忍冬属植物中咖啡酰奎宁酸类成分及其吸收与代谢研究进展

迄今为止从忍冬属植物中分离出24种咖啡酰奎宁酸类化合物,此类化合物显示有多种药理活性,具备广阔的应用前景,吸收与代谢研究发现其主要吸收部位为小肠,以被动扩散为主,代谢部位主要在大肠,代谢途径有甲基化、葡萄糖醛酸结合、水解、异构化和还原反应等。本文对忍冬属植物中咖啡酰奎宁酸类成分及其吸收与代谢研究进行总结,以期为咖啡酰基奎宁酸类药物研究开发提供参考。

灯盏细辛总咖啡酰奎宁酸调控PI3K/Akt/FoxO3a通路延缓衰老的作用机制研究

研究灯盏细辛总咖啡酰奎宁酸(caffeoylquinic acid from Erigeron breviscapus,EBCQA)的抗衰老作用,并探讨其潜在作用机制。以线虫为模型,观察EBCQA对其寿命、氧化抗性、热抗性、运动能力、DAF-16入核、以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的影响。腹腔注射D-半乳糖构建衰老大鼠模型,检测EBCQA对大鼠学习记忆能力、胸腺和脾脏系数、肝脏中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(Akt/protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(phosphp-Akt,p-Akt)、叉头框蛋白O3a(forkhead box class O3a,FOXO3a)、磷酸化FOXO3a(phosphp-FOXO3a,p-FOXO3a)表达,以及肝脏和血清中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量的影响。结果显示,EBCQA能够延长野生型线虫寿命,并提升其氧化抗性、热抗性和运动能力,但对线虫PI3K、Akt、FoxO3a同源体突变株寿命没有显著影响;EBCQA能促进DAF-16入核,通过DAF-16提升线虫的SOD、GSH-Px、CAT活性,降低MDA水平。在D-半乳糖诱导衰老大鼠中,EBCQA给药显著改善大鼠的学习记忆功能,提升胸腺和脾脏系数,降低PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO3a表达和MDA含量,增强SOD、GSH-Px、CAT活性。以上结果表明,EBCQA具有延缓衰老的作用,其机制可能与抑制PI3K和Akt激活、降低FOXO3a磷酸化、促进FOXO3a入核和转录活性、提升抗氧化酶活性和抑制氧化应激相关。

不同加工工艺对亳菊中绿原酸、木犀草苷和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量的影响

目的比较不同加工方法对亳菊中绿原酸、木犀草苷和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量的影响。方法样品用50%甲醇溶液提取,采用高效液相色谱法在同一色谱条件(色谱柱为Shimadzu VP-ODS,250mm×4.6mm,5μm;流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液;梯度洗脱;流速:1.0mL/min;柱温:30℃)下对亳菊3种成分同时进行测定并比较不同干燥条件下各成分的含量。结果不同加工方法对亳菊中3种有效成分含量有明显影响,对亳菊花的色泽、气味、质地有明显影响,胎菊和菊米无明显变化。结论微波和蒸制干燥可作为亳菊规模化生产的加工方法。

HPLC法测定猪毛蒿中绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸成分的含量

目的:建立猪毛蒿中绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的含量测定方法。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:0.1%磷酸水-乙腈,梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;检测波长:327 nm;柱温:30℃;进样量:10μL,采用HPLC法测定猪毛蒿中绿原酸和3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的含量。结果:建立的含量测定方法稳定可靠,精密度、稳定性、重复性及加样回收率试验结果均良好。结论:本实验建立的猪毛蒿含量测定方法可用于该药材的质量控制。

羊耳菊药材中3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量测定

目的 建立羊耳菊药材中3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的HPLC含量测定方法,为其质量控制和运用提供依据。方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈-0.1%磷酸水（17∶83）为流动相等度洗脱,检测波长329 nm,柱温40℃,流速1.0 m L/min。结果 测定了20批不同产地的羊耳菊药材,3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量在0.12%~0.65%之间。结论 该方法简便、准确、重复性好,可用于羊耳菊药材的质量评价。

3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的合成

目的研究3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的合成工艺。方法根据目标化合物3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的结构特点,本文选择咖啡酸与奎宁酸作为合成原料,拟采用选择性地保护二者活泼官能团-酰氯成酯-脱保护的方法以得到目标产物。结果目标产物经NMR和MS分析为结构正确的化合物。结论本合成工艺提高了3,5-O-二咖啡酰奎宁酸的产率,但副产物较多,分离较困难。

