HPLC法测定猪毛蒿中绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸成分的含量

目的:建立猪毛蒿中绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的含量测定方法。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:0.1%磷酸水-乙腈,梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;检测波长:327 nm;柱温:30℃;进样量:10μL,采用HPLC法测定猪毛蒿中绿原酸和3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的含量。结果:建立的含量测定方法稳定可靠,精密度、稳定性、重复性及加样回收率试验结果均良好。结论:本实验建立的猪毛蒿含量测定方法可用于该药材的质量控制。

3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的合成

目的研究3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的合成工艺。方法根据目标化合物3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的结构特点,本文选择咖啡酸与奎宁酸作为合成原料,拟采用选择性地保护二者活泼官能团-酰氯成酯-脱保护的方法以得到目标产物。结果目标产物经NMR和MS分析为结构正确的化合物。结论本合成工艺提高了3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的产率,但副产物较多,分离较困难。

1,5-二咖啡酰奎宁酸对MPP^+所致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-dicaffeoylquinic acid,1,5-diCQA)对多巴胺能神经元的保护作用及其可能的机制。方法采用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞作为帕金森病的体外模型,实验分为正常对照组、MPP+组和1,5-diCQA预处理组,根据1,5-diCQA预处理的浓度,将后者又分为10、20、50、100μmol/L 4组。用MTT法测定各组细胞存活率,酶标仪检测细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,RT-PCR法检测细胞突触核蛋白(α-synuclein)的mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-synuclein蛋白表达水平。结果 MPP+(250μmol/L)处理PC12细胞24 h后,与正常对照组相比,细胞存活率下降,ROS生成增多,GSH耗竭;不同浓度的1,5-diCQA预处理可以减轻MPP+导致的细胞损伤,且在一定范围内具有量-效关系;50μmol/L的1,5-diCQA预处理可以显著抑制MPP+诱导的α-synuclein转录和翻译水平的增加。结论 1,5-diCQA对MPP+诱导的PC12细胞氧化应激损伤具有浓度依赖性的抑制作用,并抑制α-synuclein的过表达,提示1,5-diCQA对帕金森病细胞模型具有保护作用。

HPLC法测定灯盏生脉胶囊中4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的含量

目的：建立HPLC法测定灯盏生脉胶囊中4，5-二-0-咖啡酰奎宁酸的含量测定方法。方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0．1％三氟乙酸（20：80）为流动相；检测波长为327nm。理论塔板数按4，5-二-O-咖啡酰奎宁酸峰计算应不低于8000。结果：4，5-二-O-咖啡酰奎宁酸进样量在0．02～0．24μg范围内呈良好线性关系（r=0．9999）。样品平均回收率为99．45％，RSD=2．7％。结论：该法操作简便，结果准确，重现性好，可用于控制灯盏生脉胶囊的质量。

HPLC法测定贡菊中1,5-二咖啡酰奎宁酸含量

目的:建立贡菊中1,5-二咖啡酰奎宁酸(IBE-5)的HPLC测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱条件为Scienhome C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-5%醋酸(5∶20∶75),流速1.0mL/min,柱温25℃,检测波长327nm。结果:IBE-5在6.25～200μg/mL之间浓度与峰面积呈现良好的线性关系,回归方程为Y=3784.5X-35.21,r=0.9996,平均加样回收率为103.71%,RSD为2.13%(n=5),测定结果贡菊中IBE-5的平均含量为0.54%。结论:该测定方法简便、准确、可靠,可用于测定贡菊中IBE-5的含量。

HPLC法同时测定神农茶颗粒中的夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和4,5-二咖啡酰奎宁酸

目的：建立同时测定神农茶颗粒中夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯、4,5-二咖啡酰奎宁酸4个成分的高效液相色谱测定方法。方法：采用Hypersil C18色谱柱（200 mm ×4.6 mm,5μm）；以乙腈-0.025 mol·L-1磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量：1.3 ml·min-1,检测波长：270 nm（夏佛塔苷和异夏佛塔苷）、208 nm（去氧地胆草内酯）、327 nm（4,5-二咖啡酰奎宁酸）,柱温为室温。结果：夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和4,5-二咖啡酰奎宁酸分别在5.850~117.000,4.650~93.000,4.160~83.200,5.470~109.400μg · ml-1范围内线性良好, r 值均大于0.999,平均加样回收率分别为97.70%、96.87%、97.53%、99.29%,RSD分别为1.40%、1.13%、1.69%、1.01%（n=6）。结论：该方法简便,结果准确,可用于神农茶颗粒的含量测定。

