潮州地区人乳头瘤病毒52型E6多态性分析

目的:明确潮州地区人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)52型E6编码区的基因多态性。方法:提取101例HPV 52单纯感染者宫颈脱落细胞DNA,通过特异性引物扩增HPV 52-E6编码区全序列,成功获得83份HPV 52-E6 PCR扩增阳性产物,进行测序及BLAST多态性分析。结果:成功获得76条HPV 52-E6基因全序列(447 bp)。该序列与参考株(GQ472848)的一致性为99%。在潮州地区发现11种E6编码区多态性,9种为同义突变,2种有义突变,引起所编码氨基酸改变。根据基因多态性分亚洲群和欧美群2群。亚洲群有7组,第1组,也是最为常见组(50/76)的编码序列与广州(EU924143)和香港(DQ057293)株编码完全匹配,该组称为潮州地方株;第2组(12/76)多态性与广州(EU924144)等报道的E6全序列完全匹配;第3组(仅1例)多态性与浙江大学报道(HM004117)的E6全序列完全匹配;其余4组多态性国际上尚未报道。欧美群有3组,第1组(5/76)多态性与美国(HQ537745)报道的E6全序列完全匹配;第2组(2例)多态性与美国(DQ057291)和德国(X74481)报道的E6全序列完全匹配;第3组(1例)多态性国际上尚未报道。结论:潮州地区HPV 52-E6编码区序列存在多态性,以中国东南部和东南亚国家报道E6编码区序列为主,少数与欧美报道E6全序列完全匹配。为基因疫苗的研制提供了科学依据。

潮州地区人乳头瘤病毒52型L1基因多态性分析

目的研究潮州地区优势型别人乳头瘤病毒(HPV)52型L1基因多态性。为基于L1基因工程疫苗的设计和应用提供理论依据。方法采用核酸分子快速导流杂交分型技术(HybriMax)检出HPV52,提取101例HPV52单纯感染者宫颈脱落细胞DNA,通过4对特异性引物分别扩增HPV52-L1编码区全序列,进行测序及BLAST多态性分析。结果本研究成功获得73条HPV52L1基因全序列(1590bp)。该序列与天津参考株(GQ472848)的一致性为99%。在潮州地区发现的所有L1基因序列中有31个碱基是可发生变异的,其中25种为同义突变,6种为有义突变。根据基因多态性分东亚群和欧洲群2群。东亚群有13组,其中CZ52A105是本地最常见的变异株,占61.64%(45/73),该组称为潮州地方株,其编码序列与泰国清迈报道的IN141070株(HQ537743)完全匹配,其余各组(21/73)多态性国际上均尚未报道,他们均与天津报道的TJ49-52(GQ472848)株以及泰国报道的IN141070(HQ537743)株亲缘关系最近,有1～6个碱基不同。欧洲群有2组为CZ52E928(2/73)和CZ52E136(5/73),其基因序列分别与德国REF(X74481)株和北美洲Qv03719(HQ537745)株的L1全序列完全匹配。结论潮州地区HPV52-L1基因多态性与中国东南部和东南亚国家报道的类似,CZ52A105是潮州地方株。

人乳头瘤病毒52型E2和E6/E7在宫颈病变中的表达及其意义

目的观察人乳头瘤病毒52型(human papillomavirus 52,HPV52)E2及E6/E7m RNA在宫颈癌及癌前病变组织中的表达以及高危型HPV分布情况,探讨HPV52感染及E2、E6/E7表达在宫颈癌发生发展中的临床意义。方法收集512例高危型HPV阳性病例,依据病理学诊断归入非典型鳞状上皮细胞病变组(atypical squamous cell lesions,ASC)、低度鳞状上皮内病变组(low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL组)、高度鳞状上皮内病变组(high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)以及鳞状细胞癌组(squamous cell carcinoma,SCC)。以实时荧光定量PCR方法检测124例HPV52阳性样本E2及E6/E7 m RNA,并进行卡方检验及Spearman相关性分析。结果 HPV52型E2与E6/E7m RNA呈负相关,rs=-0.98,P<0.01,两者检出率在组间有统计学差异(P<0.05)。在13种高危型HPV中,检出率最高前三位为HPV52(24.2%)、HPV58(20.5%)、HPV16(11.7%)。结论 HPV52型E2缺失、E6/E7表达过度是宫颈癌变的关键环节,E2、E6/E7水平在评估宫颈病变程度中具有参考价值。同时,HPV52型在宫颈癌的发展其作用值得进一步研究。

ZY6000/26/52型掩护式液压支架的技术改造

从设计和使用角度分析了ZY6000/26/52型大采高液压支架在使用中产生的严重影响其支护性能的原因,介绍了该型支架的3项主要技术改造措施。

人乳头瘤病毒16和52型双荧光等温多自配引发扩增的检测方法

应用等温多自配引发扩增(IMSA)技术,分别针对人乳头瘤病毒(HPV)16型的E7和52型的E6基因序列设计6条特异性引物,并在检测体系中加入羟基萘酚蓝(HNB)和SYBR GreenⅠ的混合双荧光指示剂,建立快速检测人乳头瘤病毒的双荧光IMSA方法.结果表明:340μmol/L HNB与1∶10 000SYBR GreenⅠ混合构建的双荧光指示剂在IMSA反应体系中具有明确的指示效果,455nm蓝光激发下阳性反应管双荧光显色为黄绿色,阴性反应管双荧光显色为橘红色;该方法对HPV16和HPV52型检测限分别达60,600拷贝/μL,可特异性检出样品中HPV16和HPV52,与临床检测结果比对无差异.

