姜黄素联合5-FU对人胃癌SGC-7901细胞作用及机制的研究

目的:探讨姜黄素联用5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:用姜黄素(20μmol/L)和5-FU(10、20、40μmol/L)单独或联合应用处理SGC-7901细胞后,MTT法检测生长、流式细胞术观察细胞周期与凋亡、酶标仪比色法检测Caspase-3/-8的活性和Western Blot法观察Bcl-2/Bax蛋白表达。结果:与对照组相比,各实验组均能显著抑制细胞增殖、促进细胞凋亡(P<0.05),姜黄素联合低/中剂量5-FU的增殖抑制率、凋亡率显著高于中/高剂量5-FU单用(P<0.05);各实验组将SGC-7901细胞的细胞周期阻滞在S期(P<0.05);各实验组Caspase-3/-8活性、Bax表达量显著增加,而Bcl-2的表达量显著降低(P<0.05),且姜黄素联合低/中剂量5-FU组的效果优于中/高剂量5-FU单用组(P<0.05)。结论:姜黄素能够增强5-FU对体外培养的胃癌SGC-7901细胞的抑制增殖和促凋亡作用,其机制与增强Caspase-3/-8活性、上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关。

应用siRNA干扰下调CDX2表达以增强人胃癌SGC-7901细胞对5-Fu的敏感性

目的:通过体外实验探讨siRNA下调CDX2基因表达,探讨人胃癌SGC-7901转染前后对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性变化。方法:针对CDX2基因序列设计合成siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞。将SGC7901细胞分为空白对照组、脂质体组、5-Fu组、siRNA组和联合组,除空白对照组外,各组分别给予相应的药物。Western blot法检测各组细胞CDX2蛋白的表达;MTT法检测各组细胞的增殖水平。结果:CDX2蛋白在空白对照组和脂质体组中高表达,在5-Fu组、siRNA组和联合组中低表达,其中以联合组表达量最低;各组细胞增殖抑制率分别为11.36%±1.98%、43.36%±1.03%、49.14%±2.73%和73.40%±4.58%,其中以联合组最高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CDX2-siRNA质粒转染SGC-7901细胞后,CDX2基因蛋白表达受到抑制,SGC-7901细胞增殖受到抑制,CDX2-siRNA能够增强人胃癌细胞对5-Fu的敏感性。

曲古菌素A联合5-FU对人胃癌SGC-7901细胞生长及其PLK1基因表达的影响

目的:探讨曲古菌素A(TSA)与5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌细胞(SGC-7901细胞)生长及其Polo样激酶1(PLK1)基因表达的影响。方法:将实验设为对照组、TSA 150 ng/mL组(TSA组)、5-FU 20μg/mL组(5-FU组)、TSA 150 ng/mL+5-FU 20μg/mL组(TSA+5-FU组)四组,用MTT比色法测定各组对SGC-7901细胞的生长影响,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR分析SGC-7901细胞PLK1 mRNA表达,Western Blot法检测PLK1蛋白表达。结果:TSA和(或)5-FU分别作用24、48、72 h后均能抑制胃癌细胞生长,TSA+5-FU组较TSA组或5-FU组生长抑制作用显著增强,且随着药物作用时间的延长,抑制作用增强更明显;流式细胞术检测显示干预胃癌细胞48 h后,TSA+5-FU组G0/G1期比率为(85.23±2.17)%,较TSA组或5-FU组显著增多;TSA和(或)5-FU干预胃癌细胞48 h后,TSA+5-FU组较TSA组或5-FU组显著减弱PLK1基因mRNA转录及蛋白表达。结论:TSA联合5-FU干预,抑制人胃癌SGC-7901细胞生长,阻止细胞周期于G0/G1期,癌基因PLK1mRNA转录及蛋白表达减少均较TSA组或5-FU组明显。

