基因释放剂在制备结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶DNA模板中的应用

目的 :探讨基因释放剂的应用并为结核病DNA疫苗的研究提供靶基因。方法 :分别用基因释放剂提取法与DNA提取试剂盒提取法制备结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶DNA模板 ,采用PCR法从模板中扩增早期分泌性抗原靶 (ESAT - 6 )基因并测序证实所扩增的基因是否为目的基因。结果 :从基因释放剂提取法与DNA提取试剂盒提取法制备的DNA模板中均成功地扩增出了目的基因ESAT - 6。结论 :基因释放剂提取法制备结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶DNA模板方便、快捷 ,提高了制备DNA模板效率。

C-erbB_2、p53基因及PCNA在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的:探讨上皮性卵巢癌组织中C-erbB_2、p53及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及与病理类型、组织学分级及临床分期的关系。方法:应用免疫组织化学S-P方法检测65例上皮性卵巢癌组织中C-erbB_2蛋白、p53蛋白及PCNA蛋白的表达。结果:卵巢癌组织中存在C-erbB_2、p53的异常丧达,表达的差异性与病理类型无关(P>0.05),与组织学分级及临床分期有关(P<0.05);在中、低分化的卵巢癌中其增殖细胞核抗原(PCNA)的表达较高分化者明显(P<0.05)。结论:C-erbB_2、p53的过度表达与卵巢癌的发生、发展及分化等过程密切相关,C-erbB_2、p53和PCNA的过度表达可作为判断卵巢癌预后不良的指标。

癌胚抗原分泌性肿瘤患者外周血中癌胚抗原mRNA的表达

目的观察外周血中癌胚抗原（ＣＥＡ）分泌性肿瘤标志基因的表达。方法设计特异的引物，用逆转录ＰＣＲ方法检 测正常人及肿瘤病人外周血有核细胞成分中的 ＣＥＡ ｍＲＮＡ。结果 ４６例肿瘤患者中有 ２５例检出 ＣＥＡ ｍＲＮＡ，阳性率 为５４．３５％；正常对照者 １２例均阴性。肿瘤临床分期为Ⅲ、Ⅳ期的患者血清ＣＥＡｍＲＮＡ检出率明显高于Ⅰ、Ⅱ期的病人 （Ｐ＜０．０５）。 ＣＥＡ ｍＲＮＡ阳性率与血清 ＣＥＡ水平无显著性关系（Ｐ＜０．０５）。临床有远处转移者 ＣＥＡ ｍＲＮＡ阳性率明显高 于无远处转移者（Ｐ＜０．０５）。对临床无远处转移征兆，而 ＣＥＡ ｍＲＮＡ检测阳性的 １２例患者进行半年的随访，３例出现脏 器的转移。结论外周血标志基因检测是肿瘤微转移检测的灵敏方法。ＣＥＡｍＲＮＡ阳性率与肿瘤临床分期正相关，与肿 瘤的远处转移密切相关，而与血清ＣＥＡ水平无显著性关系。血中标志基因阳性可能提示肿瘤的早期转移。

抗癌基因p53、增殖细胞核抗原与肺癌分期、组织学类型的关系

抗癌基因ｐ５３、增殖细胞核抗原与肺癌分期、组织学类型的关系陈至善，郑颂国一、材料和方法１、材料取自外科手术标本，经病理证实原发性肺癌１１２例。２、方法免疫组织化学ＡＢＣ法。３、临床资料１１２例肺癌的Ｔ、Ｔ２、Ｔ３分别为３２、５０、３０例；Ｎ０、Ｎ１、...

旋毛虫ES抗原基因的克隆和序列分析

目的 完成旋毛虫ES抗原 (Excretory -secretoryAntigen)中 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因的克隆和测序 ,并与已发表的该两种基因的相关序列比较、分析。方法 通过RT -PCR ,从旋毛虫幼虫总RNA中扩增得到特异性片段 ,利用TA克隆将PCR产物克隆入 pUC -T载体中并进行测序及同源性比较。 结果 RT -PCR扩增得到 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因 ,序列分析表明 ,其核苷酸序列与已发表的 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原的同源性均为 99%。结论 成功提取了旋毛虫幼虫的总RNA ,并用PT -PCR方法克隆了 4 3kDa分泌性糖蛋白基因和 5 3kDa分泌性抗原基因 ,这为两基因的表达及在医学、兽医学中应用研究奠定了基础。

旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因的克隆及序列分析

应用旋毛虫感染猪血清 ,对旋毛虫新生幼虫 c DNA文库进行了免疫筛选。对阳性克隆 p BK- CMV- WN10的序列分析结果表明 ,c DNA全长为 135 2 bp,含有 1个 12 18bp的完整的开放阅读框架 (ORF) ,编码的多肽由 4 0 6个氨基酸残基组成 ,其相对分子质量理论推导值为 4 5 90 0 ,等电点为 5 .4 3,N末端的信号肽及糖基化位点 (NCS)表明其可能为分泌性糖蛋白 ,氨基酸序列 19～ 15 6与 15 8～ 2 95为重复区域 ,相似性为 74 % ,C末端有 1个半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域 ,但旋毛虫 p4 6 0 0 0抗原与其他线虫的半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白结构有很大差异 ,可能已经失去半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白的功能。 PCR结果显示 ,从旋毛虫新生幼虫、肌幼虫、3日龄成虫和 5日龄成虫 c DNA中均扩增出此基因 。

Ki-67抗原在原发性胆囊癌中的表达及其意义

目的 探讨Ki 6 7抗原表达与原发性胆囊癌病理生物学行为的关系。方法 采用免疫组化S P法 ,检测胆囊良、恶性病变中Ki 6 7抗原的表达情况 ,以其表达阳性率评估胆囊癌组织的增生活性。结果 Ki 6 7抗原在胆囊癌组织中的表达量显著高于胆囊良性病变 (P <0 .0 1)。但Ki 6 7抗原的表达强度与胆囊癌组织学类型、Nevin分期及病理分级无明显相关性 (P >0 .0 5 ) ,与胆囊癌的突变型p5 3基因产物表达量呈明显正相关 (P <0 .0 5 )。 结论 Ki 6 7抗原作为 1个代表增殖活性的肿瘤标志 ,其过量表达是胆囊癌高度恶性的生物学行为的客观指标之一 ,对胆囊恶性肿瘤的病理诊断有较高的实用价值。p5 3基因可能通过基因突变增强胆囊癌细胞的增殖活性 ,从而使Ki 6 7抗原表达量明显增加。

249例外分泌源性胰腺癌临床病理和免疫组化研究

目的 探讨外分泌源性胰腺癌病理形态学特征及相关基因产物表达和意义。方法 对2 4 9例胰腺癌按 WHO标准进行病理组织学分类 ,同时对发病年龄、性别、肿瘤部位和侵袭转移等进行分析。应用 En Vision免疫组化技术 ,对 16 7例胰腺癌和 10 1例癌旁胰腺组织 p5 3、p14 ARF、p2 1WAF 1、ATM、MDM2 、p33ING1 基因表达蛋白进行了检测。结果 2 4 9例胰腺癌中 ,男∶女 =2 .0 4∶ 1,4 0岁以上占 94 % ,肿块 3cm以上占 6 5 .9% ,胰头部位占 71.1% ,导管腺癌占 81.1% ,发现 6例黏液性非囊性癌。伴有十二指肠浸润、局部淋巴结和 (或 )远处转移者占 32 .5 % ,伴有周围神经浸润者占 4 4 .97%。免疫组化显示癌组织 p5 3阳性率为 5 7.5 % ,p14 ARF阳性率 35 .3% ,p2 1WAF 1 阳性率 39.5 % ,ATM阳性率 6 7.7% ,MDM2 阳性率 6 4 .1% ,p33ING1阳性率 77.2 %。 6 1例有随访资料 ,患者平均存活 16个月。结论 胰腺癌侵袭转移发生率高 ,特别是周围神经浸润可能为预后差的重要原因之一。 6种肿瘤基因产物免疫组化检测结果显示 ,胰腺癌的发生发展过程涉及多种基因的异常 ,是一个复杂的分子事件。