荆州地区HPV-52型E7基因多态性分析和T细胞表位预测

目的研究湖北荆州地区人乳头瘤病毒52型(HPV-52)E7基因变异特征以及预测T细胞表位。方法扩增HPV-52阳性样本E7基因,测序并与GenBank参考序列比对,分析序列变异性,构建E7基因系统发育树,估算基因选择压力以及预测E7蛋白T细胞表位。结果 HPV-52 E7基因突变序列中检测到19个单核苷酸突变,包括10个非同义突变和9个同义突变。常见的单核苷酸突变为751C>T和801A>G,突变率分别为96.51%和98.84%。3个非同义突变发生在编码E7蛋白β折叠区域内。系统进化分析表明荆州地区HPV-52 E7基因变异序列主要分布在B谱系。对于HLA-A*02:01,MLLGTLQVV(84-92)表位亲和力最强,对于HLA-DQA1*01:01/DQB1*02:01,ATIKDYILDLQPETT(6-20)表位亲和力最强。结论湖北荆州地区HPV-52 E7基因序列具有多态性,单核苷酸突变的发现以及T细胞表位预测可为HPV治疗性疫苗的研究提供科学依据。

中型客车用KQ52型制冷空调电控系统

详细介绍中型客车使用的KQ5 2型空调系统电气原理 ,分析该电气系统各元件的基本作用 。

YCdT52型抽出式局部扇风机的研制

YCdT52型抽出式局部扇风机是我国首次研制成功的一种内装电机,具有抽压两种功能的局部扇风机。额定功率11kW,工作风量160～250m^3/min,工作风压2580～720Pa。为保证电机安全运转,设计了一种新颖的隔离室结构,使含有瓦斯和煤尘的有害气流经过风机亮体和隔离室之间的环形通道排出。为防止瓦斯和煤尘经过风机内部产生火花而引起事故,该机采用了新材料。经国家级检测中心进行检验,取得了各项检验合格证件。本机具有体积小、重量轻、效率高等特点,并保存了 JBT 扇风机各项优点及几十年的使用经验,吊在顶梁上就可运行,符合我国实际情况。

5—52型送风机的选型及应用

送风机效率的高低对厂用电率影响较大。本文介绍了风机选型的经济比较、5—52型风机的设计及改造后的效果,节能效果显著,改造费用仅半年即可收回。本文介绍的5—52 No18:5D 型风机对220—230吨/时的煤粉炉具有通用性。

LNC-52型高强混凝土泵送剂应用分析

高强混凝土是一种新型高质量混凝土建筑施工材料,广泛应用于各种工业及民用建筑施工项目中,有着优秀的经济社会价值。本文简单介绍了普通混凝土的建筑施工性能,借此分析高强混凝土的建筑施工应用优势。以及LNC-52型高强混凝土泵送剂组成及发展,借此完成LNC-52型高强混凝土泵送剂在建筑工程中的应用效果分析。