3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的稳定性和抗氧化活性研究

目的考察影响化合物3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸稳定性的因素并对3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的体外抗氧化活性进行初步研究。方法采用HPLC考察3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸在不同溶剂、pH、温度、光照条件下的稳定性;采用UV测定3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的体外抗氧化活性(清除DPPH自由基)。结果溶剂的种类、pH值、温度、光照条件对3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸稳定性具有一定影响。3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸具有较强的体外清除DPPH自由基活性,其活性与Vc相当[3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和Vc的IC_(50)值分别为(372.56±1.04)μg·mL^(-1)和(294.54±1.03)μg·mL^(-1)]。结论在该化合物的分离纯化及其分析检测时,不能采用纯有机溶剂为溶剂,应在中性或酸性条件下,低温、避光操作。3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸作为抗氧化剂在制药、食品、化妆品以及精细化工行业具有广阔的应用前景。

HPLC-DAD法测定野菊花栓中绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷和蒙花苷

目的建立高效液相色谱法联合二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法同时测定野菊花栓中绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷和蒙花苷。方法采用HPLC-DAD法,Thermo Hypersil GOLD C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.05%磷酸–乙腈,梯度洗脱;检测波长:327 nm;体积流量:0.8 m L/min;柱温:35℃;进样量:10μL。结果绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷和蒙花苷分别在0.105~2.100μg(r=0.999 9)、0.165~3.300μg(r=0.999 8)、0.081~1.620μg(r=0.999 7)、0.060~1.200μg(r=0.999 6)、0.317~6.340μg(r=0.999 5)与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.19%、99.54%、99.34%、98.83%和99.26%,RSD值分别为0.87%、1.04%、1.06%、1.29%、0.91%。结论该方法简便、准确、重复性好,可用于野菊花栓中有机酸和黄酮类多成分的质量控制。

HPLC法测定心脑络通颗粒中野黄芩苷和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸

目的建立HPLC法同时测定心脑络通颗粒中野黄芩苷和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的方法。方法色谱柱为岛津InterstilODS柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸(25:75),体积流量1.0mL/min,检测波长335nm,柱温37℃,进样量10μL。结果 2种成分均能达到基线分离,重现好,且呈现较好的线性关系;加样回收率分别为97.1%、99.8%,RSD值分别为0.66%、0.82%。结论该方法准确、灵敏、可靠,重复性好,可用于心脑络通颗粒的快速检测。

RP-HPLC法测定眩晕宁颗粒中3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、23-乙酰泽泻醇B和β-蜕皮甾酮

目的建立RP-HPLC法测定眩晕宁颗粒中3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、23-乙酰泽泻醇B和β-蜕皮甾酮的测定方法。方法采用Capcell Pak UG C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈–0.5%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长:348 nm(3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸)、250 nm(23-乙酰泽泻醇B)、208 nm(β-蜕皮甾酮);体积流量:1.0 mL/min;柱温:28℃;进样量:10μL。结果3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、β-蜕皮甾酮和23-乙酰泽泻醇B分别在0.0767~7.6700、0.0983~9.8300、0.0197~1.9700μg/mL线性良好,平均回收率分别为100.05%、98.33%、99.42%,RSD值分别为0.7%、1.2%、1.3%。结论方法具有前处理简单、分析时间短、检测结果准确等优点,适用于眩晕宁颗粒的质量控制。

火绒草的咖啡酰类成分研究

目的:研究火绒草的化学成分。方法:采用硅胶、葡聚糖凝胶、大孔树脂、制备液相等色谱技术进行化学成分分离,依据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果:从火绒草正丁醇萃取部位分离出11个化合物,分别鉴定为:绿原酸甲酯(1)、4-O-咖啡酰奎宁酸甲酯(2)、5-O-咖啡酰奎宁酸甲酯(3)、绿原酸(4)、4-O-咖啡酰奎宁酸(5)、1,3-O-二-咖啡酰奎宁酸(6)、3,4-O-二-咖啡酰奎宁酸甲酯(7)、4,5-O-二-咖啡酰奎宁酸甲酯(8)、3,5-O-二-咖啡酰奎宁酸(9)、3,4-O-二-咖啡酰奎宁酸(10)、4,5-O-二-咖啡酰奎宁酸(11)。结论:其中,化合物1~9为首次从该植物中分离得到。

HPLC测定野烟叶中的1,5-二咖啡酰奎宁酸

目的采用串联四极杆飞行时间质谱鉴别苗药野烟叶的指标成分,并用HPLC法测定野烟叶中指标成分1,5-二咖啡酰奎宁酸(CQA)的含量。方法采用Inertsil ODS-SP色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%甲酸(14:86),检测波长325 nm,流速0.7 mL·min^(-1),柱温30℃。结果CQA的线性范围为0.061~3.882μg,加样回收率为93.14%,RSD=1.74%。结论所用方法简便、准确、可靠、可用于野烟叶的质量控制。

