,IBS-D和IBS-C组患者血浆5-HT的表达量与腹部症状评分成正相关(r=0.82、0.79,P<0.05);IBS-D和IBS-C组患者血浆5-HT2B受体的表达量与腹部症状评分成正相关(r=0.78、0.76,P<0.05);对照组血浆5-HT及5-HT2B受体的表达量与腹部症状评分无相关性(P>0.05)。结论 5-HT及5-HT2B在IBS患者中显著升高,且血浆5-HT及5-HT2B与IBS患者的腹部症状评分成正相关,提示5-HT及5-HT2B受体可能参与了IBS患者腹痛的发生。

番泻苷A对2型糖尿病小鼠动脉粥样硬化斑块形成及5-羟色胺信号分子表达的影响

目的·研究番泻苷A (sennoside A,SA)对2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)小鼠动脉粥样硬化斑块形成和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)及其受体表达的影响。方法·将载脂蛋白E基因敲除小鼠12只随机分为模型组(model组)和治疗组(model+SA组),每组6只,同遗传背景C57BL/6J小鼠6只作为对照组(control组)。Control组普通饲养,model组和model+SA组在高脂饲养基础上每日给予腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立T2DM模型。Model+SA组每日给予SA (45 mg/kg)灌胃干预8周,control组和model组给予等体积双蒸水灌胃。比较造模及治疗前后小鼠体质量、空腹血糖和餐后2 h血糖情况,采用油红O染色和苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H-E染色)观察小鼠主动脉斑块面积,并用ELISA试剂盒测定小鼠血清和胸主动脉中5-HT水平,采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测小鼠胸主动脉中5-羟色胺2B受体(5-hydroxytryptamine receptor 2B,HTR2B)和5-羟色胺转运蛋白(serotonin transporter,SERT)的表达情况。结果·与control组相比,model组小鼠体质量、空腹血糖和餐后2 h血糖均升高,糖代谢紊乱;主动脉斑块形成,胸主动脉中HTR2B、SERT蛋白表达升高;胸主动脉5-HT浓度降低,血清5-HT浓度升高(均P<0.05)。给予SA治疗后,与model组相比,model+SA组小鼠体质量下降,空腹血糖和餐后2 h血糖水平明显改善;主动脉斑块面积减少,胸主动脉HTR2B、SERT蛋白表达显著降低;胸主动脉5-HT浓度升高,血清5-HT浓度降低(均P<0.05)。结论·SA可减少T2DM小鼠动脉粥样硬化斑块面积,其作用可能与降低血糖、抑制5-HT及其受体表达有关。

针刺对氯喹致非组胺依赖性瘙痒模型小鼠延髓5-羟色胺能神经元及5-羟色胺受体2B表达的影响

目的观察针刺对非组胺依赖性瘙痒模型小鼠瘙痒行为、延髓5-羟色胺(5-HT)能神经元及5-HT受体2B(5-HTR2B)表达的影响,探讨针刺在对瘙痒调控过程中的作用机制。方法采用颈背部皮下注射氯喹方法制作非组胺依赖性瘙痒模型。40只C57B/6J小鼠随机分为造模组(针刺组、非针刺组)、生理盐水组和空白对照组,每组10只。成模后,针刺组针刺双侧"血海""曲池"及"合谷",采用提插和捻转手法刺激,每日1次,共3次,非针刺组不予针刺,生理盐水组予颈背部注射生理盐水后不做处理,空白对照组不做处理。分别观察各组小鼠行为学变化,免疫荧光和Western blot检测延髓5-HT能神经元及5-HTR2B的表达。结果造模组小鼠搔抓次数明显高于生理盐水组和空白对照组(P<0.05),针刺组搔抓次数少于非针刺组(P<0.05),5-HT能神经元在空白对照组和生理盐水组表达均不明显,造模组小鼠5-HT能神经元表达明显增加,针刺后5-HT能神经元表达减少,针刺组和非针刺组延髓5-HTR2B表达明显高于生理盐水组和空白对照组(P<0.01),针刺组5-HTR2B表达低于非针刺组(P<0.01)。结论针刺对瘙痒模型小鼠搔抓行为具有抑制作用,其机制可能是通过下调延髓5-HT能神经元及5-HTR2B的表达发挥作用。