高效液相色谱法同时测定桑菊感冒片中绿原酸、木犀草苷和3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定桑菊感冒片中绿原酸、木犀草苷和3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸含量,以提高原质量标准。方法：样品用50%甲醇溶液提取,采用Phenomenex C18色谱柱（5μm,4.6mm×250mm）分离;流动相为0.1%磷酸-乙腈,梯度洗脱;流速为1.0mL.min-1;检测波长为348nm。结果：绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸分别在2.8128～140.6400μg.mL-1、0.9580～47.9023μg.mL-1、0.9879～49.3944μg.mL-1范围具有良好的线性;加标回收率分别为99.1%、100.9%、100.1%;RSD分别为1.5%、1.8%、1.8%（n=9）。结论：该方法简单易行,准确性和重复性好,可用于桑菊感冒片的质量控制。

RP-HPLC同时测定颜复康胶囊中绿原酸、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸、迷迭香酸和黄芩苷的含量

目的建立了同时测定颜复康胶囊中绿原酸、3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸、迷迭香酸、黄芩苷含量的反相高效液相色谱法（reversedphasehighperformanceliquidchromatography，RP—HPLc）。方法色谱柱：依利特C18柱（200mm×4．6nlin，5Ixm），流动相：乙腈（A）一体积分数为0．05％的磷酸水溶液（B）（梯度洗脱），流速：1．0mL·min一，柱温：30℃，检测波长：330am。结果绿原酸、3，5-0-双咖啡酰基奎宁酸、迷迭香酸、黄芩苷的线性分别为5．12～40．96（r=0．9996）、3．93～31．41（r=0．9997）、0．89～7．12（r=0．9996）、10．30～82．44mg·L。（r=0．9991），4种成分的平均加样回收率为99．7％～101．8％，RSD为2．8％～4．0％（n=6）。结论建立的含量测定方法可用于颜复康胶囊的质量控制。

基于一测多评法测定银黄制剂中6种咖啡酰奎宁酸类成分的含量

[目的]建立测定银黄制剂中6种咖啡酰奎宁酸类成分(绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C)含量的一测多评(QAMS)方法.[方法]采用Diamonsil C_(18)(4.6 mm×250.0 mm,5.0μm)色谱柱,以0.4%(体积分数)磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(流动速度为1.0 m L·min^(-1),进样量10μL,检测波长327 nm,柱温30℃).以绿原酸(5-O-咖啡酰奎宁酸)为内参物,计算其他5种咖啡酰奎宁酸类成分的相对校正因子并计算该5种成分的含量,实现QAMS.同时采用外标法测定6种咖啡酰奎宁酸类成分的含量,并对两种方法测定的结果进行比较,验证QAMS法的可行性和准确性.[结果]在一定线性范围内,以绿原酸为内参,新绿原酸(3-O-咖啡酰奎宁酸)、隐绿原酸(4-O-咖啡酰奎宁酸)、异绿原酸C(4,5-O-二咖啡酰奎宁酸)、异绿原酸A(3,5-O-二咖啡酰奎宁酸)和异绿原酸B(3,4-O-二咖啡酰奎宁酸)5种成分的平均校正因子分别为1.2243、0.9569、0.8141、0.8838和0.7599.QAMS与外标法测定的结果间无明显差异.[结论]成功建立了同时测定银黄系列制剂中6种咖啡酰奎宁酸的QAMS法,该方法简便、快速、准确、可行,可用于银黄制剂产品多指标成分的质量控制与评价.

洋甘菊中2种咖啡酰基奎宁酸大孔树脂纯化工艺的优化

目的优化洋甘菊中2种咖啡酰基奎宁酸大孔吸附树脂纯化工艺。方法以2种咖啡酰奎宁酸的吸附率和解吸率为评价指标筛选树脂种类。以吸附率和解吸率为评价指标,筛选最优工艺参数,包括上样液浓度、上样量、吸附速率、水冲洗用量、洗脱剂种类和用量等。结果最佳条件为采用AB-8大孔吸附树脂纯化,药液浓度0.20 g/ml,树脂柱径高比1:6,吸附速率2 BV/h,在此条件下,上柱量达7 BV;吸附好的树脂先用1 BV水洗净,流速5 BV/h,再用3 BV 50%乙醇和1 BV 70%乙醇洗脱活性部位,合并洗脱液,浓缩,干燥既得。结论该工艺稳定可靠,可用于大孔吸附树脂纯化洋甘菊中2种咖啡酰基奎宁酸。