三氧化二砷联合5-FU体外抗人胃癌细胞SGC-7901作用及机制的研究

目的探讨三氧化二砷（As203）与5-氟尿嘧啶（5-FU）联合应用体外抗人胃癌细胞株SGC-7901的作用及其机制。

Bcl-2基因沉默对胃腺癌SGC-7901细胞5-Fu敏感性的影响

目的探讨B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因沉默增强胃腺癌SGC-7901细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的价值。方法设立人胃腺癌SGC-7901细胞研究组和对照组,采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测两组人胃腺癌SGC-7901细胞中Bcl-2 m RNA的表达。研究组采用脂质体法转染化学合成的Bcl-2 si RNA序列至人胃腺癌SGC-7901细胞,对照组不进行干预。比较转染前后两组Bcl-2 m RNA的表达水平。两组均添加不同浓度5-FU,采用Annexin V标记和流式细胞仪检测48 h后两组不同浓度5-FU细胞株的增殖抑制率和凋亡率。结果两组转染前Bcl-2 m RNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与转染前比较,研究组转染后的Bcl-2 m RNA相对表达量降低(P<0.05);与对照组比较,研究组转染后的Bcl-2m RNA相对表达量降低(P<0.05)。与对照组比较,研究组培养48 h的细胞增殖抑制率和凋亡率较高(P<0.05)。结论 Bcl-2基因沉默可增强胃腺癌SGC-7901细胞对5-FU的敏感性,抑制癌细胞的增殖,并促进癌细胞的凋亡。Bcl-2基因沉默可能是改善胃腺癌5-FU疗效的有效方法。

转染bcl-2反义寡核苷酸增强5-FU诱导胃癌细胞株SGC7901凋亡

目的 探讨转染bcl 2反义寡核苷酸 (ASODN)能否增强 5 氟脲嘧腚 (5 -FU)诱导胃癌细胞株SGC790 1的细胞凋亡。方法 通过脂质体转染bcl 2ASODN和对照序列 ,凋亡率由流式细胞仪检测。酶联免疫法 (ELISA)用于检测细胞内源性bcl 2蛋白的表达 ,以证实反义序列的特异性。结果 和对照ODN相比 ,转染bcl 2ASODN显著增强 5 FU诱导的细胞凋亡率 (P<0 .0 1)。ELISA法显示SGC790 1的内源性bcl 2蛋白表达下降 (P <0 .0 1)。结论 bcl 2ASODN能增强 5 FU诱导胃癌细胞的凋亡率 ,这将为胃癌治疗提供有用的实验室依据。

新加良附方联合5-Fu对裸鼠胃癌移植瘤Bax/Bcl-2表达的影响

目的观察新加良附方联合5-Fu对人胃癌细胞(SGC-7901)裸鼠移植瘤生长抑制作用及对肿瘤组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。方法建立移植性人胃癌细胞(SGC-7901)裸鼠移植瘤模型,随机分为模型对照组、5-FU组及新加良附方高、中、低剂量组、联合给药组。连续给药10d。计算肿瘤抑制率,检测Bax/Bcl-2蛋白表达。结果联合给药组抑瘤率为70.07%,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与5-Fu组和新加良附高剂量比较,联合给药组抑瘤率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);联合给药组上调肿瘤组织Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与5-Fu组和新加良附高剂量组比较,联合给药组Bax蛋白表达升高明显(P<0.05),Bcl-2蛋白表达下降明显(P<0.05)。结论联合给药组抑瘤率高于单独给药组,在下调Bcl-2、上调Bax表达方面优于单独给药组,显示两药协同作用的优势。

加味良附丸联合5-Fu对裸鼠胃癌移植瘤NF-ΚBp65表达的影响

目的观察加味良附丸联合5-Fu对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长抑制作用及其对肿瘤组织中核转录因子-kappaBp65(NF-ΚBp65)表达的影响。方法建立人胃癌细胞SGC-7901移植瘤动物模型,随机分为模型组、5-FU组及加味良附丸大、中、小剂量组、加味良附中剂量+5-FU组(联合给药组)。给药10 d,计算肿瘤抑制率,免疫组化检测肿瘤组织中NF-ΚBp65的表达。结果联合给药组、5-FU组、加味良附丸大、中、小剂量组抑瘤率分别为54%、45%、31%、28%、17%,联合给药组与加味良附丸大、中、小剂量比,差异显著有统计学意义(P<0.05);模型组肿瘤组织中NF-ΚBp65表达明显高于各给药组,差异显著有统计学意义(P<0.05);联合给药组肿瘤组织中NF-ΚBp65表达低于加味良附丸大、中、小剂量组,差异明显有统计学意义(P<0.05)。结论加味良附丸联合5FU组抑瘤率高于单纯加味良附丸高、中、低剂量组及5-FU组,联合给药抑制NF-ΚBp65表达方面优于加味良附丸高剂量组及5-Fu组,提示中西药联合具有协同作用。