5-HT2B受体拮抗剂通过调控ERK通路干预大鼠垂体瘤纤维化的作用机制

目的探讨5-羟色胺(5-HT)2B受体拮抗剂通过兔抗大鼠细胞外调蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路干预大鼠垂体瘤纤维化的作用机制。方法将60只大鼠分为对照组、模型组、5-HT2B受体拮抗剂组及5-HT2B受体激动剂组,各15只大鼠,除对照组外,其余各组以雌激素建立大鼠垂体瘤模型。分别用2 mg/kg SB204741、2 mg/kg BW723C86对5-HT2B受体拮抗剂组及5-HT2B受体激动剂组大鼠进行腹腔注射,对照组及模型组大鼠分别注射等量生理盐水,共14 d。干预结束后,测量各组大鼠垂体肿瘤最大直径并计算肿瘤体积;苏木精-伊红(HE)染色观察垂体瘤组织病理变化;Masson染色观察垂体瘤组织胶原分布情况;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测兔抗大鼠转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、结缔组织生长因子(CTGF)、ERK1/2 mRNA相对表达情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测TGF-β_(1)、CTGF、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白相对表达情况。结果与模型组比较,5-HT2B受体拮抗剂组大鼠垂体瘤最大直径、体积及垂体质量均降低,5-HT2B受体激动剂组大鼠垂体瘤最大直径、体积及垂体质量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示:对照组垂体细胞数目较多,排列整齐有序;模型组大鼠垂体细胞有瘤样改变,细胞数量明显增多,胞核大小不一,细胞间质增生明显,有炎性细胞浸润;5-HT2B受体拮抗剂组有瘤样改变,细胞数量增多较少,偶有间质增生现象,炎性反应较轻;5-HT2B受体激动剂组垂体细胞数量大量增多,核大且核仁明显,细胞间质增生现象严重,大量炎性细胞浸润。Masson染色显示:对照组垂体细胞多且分布均匀,无胶原产生;模型组有不连续胶原纤维,分布密集;5-HT2B受体拮抗剂组胶原分布较少,无连续胶原纤维;5-HT2B受体激动剂组胶原纤维较多且连续。与对照组比较,模型组、5-HT2B受体拮抗剂组及5-HT2B受体激动剂组垂体组织中TGF-β_(1)、CTGF mRNA相对表达量及TGF-β_(1)、CTGF、p-ERK1/2蛋白相对表达量均升高(P<0.05);与模型组比较,5-HT2B受体拮抗剂组垂体组织中TGF-β_(1)、CTGF mRNA相对表达量及TGF-β_(1)、CTGF、p-ERK1/2蛋白相对表达量均降低,5-HT2B受体激动剂组均升高(P<0.05);5-HT2B受体激动剂组TGF-β_(1)、CTGF mRNA相对表达量及TGF-β_(1)、CTGF、p-ERK1/2蛋白相对表达量均高于5-HT2B受体拮抗剂组(P<0.05);对照组、模型组、5-HT2B受体拮抗剂组及5-HT2B受体激动剂组ERK1/2 mRNA及ERK1/2蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论5-HT2B受体拮抗剂对大鼠垂体瘤纤维化具有改善作用,可能是通过抑制ERK通路发挥作用。

5-HT_(2B)受体表达与腹泻型肠易激综合征患者腹痛的相关性分析

目的探讨腹泻型肠易激综合征(IBS-D)患者结肠黏膜组织中5-羟色胺2B(5-HT_(2B))受体的表达及其与腹痛的相关性。方法30例IBS-D患者(IBS-D组)和20例健康体检者(对照组)行结肠镜检查并取结肠黏膜组织。采用腹痛症状问卷调查量表进行腹痛严重程度和发作频率评分,HE染色观察结肠黏膜组织学变化,免疫组织化学染色检测5-HT_(2B)受体分布,ELISA法检测5-HT_(2B)受体浓度,qRT-PCR法检测5-HT_(2B)受体mRNA表达,并分析5-HT_(2B)受体浓度与腹痛严重程度和发作频率评分的相关性。结果IBS-D组患者腹痛严重程度和发作频率评分高于对照组(P<0.01)。HE染色结果显示,两组结肠黏膜组织均无明显炎症表现。免疫组织化学染色结果发现,5-HT_(2B)受体阳性表达主要位于结肠黏膜上皮细胞的细胞质及细胞核中,IBS-D组5-HT_(2B)受体阳性表达较对照组明显增多。IBS-D组结肠黏膜组织中5-HT_(2B)受体浓度和mRNA表达高于对照组(P<0.05)。IBS-D组结肠黏膜组织中5-HT_(2B)受体浓度与腹痛严重程度和发作频率评分均呈正相关(r_(s)=0.67和0.72,P<0.01)。结论IBS-D患者腹痛严重程度和发作频率评分与结肠黏膜组织中5-HT_(2B)受体表达呈正相关,提示5-HT_(2B)受体表达上调可能参与IBS-D患者的腹痛发生过程。

919糖浆对肝郁气滞血瘀证模型大鼠脑胃ghrelin通路的影响

目的研究肝郁气滞血瘀证模型大鼠下丘脑及胃内饥饿素(ghrelin)表达的变化以及护肝方919糖浆的干预作用。方法 40只Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,919糖浆高、中、低剂量组(27、13.5、6.75 g·kg^(-1)),每组8只。除正常组外,其余各组采用夹尾急性激怒法制作肝郁气滞血瘀证模型,各组给予相应的干预措施,造模21天。其间监测各组大鼠的摄食量及体质量。实验结束后采用ELISA法测定各组大鼠血清酰基化ghrelin浓度,Western blot法测大鼠胃及下丘脑ghrelin蛋白表达,RT-PCR法检测胃中ghrelin、生长激素促分泌受体(GSHR)、5-羟色胺2b受体(5-HT_(2b)R)mRNA表达以及下丘脑ghrelin、5-羟色胺2c受体(5-HT_(2c)R)mRNA水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清酰基化ghrelin水平显著升高(P<0.01),下丘脑及胃ghrelin蛋白表达增加(P<0.01),胃内ghrelin、GHSR及下丘脑ghrelin mRNA表达水平显著上调(P<0.01),胃内5-HT_(2b)R及下丘脑内5-HT_(2c)R mRNA水平显著下调(P<0.01)。与模型组比较,919糖浆治疗组能显著逆转模型大鼠血清、胃内及下丘脑ghrelin水平的升高(P<0.01),下调模型大鼠胃内GHSR mRNA水平(P<0.01),上调胃内5-HT_(2b)R及下丘脑内5-HT_(2c)R mRNA水平(P<0.01)。结论 ghrelin是肝郁气滞血瘀证的重要物质基础;919糖浆能通过调节模型大鼠脑胃ghrelin通路的异常表达,从而发挥其防治肝郁气滞血瘀证的作用。