有柄石韦中二氢黄酮类和咖啡酰奎宁酸类5个成分的同时测定

目的:建立同时测定有柄石韦中1个二氢黄酮类成分(圣草酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷)及4个咖啡酰奎宁酸类成分(绿原酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,4-二咖啡酰奎宁酸、1,2-二咖啡酰-环戊基-3-醇)含量的高效液相色谱法。方法:采用SHIMADZU C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长为330 nm,柱温30℃。结果:绿原酸、圣草酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,4-二咖啡酰奎宁酸、1,2-二咖啡酰-环戊基-3-醇进样量分别在0.1066~2.6655μg(r=1.0000)、0.1602~4.0060μg(r=1.0000)、0.0065~0.1625μg(r=1.0000)、0.0069~0.1715μg(r=1.0000)和0.0096~0.2390μg(r=1.0000)范围内与峰面积呈现良好的线性关系;精密度(RSD≤0.7%)、稳定性(RSD≤0.4%)良好;平均回收率(n=6)分别为101.5%、100.4%、99.7%、97.3%和101.2%,RSD分别为0.21%、0.52%、0.57%、0.92%和1.0%;4批样品中绿原酸、圣草酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、4,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,4-二咖啡酰奎宁酸和1,2-二咖啡酰-环戊基-3-醇含量范围分别为2.186~7.405、7.694~10.790、0.352~0.511、0.332~0.512和0.437~0.763 mg·g^(-1)。结论:该方法简便易行,重复性好,可作为有柄石韦药材的质量控制指标。

青蒿中咖啡酰奎宁酸类成分研究

目的对青蒿Artemisiae Annuae Herba中酚酸类成分进行系统研究。方法综合应用各种现代色谱分离技术进行系统的分离纯化,根据化合物的理化性质和核磁共振波谱数据进行结构鉴定,并通过分子对接技术和酶活性检测的方法,对分离得到的咖啡酰奎宁酸类化合物进行了靶向磷酸二酯酶的抑制活性研究。结果从青蒿水提取物经HP-20大孔吸附树脂50%乙醇洗脱部位中共分离鉴定20个咖啡酰奎宁酸类化合物,分别为4-O-咖啡酰基-5-O-阿魏酰奎宁酸甲酯(1)、3-O-阿魏酰奎宁酸(2)、3-O-阿魏酰奎宁酸甲酯(3)、4-O-阿魏酰奎宁酸甲酯(4)、5-O-阿魏酰奎宁酸甲酯(5)、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸(6)、3-O-咖啡酰基-4-O-阿魏酰奎宁酸(7)、3,4-O-二阿魏酰奎宁酸甲酯(8)、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸(9)、3-O-阿魏酰基-5-O-咖啡酰奎宁酸甲酯(10)、1-O-咖啡酰基-3-O-阿魏酰奎宁酸(11)、1,3-O-二阿魏酰奎宁酸(12)、1,5-O-二咖啡酰奎宁酸(13)、1-O-咖啡酰基-5-O-阿魏酰奎宁酸(14)、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸(15)、4-O-阿魏酰基-5-O-咖啡酰奎宁酸(16)、4-O-咖啡酰基-5-O-阿魏酰奎宁酸(17)、4-O-阿魏酰基-5-O-咖啡酰奎宁酸甲酯(18)、4,5-O-二阿魏酰奎宁酸(19)、3,4,5-O-三咖啡酰取代奎宁酸(20);分离得到的奎宁酸类化合物对磷酸二酯酶的不同亚型蛋白具有较好的抑制潜力,其中化合物9对磷酸二酯酶PDE4B的抑制活性半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)值在0.36μmol/L左右。结论化合物1为新化合物,命名为青蒿酸A,化合物3~5、8、10~12、14、18为首次从蒿属植物中分离得到,该类化合物具有靶向抑制磷酸二酯酶的作用。

高效液相色谱法测定“武当一号山银花”中5种有机酸的含量

目的:建立测定"武当一号山银花"中5种有机酸(绿原酸、咖啡酸、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸)含量的方法。方法:采用HPLC-DAD法。色谱柱:Fortis-C18(250×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速:0.9 mL/min;检测波长:327 nm;柱温:35℃。结果:5种有机酸在各自测定的范围内均呈良好的线性关系(r≥0.9994),平均回收率为99.27%～99.72%。结论:该法简便、灵敏、准确、重现性好,可用于"武当一号山银花"中5种有机酸的含量测定。