SIRT1在5-FU耐药胃癌细胞中的表达及其对细胞化疗耐药的影响

目的探讨沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)在5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)耐药胃癌细胞(SGC-7901/5-FU)中的表达情况及其对细胞化疗耐药的影响。方法通过定量RT-PCR和Western blot方法检测SIRT1 mRNA与蛋白在5-FU敏感的SGC-7901亲本细胞、SGC-7901/5-FU细胞及在SIRT1-siRNA转染后的SGC-7901/5-FU细胞中的表达;选择高干扰效率的SIRT1-siRNA转染SGC-7901/5-FU细胞,CCK8法检测5-FU对转染细胞的活性影响,流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,Western blot法检测其对细胞p-Akt、Bax、Bcl-2和P-pg表达的影响。结果SGC-7901/5-FU细胞中的SIRT1 mRNA与蛋白表达水平均显著高于SGC-7901亲本细胞(P<0.001);SIRT1-siRNA转染SGC-7901/5-FU细胞后,SIRT1的mRNA与蛋白表达均显著降低(P<0.001);5-FU作用后,SIRT1-siRNA转染组的SGC-7901/5-FU细胞增殖活性明显下降(P<0.001),细胞凋亡明显增加(P<0.001),且细胞中的p-Akt、Bcl-2和P-pg含量明显下降(P<0.001),Bax含量明显上升(P<0.001)。结论SIRT1在5-FU耐药胃癌细胞中高表达,干扰SIRT1表达后可通过抑制细胞增殖与促进细胞凋亡来提高耐药胃癌细胞对5-FU的敏感性,这可能与细胞增殖通路相关蛋白、凋亡以及细胞多药耐药性相关蛋白变化相关。提示抑制SIRT1可作为降低胃癌多药耐药性及提高胃癌对化疗药物敏感性研究的一个新思路。

鸦胆子乳剂、5-Fu局部注射联合开道散对人胃癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤机制研究

目的研究鸦胆子乳剂、5-Fu局部瘤体注射联合灌服开道散对人胃癌SGC-7901移植瘤的抑制作用及可能机制。方法建立人胃癌SGC-7901裸鼠移植瘤模型后传3代,接种于裸小鼠右前肢腋窝皮下,待肿瘤生长至50-250mm3后随机分6组:对照组A组(0.9%NaCl溶液),治疗组B(5-FU)组、C组(5-FU及鸦胆子乳)、D组(开道散联合5-FU)、E组(开道散联合5-FU、鸦胆子乳)、F组(开道散)。实验期间,每周测量两次瘤体体积,给药结束,将动物脱颈处死,剥离出肿块称重,比较各组肿瘤重量,计算肿瘤抑制百分率;用免疫组化方法检测荷瘤组织中p53、Ki67表达情况。结果除F组瘤重与对照组比较无统计学意义(P>0.05),余各治疗组瘤重均显著低于对照组,但治疗组间C组、D组与B组比较无统计学意义(P>0.05),而E组与B组相比有统计学意义(P<0.05);除F组外,其余各治疗组均有不同程度下调p53、Ki67表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),但C组、D组与B组比较各免疫组化指标表达无明显差异(P>0.05),而E组较B组各免疫组化指标下调明显,有统计学意义(P<0.05)。结论瘤体内注射鸦胆子乳剂、5-Fu联合灌服开道散有一定的协同增效作用,其机制可能与抑制p53、Ki67表达,抑制肿瘤细胞的生长与增殖有关。