旋毛虫新生幼虫WN1抗原基因的克隆及表达

应用旋毛虫人工感染猪血清对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选,对阳性克隆WN1序列进行生物信息学分析。结果表明,WN1cDNA全长为474bp,含有1个354bp的完整的开放阅读框架(ORF),编码的多肽由117个氨基酸残基组成,其相对分子质量理论推导值为13200,等电点为4.25,N-末端的信号肽表明其可能为分泌性蛋白。GenBank数据库检索结果显示,此序列为一个新基因的全长cDNA。经PCR扩增WN1基因,将其克隆到原核表达载体pET28a,重组质粒经鉴定后,转化大肠杆菌BL21star(DE3)并诱导表达出相对分子质量为15000的重组蛋白,与理论设计完全相符。

PCNA、p53及C-erbB-2在卵巢浆、液粘液性上皮瘤中的表达

目的 研究卵巢浆、粘液性上皮瘤PCNA、p5 3、C erbB 2基因产物的表达与细胞增殖关系。 方法 采用S -P免疫组化法对 110例卵巢浆、粘液性良恶性肿瘤进行PCNA、p5 3及C erbB 2的检测。 结果 在 30例卵巢囊腺瘤、38例交界性囊腺瘤及 42例腺癌中 ,PCNA的阳性表达分别为 16 .6 7%、0和 0 ;p5 3的阳性表达分别为 5 7.89%、39.47%和 15 .79% ;C erbB 2的阳性表达分别为90 .48%、73 .80 %和 42 .86 %。三组相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。p5 3及C erbB 2的表达在PCNA强阳性组大于PCNA的弱阳性组及阴性组 ,在浆液性肿瘤组大于粘液性肿瘤组。 结论 卵巢交界性肿瘤在不同程度上具有与腺癌相似的癌基因表达 ,浆液性腺癌的预后比粘液性腺癌差 。

p57^(kip2)在肝癌组织中的表达及其与临床病理因素、PCNA和p53的关系

目的 :检测细胞周期抑制因子 p5 7kip2 在肝癌中的表达水平 ,探讨它与临床病理因素、增殖细胞核抗原 (PCNA)、p5 3的关系 .方法 :用免疫组织化学法检测 32例肝癌组织和1 0例正常肝脏组织中 p5 7kip2 ,PCNA和 p5 3的表达水平 .结果 :p5 7kip2 在肝癌组织中的阳性率 5 6 .2 % ,显著低于正常肝脏组织 (1 0 0 % ) (P =0 .0 1 1 ) ,p5 7kip2 的缺失表达与肝癌细胞的分化较差 (P =0 .0 0 7)、临床分期较晚 (P =0 .0 4 1 )及预后较差有关 (P =0 .0 36 ) ,与年龄、AFP ,肿瘤大小及肿瘤侵犯转移无显著相关 (P >0 .0 5 ) ;PCNA在肝癌组织中阳性率为 5 6 .2 % ,与 p5 7kip2 的表达有关 (P =0 .0 36 ) ;p5 3在肝癌组织中的阳性率 4 6 .9% ,与p5 7kip2 表达在统计学上无相关性 (P >0 .0 5 ) .结论 :肝癌组织中存在 p5 7kip2 的表达缺失、PCNA的高表达 ,共同参与肝癌的发生、发展 ,而p5 7kip2 和p5

染发剂对皮肤的毒性实验

目的:研究染发剂对皮肤的毒性实验。方法:健康成年SD大白鼠经皮涂抹染发剂8个月(每周涂抹2次) ,解剖动物,取内脏组织作病理切片、免疫组化。结果:动物解剖,未发现癌肿。HE染色后病理切片观察肝、肾、淋巴结、心脏各组织,均未见异常。免疫组化检测发现:肝、淋巴结组织中P53、PCNA及BCL - 2均呈不同程度的阳性反应。

结核分枝杆菌H37Ra菌株ESAT6基因的克隆及序列分析

目的:从结核分枝杆菌H37Ra菌株克隆早期分泌性抗原靶6(ESAT6)基因并进行序列分析。方法:以结核分枝杆菌H37Ra菌株基因组DNA为模版,用PCR方法扩增ESAT6基因,将扩增产物连接到克隆载体pTG19-T中,并用PCR、单双酶切和测序进行鉴定,以BLAST软件进行序列比对分析。结果:从结核分枝杆菌H37Ra株成功克隆了ESAT6基因,测序表明该片段由288 bp组成,与GenBank所报告的H37Rv基因相比同源性为100%。结论:成功克隆了H37Ra株ESAT6编码基因,其序列与H37Rv标准株ESAT6编码基因完全一致。

