自身抗原52 kD-Ro/SSA的序列分析及抗原性预测

目的：分析自身抗原５２ｋＤＲｏ／ＳＳＡ的序列结构，预测其抗原位点。方法：将自身抗原５２ｋＤＲｏ／ＳＳＡ的氨基酸序列输入“蛋白质结构预测”软件包，分析蛋白质分子亲水性、表面可及性、柔性，并模拟其二级结构，预测其主要抗原位点。结果：自身抗原５２ｋＤＲｏ／ＳＳＡ是多抗原位点，其氨基酸序列中１２０～１３０、３００～３２０、３６０～３８０位间抗原性较强。结论：确定５２ｋＤＲｏ／ＳＳＡ的抗原优势表位，为研究抗原抗体间相互作用及其疾病机制打下基础。

ANA、SSA、SSB、RO-52在干燥综合征诊断中的临床意义

目的探讨干燥综合征(SS)患者ANA、SSA、SSB和RO-52抗体检测的临床意义。方法选取2010年5月至2012年5月南昌大学第二附属医院住院及门诊SS患者49例和非SS患者144例及40例健康对照体检者,采用间接免疫荧光法测ANA;免疫印迹法测抗SSA、SSB和RO-52抗体,并对结果进行回顾性分析。结果 (1)三组ANA、SSA、SSB、RO-52阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01);(2)SS组ANA与SSB、RO-52阳性率(P<0.01)和SSA与RO-52阳性率(P<0.05)比较差异有统计学意义,SLE组除SSA与RO-52外其余阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),MCTD组SSA与SSB、RO-52阳性率(P<0.01)和SSA与SSB阳性率(P<0.05)比较差异有统计学意义,RA组ANA与RO-52阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),各组其余阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);(3)SS组SSA/SSB与SSA/SSB/RO-52阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),SLE组SSA/RO-52与其余各项阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),MCTD组SSA/RO-52与其余各项阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);(4)在SS患者抗体检测中ANA的敏感性高但特异性差,SSA、SSB、RO-52敏感性稍低但特异性高。结论 SS患者检测ANA及抗SSA、SSB和RO-52抗体等自身抗体,对SS的诊断、鉴别诊断具有重要的作用,可提高SS的诊疗水平。

自身抗原SSA/Ro-52kD抗原优势表位分析

探讨自身抗原ＳＳＡ／Ｒｏ－５２ｋＤ的抗原优势表位，为疾病机制的研究提供依据，根据计算机软件进行的蛋白质序列结构分析。采用ＰＣＲ法克隆自身抗原ＳＳＡ／Ｒｏ－５２ｋＤ多肽片段的ｃＤＮＡ，定向插入表达载体ＰＧＥＸ－５Ｘ－１，并且导入大肠杆菌中表达重组融合蛋白，用ＧＳＴ亲和层析柱进行纯化，经免疫印迹法与病人阳性血清进行反应，结果表明片段Ｒｏ５２３具有较强的抗原性。

抗SSA、抗SSB、抗Ro52抗体在自身免疫性疾病中的临床价值探讨

目的研究抗SSA、抗SSB和抗Ro52抗体在自身免疫性疾病(autoimmune diseases,AID)诊断中的临床意义,探讨在SLE、SS、RA中相关实验室项目结果在抗SSA/SSB/Ro52抗体的单阳性组和多阳性组间是否存在差异。方法选取抗SSA/SSB/Ro52抗体结果为阳性的患者,分析他们的相关实验室检测结果与临床最终诊断。结果抗SSA/SSB/Ro52抗体不同阳性组合之间AID和非AID诊断的构成比具有显著差异,并且随着抗体阳性的增多AID所占的百分比也随着增加,各组百分比按大小排列为SSA+SSB+Ro52+>SSA+SSB+/SSA+Ro52+/SSB+R052+>SSA+/SSB+/Ro52+;SLE患者Ig G的升高、RA淋巴细胞的降低、SS患者球蛋白Ig G的升高以及C3的降低在单阳性组与多阳性组间有显著差异。结论抗SSA、抗SSB、抗Ro52抗体可作为AID的筛选指标,阳性抗体越多AID确诊的可能性越大。在SLE、RA、SS患者中,部分实验结果在单阳性组与多阳性组间有显著差异,提示多抗体阳性可能与疾病的活动性或严重程度有关。