2'-O-meRNA对人胃癌细胞的抑制作用及对5-FU和BCNU疗效的影响

目的探讨2'-O-meRNA通过抑制端粒酶来杀伤胃癌细胞系SGC-7901的作用及对化疗药5-FU和BCNU疗效的影响。方法培养人胃癌细胞系SGC-7901,分为5-FU组、BCNU组、2'-O-meR- NA组、反义对照组、化疗药与反义抑制剂合用组,观察用药后该细胞系存活情况及端粒酶活性。结果5- FU、BCNU、2'-O-meRNA可有效抑制SGC-7901细胞的活性(P<0.05),BCNU、2'-O-meRNA可有效抑制细胞端粒酶活性,1μM 2'-O-meRNA可加强6.25 μg/ml BCNU的疗效(P<0.01),但是不能加强12.5μg/ml 5-FU的作用(P>0.05)。结论2'-O-meRNA抑制胃癌细胞系SGC-7901的生长。1 μM 2'-O- meRNA与6.25 μg/ml BCNU合用时有协同作用,2'-O-meRNA与5-FU合用时无协同作用。

5-氮杂-2-脱氧胞苷及曲古抑菌素A对人胃癌SGC-7901细胞生长及CHFR基因表达水平的影响

背景与目的:抑癌基因甲基化具有可逆性,相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞活性及CHFR基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法:使用不同浓度的5-Aza-dC和(或)TSA处理SGC-7901细胞,分为对照组、TSA组(250 nmol/L)、5-Aza-dC组(5μmol/L)及TSA(250 nmol/L)联合5-Aza-dC(5μmol/L)组等4个组,采用台盼蓝染色法检测细胞活性,并利用RT-PCR及蛋白质印迹法(Westernblot)方法检测CHFR基因mRNA和蛋白表达的水平。结果:5-Aza-dC和TSA作用24、48、60和72 h后SGC-7901细胞活性均被抑制,且抑制率呈浓度和时间依赖性,两药联合作用更明显;SGC-7901细胞经5-Aza-dC单独或与TSA联合干预后,能提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-Aza-dC和(或)TSA均能抑制细胞活性,提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,两药联合的效果比单药明显增加,为临床胃癌患者的化疗方案提供了实验依据。

5-AzadC联合TSA对人胃癌SGC-7901细胞生长及Reprimo基因表达的影响

目的探讨5-氮杂2-脱氧胞苷(5-AzadC)联合曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌SGC-7901细胞生长及Reprimo基因表达的影响。方法 SGC-7901细胞分为对照组、5-Aza-dC、TSA、5-AzadC+TSA组,MTS法测定各组药物对其生长的影响,RT-PCR和Western Blot法分析SGC-7901细胞Rep-rimo基因mRNA和蛋白表达情况。结果 5-AzadC和(或)TSA分别作用24、48、60、72 h后均抑制细胞生长,两药联合组比单药组抑制率显著增强,并且随着药物浓度增加和作用时间延长,抑制率增强更加显著;5-AzadC和(或)TSA干预胃癌细胞72 h后,联合用药组和单药组比较,Reprimo mRNA和蛋白的表达显著增强(P<0.05)。结论 5-AzadC联合TSA干预可抑制SGC-7901细胞生长,抑癌基因Reprimo再表达发挥抑癌作用。

金雀异黄素与5-氟尿嘧啶对SGC-7901细胞的抑制作用

目的研究金雀异黄素（genistein，Gen）与5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用。方法采用MTT法检测Gen和5-FU对SGC-7901细胞的抑制作用，流式细胞术检测细胞周期分布，并在透射电镜下观察细胞超微结构改变。结果Gen和5-Fu单用或联合应用对胃癌SGC-7901细胞的生长均有显著的增殖抑制作用，且呈剂量和时间依赖性。两药联合应用时，当药物效应在0．2～0．8时，具有协同或相加作用（CI≤1）；18．8btmol／L的Gen作用后，62．97％的SGC-7901细胞阻滞在G2／M期；8．84μmol／L的5-FU作用后，63．76％的SGC-7901细胞阻滞在s期；3．06μmol／L的Gen与7．96μmol／L的5-Fu联合应用后，67．46％的SGC-7901细胞阻滞在G0／G1期。Gen和5-FU均可诱导SGC-7901细胞凋亡。结论Gen与5-FU通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制胃癌细胞的生长，对胃癌细胞的增殖抑制具有协同作用。

