5-氮胞苷诱导外源表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的研究

目的研究在单层培养条件下,5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化的可能性和效率。方法实验分为实验组和对照组,实验组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,对照组为P19细胞。2组细胞均在单层培养条件下,以5-aza(1μmol/L)诱导。倒置显微镜观察细胞的生长状态;诱导4、8、12、16d,Western blot检测α-sarcomeric actin和cTnT的表达;并用免疫荧光双标检测α-sarcomeric actin和cTnT的共表达。结果实验组和对照组细胞在5-aza诱导下,生长缓慢,死亡细胞数目增多。随贴壁细胞密度增加,形成类似于聚集体贴壁生长的状态,中心细胞小、密集,周边细胞呈放射状排列,胞体长梭形,伸出突起。实验组诱导8、12、16d检测到α-sarcomeric actin和cTnT2种蛋白的表达和共表达,表达量呈增多趋势;诱导12、16d时α-sarcomerica ctin的表达量与8d比差异有统计学意义(P<0.01),诱导16d的表达量与12d比差异有统计学意义(P<0.01);cTnT在诱导12、16d的表达量与8d比差异有统计学意义(P<0.01)。对照组没有2种蛋白的表达和共表达。结论5-aza可诱导单层生长的表达Nkx2-5的P19细胞向心肌分化。