人自身抗原SSA52的酵母重组分泌表达及其斑点免疫金渗滤法的建立

人自身抗原SSA52通常采用组织提取法或原核表达获得,存在诸多问题。通过基因克隆技术,在毕赤酵母中表达人自身抗原SSA52,并建立斑点免疫金渗滤法。采用RT-PCR扩增SSA52基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-SSA52。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定,并建立斑点免疫金渗滤法(dot immuogold filtration assay,DIGFA),进行初步临床应用对比研究。结果显示,RT-PCR产物约为1 400 bp,与预期1 428 bp接近,pPIC9k-SSA52重组阳性克隆测序结果与基因库核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物SSA52的相对分子质量约52 kD。Western blot法证实表达产物具有天然SSA52分子的免疫原性,阴性对照菌未见目的表达条带。DIGFA与欧蒙酶免疫斑点法的阳性符合率为95.2%(120/126),阴性符合率为94.0%(47/50),总符合率为94.9%(167/176);两种方法检测结果无统计学显著差异(P>0.05)。说明SSA52在毕赤酵母中分泌表达成功,建立的DIGFA简便、快速、准确。

利用重组抗原检测抗SSA/Ro-52kD自身抗体及其临床意义

目的重组表达 SSA/ Ro- 5 2 k D融合蛋白 ,并用于检测自身抗体。方法应用 DNA重组技术构建 SSA/Ro- 5 2 k D工程菌 ,并表达 SSA/ Ro- 5 2 k D融合蛋白。经谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)柱层析纯化后 ,作为抗原 ,分别用免疫印迹法 (IBT)和酶联免疫吸附试验 (EL ISA)检测 2 0份 SS患者血清、6 0份 SL E患者血清和 30份正常人血清。结果重组抗原检测抗 SSA/ Ro- 5 2 k D自身抗体敏感性较高 ,而且抗体滴度与病程相关。结论利用重组抗原对自身抗体进行定性。

通过慢病毒载体构建SSA/Ro52稳定基因沉默细胞系

目的利用慢病毒载体持续表达RNA干扰序列抑制基因表达,建立SSA/Ro52稳定基因沉默细胞系,为进一步研究SSA/Ro52的功能提供有效工具。方法 4条SSA/Ro52特异序列(克隆1为TGGCATGGTCTCCTTCTACAA,克隆2为CTGCCTTCTTTATGGGACTTA,克隆9为TGAG从GTTGGAAGTGGAAAT,克隆1 1为AGTTATCCTATGGTCCTGGGT)和无关对照序列克隆至慢病毒载体pLKO-puro,表达后可形成小发卡结RNA(small hair-pin,shRNA),通过RNA干扰机制抑制特异基因表达。表达SSA/Ro52特异序列的克隆1、2、9、11以及表达无关序列的对照克隆(scramble,S)分别与包装载体pGag-Pol和pVSV-G共同转染293T细胞,收集含病毒颗粒的培养液。用表达SSA/Ro52特异序列和无关对照序列的病毒颗粒感染Hela细胞,抗生素筛选,建立稳定细胞系。以GAPDH为内对照定量实时PCR检测SSA/Ro52 mRNA的表达。免疫印记检测SSA/Ro52蛋白,扫描SSA/Ro52条带与β-actin条带相比为SSA/Ro52蛋白的相对表达水平。克隆1、2、9、11转染细胞中SSA/Ro52的表达水平与对照克隆S的比值为基因表达的抑制程度。结果慢病毒颗粒可以有效感染Hela细胞,含shRNA表达框架的病毒序列可以整合至细胞基因组,形成稳定细胞系。克隆1、2、9、1 1转染细胞在抗生素筛选3 d后,其SSA/Ro52 mRNA表达水平分别是克隆S转染细胞的25.5%、31.2%、13.0%和77.2%;而上述克隆转染细胞SSA/Ro52蛋白表达水平是对照的5%、50%、10%和80%。培养4周后上述克隆SSA/Ro52蛋白表达水平没有明显变化。但用干扰素α刺激细胞后,SSA/Ro52在对照克隆转染细胞中表达增加,而克隆1、2、9、11转染细胞SSA/Ro52的表达是对照的30%、70%、5%和100%。结论克隆1、2、9可以有效抑制SSA/Ro52的表达,通过慢病毒载体转染细胞建立了SSA/Ro52稳定基因静默细胞系。在SSA/Ro52表达被上调时,克隆9仍然可以有效抑制SSA/Ro52的表达,为进一步研究SSA/Ro52的功能打下了基础。