LW—52型喷水织机控制回路的改进

分析LW52型喷水织机操作繁琐的原因,对该机控制回路进行改进,使工作状态转换由手动变为自动。

ST45、PT52型盖板针布的纺纱性能与工艺效果

本文通过纺纱工艺对比试验及生条和成纱质量指标的综合分析,验证了ST45、PT52型盖板针布的纺纱性能及工艺效果良好,适应纺纱生产的需要,是良好的分梳配套元件。

人乳头瘤病毒52型E 6和E 7基因突变与宫颈癌及癌前病变关系的研究

目的分析人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)52型E 6和E 7基因突变位点分布,评估基因突变与宫颈癌及癌前病变的相关性。方法收集2016年1月至2017年5月经HPV DNA检测为HPV 52单独阳性的DNA样本120例。应用Generunner V 3.01软件设计扩增E 6/E 7区域的1对PCR引物和Sanger测序的4条延伸引物。以HPV 52原型(Gen Bank Accession No.X 74481.1)作为参考序列,应用MEGA 5.05软件分析每个样本的碱基序列和蛋白序列的变异;应用SPSS 17.0进行一般线性相关检验和Fisher's检验或者Pearson Chi-square(χ~2)检验,分析E 6和E 7基因突变与宫颈病变的关系。结果在104例样本中,共发现HPV 52 E 6基因的16个突变位点和E 7基因的17个突变位点。HPV 52 E 6和E 7基因中不同突变位点的突变率差异无统计学意义(χ~2=14.829、12.548,P=0.464、0.766)。在HPV 52 E 6和E 7基因的33种突变中,无突变位点的突变率随着宫颈病变等级恶化有升高或降低的趋势(P>0.05)。HPV 52 E 6基因在CIN 1+样本中的突变频率(14.0%)显著低于正常样本中突变频率(34.4%),(OR=0.31,95%CI=0.11~0.85,χ~2=5.500,P=0.019)。E 7基因的突变频率在CIN 1+样本中的突变频率(16.3%)也低于在正常样本中的突变频率(27.9%),但差异无统计学意义(OR=0.50,95%CI=0.19~1.35,χ~2=1.908,P=0.167)。结论在单独感染HPV 52的条件下,E 6基因突变是阻碍宫颈病变和宫颈癌发生发展的因素。

北京地区收集的人乳头瘤病毒52型基因突变和型下分类的研究

目的 了解国内人乳头瘤病毒(human papillomavirus type,HPV) 52型E7癌基因和长调控区(long control region,LCR)的序列信息,并对其进行型下系(lineage)分类的研究.方法 共收集了1 244例宫颈脱落细胞样品,从中提取DNA并进行HPV DNA分型检测.使用PCR法扩增了其中79例HPV52单独感染样品的E7基因和LCR并进行了序列分析,其中全部测序成功的样本数为50例.分析了该50例样品代表的大陆地区与亚洲其他地区的HPV52型下系分布构成.结果 E7基因和LCR的变异频率分别为92.0％ (46/50)和96.0％ (48/50).E7基因和LCR分别存在5种和14种基因型.测序成功的50例HPV52分离株在型下系分类上,B占90.0％(45/50),A占8.0％ (4/50),C占2.0％ (1/50),没有发现分类为D的样品.亚洲各地区间HPV52的系分布构成比不同.结论 国内的HPV52在E7基因和LCR上存在着高频率的突变.亚洲各地区间HPV52的系分布构成存在地域性.

人乳头瘤病毒52型病毒样颗粒制备及其生物活性

[目的]利用大肠杆菌系统表达人乳头瘤病毒52型(HPV52) L1蛋白,并获得HPV52病毒样颗粒(VLPs)。[方法]优化并合成HPV52L1基因,构建p ET-30a-52L1表达载体粒,转化大肠杆菌E. coli BL21 StarTM(DE3)。经IPTG诱导表达,阳离子交换层析纯化,SDS-PAGE和Western Blotting鉴定,BALB/c小鼠免疫2次,初次后4w检测免疫血清中HPV52中和抗体滴度。[结果]获得纯度90%的HPV52L1蛋白,将获得的HPV52L1蛋白进行解组装和重组装形成VLPs,动态光散射观察到粒径约为70nm,透射电镜观察到50～60nm的均一VLPs,中和抗体滴度达25600。[结论]大肠杆菌系统表达人乳头瘤病毒52型(HPV52) L1蛋白,并经过一步柱层析纯化获得纯度达90%的L1蛋白,经解组装重组装获得粒径大小为50～60nm的VLPs,具有良好免疫原性。

人乳头瘤病毒52型L1蛋白病毒样颗粒在毕赤酵母中的优化表达、纯化及其免疫原性

目的 利用毕赤酵母系统表达人乳头瘤病毒52型(human papillomaviruses 52,HPV52)L1蛋白,并检测其病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的免疫原性。方法 采用同义密码子替换的方法对HPV52 L1蛋白的野生型基因进行密码子优化,并在体外构建多拷贝表达质粒,经转化和筛选获得在毕赤酵母系统中高表达的HPV52 L1 VLP菌种。采用15 L发酵罐大规模培养,菌液破碎上清经阳离子交换层析和分子筛排阻层析两步法纯化,获得HPV52 L1VLP。动态光散射和透射电子显微镜观察HPV52 L1 VLP的大小和形态,假病毒中和试验检测HPV52 L1 VLP在小鼠及大鼠体内的免疫原性。结果 HPV52 L1 VLP在溶液中呈较均一的单一组分,水合粒径为91. 37 nm;镜下观察呈均一的、直径约50 nm的球状空心颗粒,大小与HPV52天然病毒颗粒相近。HPV52 L1 VLP相对分子质量约56 000,纯度达95%以上,产量为3. 6 mg/L,且可与小鼠抗HPV L1多克隆单抗发生特异性结合。HPV52 L1 VLP在小鼠体内的半数有效剂量(ED50)为0. 010μg,在大鼠体内诱导产生的中和抗体滴度高达106。结论 于毕赤酵母系统成功表达了HPV52 L1 VLP,且具有良好的免疫原性,为相关预防性疫苗的研发奠定了基础。