HPLC法测定小儿感冒颗粒中绿原酸、木犀草苷3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、连翘苷的含量

目的:建立HPLC法测定小儿感冒颗粒中绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和连翘苷的含量。方法:AgilentC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%磷酸,梯度洗脱;检测波长:0~45min(327nm),45~83min(202nm);柱温:30℃;流速:1mL·min^-1,进样量10μL。结果:绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、连翘苷浓度分别在0.01267~0.3801、0.1040~1.5600、0.00840~0.2526、0.03190~0.3190μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9999,1.0000,0.9966,1.0000);平均加样回收率分别为97.89%、96.37%、96.63%和103.3%(n=6)。结论:所建立的方法可同时测定小儿感冒颗粒中的多种有效成分的含量。

1,5-二咖啡酰奎宁酸对MPP^+所致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-dicaffeoylquinic acid,1,5-diCQA)对多巴胺能神经元的保护作用及其可能的机制。方法采用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞作为帕金森病的体外模型,实验分为正常对照组、MPP+组和1,5-diCQA预处理组,根据1,5-diCQA预处理的浓度,将后者又分为10、20、50、100μmol/L 4组。用MTT法测定各组细胞存活率,酶标仪检测细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,RT-PCR法检测细胞突触核蛋白(α-synuclein)的mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-synuclein蛋白表达水平。结果 MPP+(250μmol/L)处理PC12细胞24 h后,与正常对照组相比,细胞存活率下降,ROS生成增多,GSH耗竭;不同浓度的1,5-diCQA预处理可以减轻MPP+导致的细胞损伤,且在一定范围内具有量-效关系;50μmol/L的1,5-diCQA预处理可以显著抑制MPP+诱导的α-synuclein转录和翻译水平的增加。结论 1,5-diCQA对MPP+诱导的PC12细胞氧化应激损伤具有浓度依赖性的抑制作用,并抑制α-synuclein的过表达,提示1,5-diCQA对帕金森病细胞模型具有保护作用。

HPLC法测定灯盏生脉胶囊中4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的含量

目的：建立HPLC法测定灯盏生脉胶囊中4，5-二-0-咖啡酰奎宁酸的含量测定方法。方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0．1％三氟乙酸（20：80）为流动相；检测波长为327nm。理论塔板数按4，5-二-O-咖啡酰奎宁酸峰计算应不低于8000。结果：4，5-二-O-咖啡酰奎宁酸进样量在0．02～0．24μg范围内呈良好线性关系（r=0．9999）。样品平均回收率为99．45％，RSD=2．7％。结论：该法操作简便，结果准确，重现性好，可用于控制灯盏生脉胶囊的质量。

1,5-二咖啡酰奎宁酸在肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺血再灌注损伤中的作用

目的研究1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-diCQA)对缺血再灌注诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤是否有保护作用。方法用缺糖缺氧4 h/复氧24 h处理PC12细胞作为PC12细胞缺血再灌注的体外模型,实验分为4组:空白对照组、1,5-diCQA(50μmol/L)对照组、缺血再灌注组、1,5-diCQA(50μmol/L)+缺血再灌注组。应用酶标仪测定各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量,荧光显微镜观察并测定细胞内活性氧簇(ROS)含量、线粒体膜电位水平。结果 PC12细胞经缺血再灌注损伤后,与空白对照组比较,细胞LDH释放量及ROS含量显著增加(P<0.05),线粒体膜电位显著下降(P<0.05);1,5-diCQA+缺血再灌注组与缺血再灌注组比较,细胞LDH释放量及ROS含量明显降低(P<0.05),线粒体膜电位显著升高(P<0.05);1,5-diCQA对照组与空白对照组比较,以上3项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 1,5-diCQA通过减轻氧化应激、保护线粒体功能,减轻缺血再灌注诱导的PC12细胞损伤。

液相色谱-电喷雾离子阱质谱法研究人尿中1,5-二咖啡酰奎宁酸的代谢产物

目的研究健康受试者口服1,5-二咖啡酰奎宁酸后尿液中的代谢产物。方法健康受试者每人口服1,5-二咖啡酰奎宁酸600mg,收集0-24h的尿样,经C18小柱固相萃取纯化后,用液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用技术对人尿中的代谢产物进行分析鉴定。结果在人尿中发现了1,5-二咖啡酰奎宁酸的甲基化、葡萄糖醛酸化及甲基-葡萄糖醛酸化代谢产物共28个。其中,有2个代谢产物结构经标准品对照得到确证。结论甲基化、葡萄糖醛酸化和异构化反应是1,5-二咖啡酰奎宁酸在人体内的3种重要代谢途径。