抗SSA60、SSA52、SSB/La抗体及抗着丝点B抗体在老年性干燥综合征干眼症诊断中的意义

目的探讨抗SSA60、SSA52、SSB/La抗体及抗着丝点B抗体在老年性干燥综合征干眼症诊断中的意义。方法选取2015年7月至2019年11月在我院风湿免疫科和眼科就诊的老年性干燥综合症患者157例,在确诊为干眼的患者中采用免疫印迹法和双扩散法检测抗SSA60、SSA52、SSB/La抗体及抗着丝点B抗体的表达情况。比较泪液分泌时间、泪膜破裂时间、角膜荧光素染色评分和干眼评分四个指标,分析其意义。结果老年性干燥综合症患者中,有79例为干眼症,阳性率为50.3%。其中抗SSA60抗体、抗SSA52抗体、抗SSB/La抗体,抗着丝点B抗体阳性比例分别为52.2%,占52.2%,占33.1%,占11.4%。抗SSA60抗体、抗SSA52抗体、抗SSB/La抗体阳性和阴性患者在老年性干燥综合征患者干眼症中比较都有统计学意义(P<0.01),抗着丝点B抗体阳性和阴性患者在老年性干燥综合征患者的干眼症中比较有统计学意义(P<0.05)。抗SSA60抗体阳性、抗SSA52抗体阳性的患者相对于阴性患者来说,出现泪液分泌时间和泪膜破裂时间短、角膜荧光素染色评分和干眼评分高,两组患者差异均有统计学意义(P<0.001)。抗SSB/La抗体阳性的患者相对于阴性患者来说,出现泪液分泌时间和泪膜破裂时间短、角膜荧光素染色评分和干眼评分高,两组患者差异均有统计学意义(P<0.01)。抗着丝点B抗体阳性的患者相对于阴性患者来说,出现泪液分泌时间短,两组患者差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者泪膜破裂时间、角膜荧光素染色评分、干眼评分差异无统计学意义(P>0.05)。结论抗SSA60、SSA52、SSB/La抗体及抗着丝点B在老年性干燥综合征中干眼症患者中被检测比例高,4种抗体的联合检测能提示干眼症的发生,其中抗SSA60抗体、抗SSA52抗体、抗SSB/La抗体可能意义更大。

抗SSA/Ro52抗体阳性获得性血友病A1例报告并文献复习

获得性血友病A(AHA)是较少见的血液系统疾病,主要表现为黏膜、肌肉、内脏的出血,并且出血通常具有自发性、突然性、弥漫性和危急性,诊治不及时可造成严重出血,导致患者死亡。本文通过报道1例抗SSA/Ro52阳性AHA患者的临床诊断及治疗过程,旨在加深对于AHA的认识。

