氯诺昔康体外孵育体系的建立及氯诺昔康代谢产物5-OH氯诺昔康的检测

目的:建立一个以氯诺昔康为底物来研究CYP2C9~*1在体外代谢活性的体系并利用UPLC-MS/MS来检测氯诺昔康代谢产物,为临床上相关药物的合理用药提供依据。方法:以氯诺昔康为底物,利用重组昆虫细胞微粒体体外孵育法,模拟与体外孵育相似的环境进行体外代谢,通过建立UPLC-MS/MS检测氯诺昔康代谢产物,采用Graphpad prism软件绘制米曼曲线,计算K_m值和最大反应速度Vm,从而通过氯诺昔康来研究CYP2C9~*1中的体外代谢活性。结果:在最终确定的色谱条件下,氯诺昔康、其代谢产物及内标峰分离良好。K_m值为1.201μmol·L^(-1),最大反应速度Vmax值为0.276 2 pmol·min^(-1)·mg^(-1)。结论:本研究通过UPLC-MS/MS建立CYP2C9~*1酶代谢活性检测方法,此方法方便快捷、灵敏性高、准确性好,适用于氯诺昔康代谢产物的测定研究。同时通过氯诺昔康建立了体外孵育体系,为CYP2C9~*1酶代谢活性的研究提供了参考依据。

血液3-羟基异戊酰肉碱增高的遗传代谢疾病分析及其阈值的建立

目的探讨分析血液3-羟基异戊酰肉碱(C5-OH)增高的遗传代谢病类型、代谢指标及临床表现,并通过受试者工作特征(ROC)曲线法,评价串联质谱(LC-MS/MS)技术非衍生法对C5-OH增高疾病诊断价值并建立本中心C5-OH的阈值。方法选取确诊患儿20例为阳性组,正常健康儿童281例为正常对照组,通过LC-MS/MS测定血液C5-OH浓度,气相色谱质谱(GC-MS)检测尿液有机酸。同时绘制ROC曲线,确定C5-OH的最佳阈值。结果确诊3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症6例,多种羧化酶缺乏症8例,甲基丙二酸2例,多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例,中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症1例,3-甲基戊烯二酸尿症1例,肝豆状核变性合并糖原贮积症Ⅸ1例。阳性组血液C5-OH浓度显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P <0. 01);血液C5-OH ROC曲线下面积为0. 937,最佳阈值为0. 769μmol/L,敏感度和特异度分别为95. 00%、80. 07%。结论 3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶和多种羧化酶缺乏症是临床上最常见的血液C5-OH增高的遗传代谢病,LC-MS/MS非衍生法具有较高的诊断价值,建立最佳阈值有利于提高疾病的诊断率。