HPLC测定10种菊花中绿缘酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量

1仪器与试药 高效液相色谱仪为岛津LC-20A;电子天平为SartoriusME215S。绿缘酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品（中国药品生物制品检定所,批号110753-201314,111720-200905,111782-201204）;色谱甲醇（DIKMA）,超纯水（MILLIPORE）,其余试剂为分析纯;菊花为市售。

HPLC法测定线叶旋覆花中1,5-二咖啡酰奎宁酸含量

目的:建立线叶旋覆花中1,5-二咖啡酰奎宁酸(IBE-5)的HPLC测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱条件:ScienhomeC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-乙腈-5%醋酸(5∶20∶75,V/V/V),流速:0.8ml/min,柱温:25℃,检测波长:327nm。结果:IBE-5在0.3～1.5μg/ml之间与峰面积呈现良好的线性关系,其回归方程为Y=3397.5X-46.92,r=0.9999,平均加样回收率为103.5%,RSD为2.28%(n=3),旋覆花中IBE-5的平均含量为2.35%。结论:该测定方法简便、准确、分离效果好,可用于测定线叶旋覆花中IBE-5的含量。

1,5-二咖啡酰奎宁酸与其四乙酰化物相对生物利用度的研究

目的比较1,5-二咖啡酰奎宁酸与其四乙酰化物在大鼠体内的生物利用度,为目标化合物的筛选和结构优化提供参考依据。方法 Wistar大鼠随机分两组,分别灌胃给予等摩尔数的1,5-二咖啡酰奎宁酸（100 mg/kg）和四乙酰化物（133 mg/kg）。血浆样品经乙酸乙酯萃取后,以乙腈-水（5 mmol/L乙酸铵,pH5.0）为流动相,用Ultimate C18色谱柱（50 mm×2.1 mm,5μm）分离,采用液相色谱串联质谱法同时监测两个化合物。结果两个化合物均在5~1000 ng/ml范围内呈良好线性关系,精密度、准确度、基质效应、提取回收率等各项指标都满足生物样品测定的要求。四乙酰化物在大鼠体内迅速转化成活性代谢产物1,5-二咖啡酰奎宁酸,血浆中没有检测到四乙酰化物和可能的三乙酰化、二乙酰化和单乙酰化物。以1,5-二咖啡酰奎宁酸的量计算,大鼠口服四乙酰化物与口服1,5-二咖啡酰奎宁酸的相对生物利用度为64%。结论四乙酰化物的生物利用度低于1,5-二咖啡酰奎宁酸,开发口服制剂时1,5-二咖啡酰奎宁酸优于四乙酰化物。

单一内标多控法同步测定杏香兔耳风中绿原酸和3,5-二咖啡酰基奎宁酸的含量

目的建立杏香兔耳风中绿原酸和3,5-二咖啡酰基奎宁酸的一标多控含量测定方法。方法采用HPLC单一内标多控法进行测定,以绿原酸为3,5-二咖啡酰基奎宁酸的参照内标,在328nm处测定3,5-二咖啡酰基奎宁酸相对于绿原酸校正因子,利用校正因子和绿原酸同时测定绿原酸和3,5-二咖啡酰基奎宁酸的含量。结果绿原酸和3,5-二咖啡酰基奎宁酸分别在0.20～2.00μg和0.08～0.80μg范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率绿原酸为99.07%(RSD=0.77%),3,5-二咖啡酰基奎宁酸为99.26%(RSD=0.98%)。结论该方法准确、操作简单、专属性和重现性良好,可实现只用绿原酸一种对照品同时测绿原酸和3,5-二咖啡酰基奎宁酸的含量。

药用植物中咖啡酰奎宁酸类化合物的研究进展

咖啡酰奎宁酸是一类常见的由奎宁酸与数目不等的咖啡酸通过酯键连接而成的酚酸类化合物,广泛存在于金银花、苍耳、雪莲细胞培养物等大多药用植物及其培养物中,其具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、神经保护、调节血糖血脂等药理活性。文章对咖啡酰奎宁酸类化合物在药用植物中的分布情况、常用检测方法、药理活性研究等多个方面进行整理,为咖啡酰奎宁酸类化合物的发展方向提供理论依据及思路,为传统中药的应用及新药的开发提供参考。