HCV感染者抗SSA/Ro52抗体及其IgG亚型检测的意义

目的分析检测HCV感染者抗SSA/Ro52抗体及其Ig G亚型的意义。方法选取2012年1月至2014年8月开封市中心医院收治的临床确诊HCV感染者60例,同期系统性红斑狼疮(SLE)患者56例,干燥综合征患者23例,健康体检者60例,用线性免疫印迹法筛查抗SSA/Ro52抗体,间接ELISA检测抗SSA/Ro52抗体Ig G亚型。结果 HCV感染者抗SSA/Ro52抗体阳性率较SLE以及干燥综合征患者低(P<0.05),HCV感染者的单项阳性率高于SLE以及干燥综合征患者(P<0.05)。HCV感染者、SLE、干燥综合征阳性患者Ig G1亚型阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论单项抗SSA/Ro52抗体阳性是区分HCV感染是否合并干燥综合征的重要指标之一。

两种方法检测146例抗核抗体结果的差异分析

目的探讨间接免疫荧光法(IIF)和免疫印迹法(LIA)检测抗核抗体(ANA)的结果差异及临床价值。方法收集146例ANA检测IIF(-)与LIA(+)的标本,并进行乙型肝炎病毒(HBV)抗原、抗体和丙型肝炎病毒(HCV)抗体的检测。结果 (1)在146例IIF(-)LIA(+)的标本中,单独出现抗Ro52抗体、抗SS-A、抗AMA-M2抗体阳性的标本数分别为69例、42例、15例,抗RNP抗体、抗PCNA抗体、PM-Scl抗体阳性的标本数分别为3例、5例、2例,有两项阳性的共8例。(2)单Ro52抗体阳性标本中,乙肝小三阳:HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+),乙肝大三阳:HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)及丙型肝炎患者患者例数分别为51例、4例、7例,非肝炎患者7例。(3)单SSA抗体阳性标本中,乙型肝炎患者6例,非乙肝的患者36例。结论 IIF检测ANA容易漏检Ro52抗体、SSA抗体,Ro52抗体与乙肝小三阳有一定关系。

抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎的临床分析(附5例报告及文献复习)

目的探讨抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎的临床特征及治疗。方法回顾性分析5例抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎患者的临床资料,结合文献复习进行讨论。结果5例患者中男性1例、女性4例。主要临床表现为典型皮疹及肢体无力,可伴有呼吸困难、关节症状及口干眼干等症状,均诊断为抗MDA5抗体和抗SSA/Ro52抗体双阳性皮肌炎,且合并间质性肺炎;患者平均发病年龄(62.2±6.18)岁,平均病程(4.2±1.64)个月;1例患者血清肌酸激酶升高(472 U·L^-1);诊断明确后5例患者均接受了糖皮质激素与免疫抑制剂联合治疗。结论抗MDA5抗体与抗SSA/Ro52抗体双阳性的皮肌炎临床主要表现为典型皮疹,肢体无力、呼吸困难、关节症状及口干眼干等症状常见,血清肌酸激酶升高不明显,易合并间质性肺病;糖皮质激素与免疫抑制剂联合治疗为主要方案。预后不良。

结缔组织病血液系统损害与自身抗体及免疫学指标的相关性分析

目的探讨结缔组织病(CTD)患者血液系统损害与自身抗体及免疫学指标的相关性。方法回顾性分析137例CTD患者血液系统损害情况,同时对伴与不伴血液系统损害的CTD患者自身抗体及免疫学指标检测结果进行对比分析。结果 CTD患者出现血液系统损害的阳性率,分别为系统性红斑狼疮(SLE)75%、原发性干燥综合征(p SS)54%、类风湿关节炎(RA)39%、未分化结缔组织病(UCTD)63%。SLE三系损害发生率最高(50%),与p SS、RA、UCTD三系损害发生率比较差异有统计学意义。p SS与RA均以单系损害为主,比例分别为58%、85%;p SS以白细胞、血小板下降为主,RA以血红蛋白下降为主。UCTD单系与多系损害比例无明显差异。伴与不伴血液系统损害的CTD患者一般情况及免疫学指标之间比较差异无统计学意义;自身抗体之间比较显示,抗SSA/Ro60抗体、抗SSA/Ro52抗体阳性差异有统计学意义。结论 CTD患者发生血液系统损害概率高,其中以SLE发生率最高,SLE三系损害最常见。自身抗体中抗SSA/Ro60抗体、抗SSA/Ro52抗体与结缔组织病血液系统损害具有相关性。