高效液相色谱法测定兰紫解毒颗粒中5种主要成分

建立高效液相色谱法同时测定兰紫解毒颗粒中绿原酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、苦参碱、氧化苦参碱和(R,S)-告依春含量的方法。取0.1 g兰紫解毒颗粒样品,用体积分数为75%的甲醇溶液超声提取30 min,取适量样品溶液上机测定;采用ACQUITY UPLCHSS T3 C18柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm)作为分析柱,柱温为25℃,以乙腈-0.1%磷酸水溶液作为流动相梯度洗脱,洗脱流量为0.25 mL/min,进样体积为1μL。绿原酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、苦参碱、氧化苦参碱和(R,S)-告依春的质量浓度在0.4076~42.5292μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.9996~0.9998,方法检出限为0.001~0.014μg/mL。样品平均加标回收率为97.85%~100.35%,测定结果的相对标准偏差为1.05%~2.93%(n=6)。该方法简单、高效、准确、稳定,可同时测定兰紫解毒颗粒中5种主要成分的含量。

RP-HPLC法同时测定茵陈中5种化学成分的含量

目的建立同时测定茵陈中芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、4，5-O-二咖啡酰奎宁酸、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷含量的方法，为茵陈药材的质量控制提供依据。方法采用RP-HPLC法。色谱柱：Luna C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相：乙腈-体积分数0.04％磷酸水溶液（体积比17：83）；检测波长：345nm。结果芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、4，5-O-二咖啡酰奎宁酸、异鼠李素弓一O-葡萄糖苷质量浓度分别在0．942～18．84mg·L^-1（r=0．9995）、1．190～23．79mg·L^-1（r=0．9995）、1．107～22．14mg·L^-1。（r=0．9994）、56．78～1．136×10^3mg·L^-1。（r=0．9990）、0．6219～12．44mg·L^-1（r=0．9998）内与峰面积呈良好的线性关系（n=5）；方法回收率（n=9）分别为98．1％、100．7％、98．4％、100．2％、101．7％。结论该方法可用于茵陈药材的质量控制。

万年蒿中两个新贝壳杉烷型二萜的分离与结构测定

自菊科蒿属植物万年蒿(Artemisia sacrorum Ledeb.)地上部分首次分得3个单体化合物(两个贝壳杉烷型二萜和一个酸性化合物),经理化常数测定及光谱分析(UV,IR,~1H-NMR,^(13)C-NMR,MS)鉴定其结构分别为3α,16α-二羟基贝壳杉烷-200-O-β-D-葡萄糖甙(Ⅰ)(3α,16α-dihydroxykaurane-20-O-β-D-glucoside(Ⅰ)),3α,6α-二羟基贝壳杉烷-19-O-β-D-葡萄糖甙(Ⅱ)(3α,16α-dihydroxykaurane-19-O-β-D-glucoside(Ⅱ))和1,4-二咖啡酰奎宁酸(Ⅲ)(1,4-dicaffeylquinic acid(Ⅲ))。(Ⅰ)和(Ⅱ)为两个未见报道的新化合物。

RP-HPLC法同时测定防暑清热饮中5种活性成分的含量

目的建立RP-HPLC法同时测定防暑清热饮中绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡糖苷、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、蒙花苷和广藿香酮含量的方法。方法采用ZORBAX-SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.2%磷酸溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为327 nm,柱温为30℃。结果绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡糖苷、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、蒙花苷和广藿香酮线性关系良好(r≥0.9996),平均加样回收率(RSD)分别为102.03%(1.63%)、102.38%(1.51%)、102.39%(1.23%)、103.14%(1.87%)和104.01%(2.33%)。结论本实验建立的测定方法简单、准确、重复性好,能够有效控制该制剂的质量。

牛蒡根中咖啡酸类化学成分及其神经保护活性研究

目的研究牛蒡Arctium lappa根中咖啡酸类化学成分及其神经保护活性。方法采用硅胶、C18反相硅胶、Sephadex LH-20、AB-8大孔树脂柱色谱以及制备HPLC等方法对咖啡酸类化合物及类似物进行分离纯化,通过波谱学方法鉴定其结构,并采用MTT法对分离得到的化合物进行抗谷氨酸诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株神经损伤的活性评价。结果从牛蒡根55%乙醇提取物中分离得到8个咖啡酸类化合物,分别鉴定为1,5-O-二咖啡酰-3-O-（4-苹果酸甲酯）-奎宁酸（1）、3,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯（2）、3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯（3）、4,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯（4）、（2E）-1,4-dimethyl-2-[（4-hydroxyphenyl）methyl]-2-butenedioicacid（5）、绿原酸甲酯（6）、咖啡酸甲酯（7）、3,4,3′,4′-tetrahydroxy-δ-truxinate（8）,经活性测试发现此类化合物均具有较好的神经保护活性。结论牛蒡根的抗谷氨酸诱导神经损伤的活性与其含有的咖啡酸类化合物有关;化合物1为新化合物,化合物5为新天然产物,化合物2-4、6、7为首次从该植物中分离得到,化合物8为首次从该属植物中分离得到。