5杂-氮-2′-脱氧胞苷对顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞14-3-3σ基因甲基化的影响

目的观察5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞14-3-3σ基因甲基化的影响;探讨14-3-3σ基因甲基化与顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞耐药的关系。方法建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC-7901/CDDP,并用特异性甲基化抑制物5-Aza-CdR干预。MSP法检测14-3-3σ基因甲基化状态,蛋白质印迹法检测14-3-3σ蛋白表达,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期与凋亡。结果 SGC-7901/CDDP细胞的14-3-3σ基因高度甲基化并沉默,经过5、10μmol.L-15-Aza-CdR处理后,14-3-3σ蛋白重新表达,细胞发生顺铂耐药逆转,细胞活性抑制、在G0/G1期出现阻滞以及凋亡率明显增加。结论 5-Aza-CdR具有抑制顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞14-3-3σ基因甲基化的作用,同时,顺铂作用与耐药机制部分依赖于14-3-3σ基因。

γ-生育三烯酚与5-氟尿嘧啶联用对人胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制作用

目的离体条件下研究γ-生育三烯酚(γ-tocotrienol,γ-T3)与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人胃癌细胞SGC-7901增殖抑制的作用方式。方法采用CCK-8法用不同浓度5-FU(0、30、50、70、90、110μmol/L)、不同浓度γ-T3(0、5、10、20、30、40μmol/L)以及不同浓度5-FU(0、30、50、70、90、110μmol/L)联合γ-T3(20或30μmol/L)分别作用于对数生长期的SGC-7901细胞48h,测定各药物对SGC-7901细胞增殖抑制率,并通过两药相互作用系数(coefficient of drug interaction,CDI)值[1]判定5-FU和γ-T3联合作用效果。用AnnexinⅤ-FITC/PI双染的流式细胞术法分别检测5-FU(30μmol/L)和γ-T3(20μmol/L)单独应用及两药联合应用48h诱导SGC-7901细胞凋亡情况。结果 5-FU和γ-T3均可抑制SGC-7901细胞的增殖,并随着浓度的增加抑制作用增强(P<0.05),增殖抑制作用呈明显的剂量效应关系;而联合应用与对照组和单药组相比对SGC-7901细胞的增殖抑制作用增强,有增效作用,其差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术凋亡结果表明,5-FU和γ-T3均可诱导SGC-7901细胞发生凋亡的作用(P<0.05),5-FU和γ-T3联合较单独应用,诱导细胞凋亡的作用增强(P<0.05)。结论γ-T3与5-FU联合用药与单独用药相比对人胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制及诱导凋亡有明显的增效作用。

miR-135b-5p靶向KLF4基因调控胃癌SGC-7901细胞生物学行为的研究

目的 研究miR-135b-5p通过靶向KLF4基因对人胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法通过RT-PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平,将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中,RT-PCR和Western blotting分别检测转染后细胞中miR-135b-5p和KLF4蛋白表达水平,MTT法、流式细胞术、Transwell实验分别检测转染对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。生物信息学软件预测及双荧光素酶报告基因实验验证KLF4是否为miR-135b-5p的靶基因。结果胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,且胃癌SGC-7901细胞中miR-135b-5p表达水平最高。在SGC-7901细胞中转染miR-135b-5p inhibitor 48 h 后,miR-135b-5p的表达水平显著降低,KLF4 mRNA和蛋白表达水平明显升高。下调miR-135b-5p后SGC-7901细胞增殖能力下降,凋亡率升高,侵袭和迁移能力减弱。双荧光素酶报告基因实验结果显示,KLF4是miR-135b-5p靶基因。结论 miR-135b-5p能够通过靶向KLF4抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡。

5-氮杂-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对胃癌细胞SGC-7901MGMT表达及NF-κB活性的影响