双胞胎之一自身抗体相关性先天性心脏传导阻滞的诊治(附1例报告)

目的探讨自身抗体相关性先天性心脏传导阻滞(ACHB)的有效诊断及治疗方法。方法对1例双胞胎之一ACHB患儿的临床资料作回顾性分析。结果双胞胎之一患儿在母亲孕期及出生后心率慢,出生后48 min入院。患儿在孕20周时胎心为60~70次/min,未予处理,另一胎未见异常。患儿胎龄35周时剖宫产娩出,出生体质量2280 g。患儿母亲无系统性红斑狼疮及干燥综合征病史。患儿血常规及肝功能检查大致正常,心电图提示Ⅱ度Ⅱ型房室传导阻滞,心脏彩超检查提示动脉导管未闭。患儿母亲和双胞胎抗SSA/Ro-60抗体、抗SSB/Ro-52抗体均阳性,人类白细胞抗原(HLA)基因均阴性。诊断为ACHB、动脉导管未闭。给予静脉注射人免疫球蛋白、口服布洛芬治疗。1周后复查心电图结果仍为Ⅱ度Ⅱ型房室传导阻滞,但动脉导管已关闭。5月龄时复查抗SSA/Ro-60抗体、抗SSB/Ro-52抗体均阴性。结论ACHB患儿在胎儿或出生后可因心脏传导阻滞出现心率减慢,其发病和母体的自身抗体(抗SSA/Ro-60抗体和抗SSB抗体)相关,母体孕前常已有系统性红斑狼疮或干燥综合征,但也可缺如。ACHB的发展涉及多个因素,如遗传、胎儿易感性、母体因素、胎儿或外部环境因素等。围生期及早诊治可改善预后,人免疫球蛋白治疗效果较好。

抗Ro52抗体和抗Ro60抗体的临床应用价值探讨

目的探讨抗SSa抗体(包括抗Ro52抗体和抗Ro60抗体)在临床疾病诊断中的价值。方法回顾性总结2009年1月-2013年12月23 145例抗核抗体结果阳性并同时进行抗可提取性核抗原(ENA)抗体谱(包括抗Sm、抗Ro52、抗Ro60、抗SSb、抗RNP、抗Scl-70、抗Jo-1及抗Rib-P抗体)的患者,分析抗Ro52、抗Ro60分别与其他检测结果及临床信息的关系。结果 23 145例患者中抗Ro60抗体阳性率为35.19%(8 145/23 145),抗Ro52抗体阳性率为13.16%(3 046/23 145)。且抗Ro60抗体在抗SSb、抗RNP、抗Sm及抗Rib-P阳性患者中的阳性率较抗Ro52高(P<0.05);抗Ro52抗体阴性而抗Ro60抗体阳性(Ro52-Ro60+)结果在自身免疫性疾病、非自身免疫性疾病及症状患者组中所占比例较抗Ro52抗体阳性而抗Ro60抗体阴性(Ro52+Ro60-)结果均较高(P<0.05)。结论抗Ro60抗体在自身免疫性疾病及非自身免疫性疾病的阳性率较抗Ro52抗体高,抗Ro60抗体的检测敏感度及自身免疫性疾病预示价值较抗Ro52抗体高,但两者的诊断特异性均较差,临床疾病诊断价值有限。