液相色谱-串联质谱法分析大鼠血液中基因组DNA羟甲基化水平

5-羟甲基胞嘧啶（5-hydroxymethyleytosine,5hmC）是由TET蛋白家族催化氧化5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine,5mC）生成的,对哺乳动物的基因转录和表达发挥着重要的调控作用.本研究建立了血液样品中5hmC的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定方法,采用试剂盒法提取血液基因组DNA,在甲酸环境下加热裂解,采用HILIC色谱柱分离,电喷雾电离和多反应监测模式定量.结果表明：5hmC在0.1～50 μg/L范围内线性关系良好,相关系数为0.999 4;高、中、低3个加标水平的平均回收率为95.87％,日内和日间的相对标准偏差分别为3.42％和4.12％;5hmC的检出限（LOD,S/N=3）为0.050 μg/L,定量限（LOQ,S/N=10）为0.100 μg/L.该方法准确、快速、稳定、灵敏,可用于血液样品全基因组中5-羟甲基胞嘧啶的检测分析.