目的研究5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-dC)及曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对人胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖、凋亡及移植瘤生长的影响,从体内、体外观察抑癌基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)表达,核转录因子NF-κB活性的改变,探讨5-Aza-dC联合TSA用于胃癌临床治疗的可行性。方法实验分对照组、5-Aza-dC组、TSA组和5-Aza-dC联合TSA组,利用CCK-8增殖试剂盒检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡,RT-PCR检测各组MGMT mRNA表达,Western blot检测MGMT、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65的磷酸化水平。结果 5-Aza-dC、TSA单独处理均可抑制SGC-7901细胞的生长和促进其凋亡,联合用药后效果更明显(P<0.05);与对照组相比,单药组移植瘤变化没有统计学意义(P>0.05),而联合用药组较单药组移植瘤变小;5-Aza-dC、TSA单独或联合处理SGC-7901细胞和裸鼠移植瘤后,与对照组比较,MGMT基因mRNA及蛋白表达水平均上调,联合用药比单独用药升高明显,NF-κB p65在各处理组中的表达量未发生变化,但其磷酸化程度较对照组下降,联合用药较单药下降更明显(P<0.05)。结论 5-Aza-dC与TSA发挥抑制胃癌生长的作用可能是通过抑制NF-κB的活性,提高MGMT基因的转录和表达而实现的,两药联合使用的抗癌效果更加明显。

miR-361-5p通过靶向CCND1逆转胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂耐药性

目的:探讨miR-361-5p对胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)耐药性的影响及其作用机制。方法:采用qPCR法检测miR-361-5p在胃癌细胞MKN-45、MGC80-3、SGC-7901和OXA耐药细胞SGC-7901/OXA中的表达水平。利用脂质体转染技术分别将miR-361-5p mimics/inhibitor、sh-CCND1转染到SGC-7901/OXA细胞中,用CCK-8法和流式细胞术检测SGC-7901/OXA细胞的增殖、凋亡和细胞周期。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-361-5p与CCND1的靶向关系,用WB法检测CCND1的表达水平。结果:miR-361-5p在多种胃癌细胞和SGC-7901/OXA细胞中均低表达(P<0.05或P<0.01)。过表达miR-361-5p可显著促进SGC-7901/OXA细胞凋亡,诱导G0/G1细胞周期停滞并抑制细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,miR-361-5p靶向负调控CCND1的表达(P<0.01)。敲减CCND1抑制SGC-7901/OXA细胞CCND1表达和细胞增殖,并诱导凋亡和G0/G1周期阻滞(P<0.05或P<0.01)。过表达miR-361-5p靶向下调CCND1进而促进SGC-7901/OXA细胞凋亡,诱导G0/G1细胞周期停滞并抑制细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-361-5p过表达可逆转胃癌SGC-7901/OXA细胞对OXA的耐药性,其机制可能与靶向下调CCND1表达有关。

miR-138-5p通过靶向TCF3实现对胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移的调控

目的:探讨miR-138-5p与T细胞因子3基因(T cell factor 3, TCF3)的靶向关系及其对人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力的影响。方法:miR-138-5p模拟物转染SGC-7901细胞后,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-138-5p和TCF3 mRNA的相对表达;生物信息学方法预测miR-138-5p与TCF3基因的靶向匹配关系,采用荧光素酶报告基因系统鉴定该关系。miR-138-5p转染正常胃癌细胞和TCF3高表达胃癌细胞后,Western blotting检测TCF3、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子(Slug)和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,Transwell小室检测胃癌细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果:miR-138-5p过表达抑制TCF3 mRNA的表达;生物信息学软件预测显示miR-138-5p与TCF3 mRNA有靶向结合区域,miR-138-5p mimic降低TCF3野生型质粒的荧光素酶活性,不影响TCF3突变型质粒的荧光素酶活性。miR-138-5p抑制TCF3蛋白表达,miR-138-5p减弱TCF3过表达对SGC-7901细胞侵袭和迁移能力的促进作用,同时其下调N-cadherin、Vimentin和Slug蛋白表达、上调E-cadherin蛋白表达。结论:miR-138-5p抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭和迁移,与直接靶向调控TCF3的表达有关。