中医药治疗反流性食管炎实验研究进展

回归总结近年来有关中医药治疗反流性食管炎的实验研究进展,包括常用观测指标,抑癌基因p53,增殖细胞核抗原,胃肠激素。并由此探讨了中医药治疗反流性食管炎的作用机理,指出了随着RE的基础研究的开展,相关实验研究应进一步深入。

辅助T细胞亚群细胞因子基因表达的调节

辅助Ｔ细胞亚群细胞因子基因表达的调节（文摘）［英／ＪａｍｅｓＡ．Ｌｅｄｅｒｅｒ．．．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．─１９９４；１５２－７７－８６］抗原特异性辅助性Ｔ细胞（ｈｅｌｐｅｒＴｃｅｌｌ，Ｔｈ）在活化时按分泌细胞因子（ｃｙｔｏ－ｋｉｎ，ＣＫ）的不同分为Ｔ...

腺样体免疫状况与分泌性中耳炎的相关性研究

目的:探讨腺样体免疫状况与分泌性中耳炎(SOM)的相关性。方法:采用VltrasentitiveTMSP免疫组织化学法检测反复发作的SOM伴腺样体增生者46例(反复发作组)及发作次数≤3次者30例(对照组)腺样体组织中CD45Ro、CD20、PCNA及BCL2的表达。结果:反复发作组腺样体组织中CD45Ro、CD20、PCNA及BCL2的表达明显高于对照组,其差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:反复发作的SOM患儿腺样体中淋巴细胞活性增高,处于增殖期细胞增多,致使腺样体增生、肥大,同时局部免疫增强,加重了SOM。因此,对于SOM患儿应及早行腺样体切除术。

粘附分子CD44v6表达和p53基因突变与卵巢癌转移关系的研究

目的 探索卵巢癌粘附分子CD44的变构体CD44v6表达和p5 3基因突变与卵巢癌转移之间的关系和作用机理。方法 选择正常卵巢 2 0例、良性卵巢肿瘤 2 0例、卵巢癌 45例 (其中 2 0例肿瘤无转移 ,2 5例肿瘤有转移 ) ,应用流式细胞仪测定卵巢癌细胞DNA含量及其在细胞周期各相中的分布 ;应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)及特异探针D3 对卵巢癌细胞进行DNA印渍杂交分析 ,并对杂交条带进行辉度扫描 ;应用银染聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术检测卵巢癌细胞p5 3基因突变 ,并与正常卵巢和良性卵巢肿瘤进行比较。结果 正常卵巢、良性卵巢肿瘤、卵巢癌无转移和有转移者CD44v6表达阳性率分别为 0 %、10 %、75 %、88% ;而p5 3基因突变率分别为 0 %、5 %、40 %、6 0 % ,两者都呈逐渐上升趋势。CD44v6辉度扫描 ,卵巢癌无转移者 (382 0± 2 89)与有转移者(10 132± 15 2 1)比较 ,差异有极显著性 (P <0 .0 1)。卵巢癌CD44v6表达阳性和阴性患者中 ,G2 M期细胞平均值分别为 5 .90 %和 5 .0 6 % (P >0 .0 5 ) ;异倍体细胞分别为 5 7%和 5 0 % (P >0 .0 5 )。而在p5 3基因有突变和无突变患者中 ,G2 M期细胞分别为 11.15 %和 5 .85 % (P <0 .0 5 ) ;异倍体细胞分别为 74%和 36 % (P <0 .0 5 )。

结核分枝杆菌Hsp65-Esat6与hGM-CSF联合DNA疫苗的构建与体外研究

目的:应用分子生物学技术,构建p IHsp65-Esat6GM共表达质粒,并在真核细胞中表达.方法:以p EGHsp65Esat-6为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,同时从质粒p ORF-h GM-CSF中扩增出基因佐剂h GM-CSF,分别克隆到真核表达载体p IRES的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建p IHsp65-Esat6GM共表达质粒,并转染Hep G-2细胞中表达和检测.结果:酶切鉴定提示插入的基因片段大小分别为1.93 kb和0.47kb,测序分析表明克隆的Hsp65-Esat6和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(h GM-CSF)序列与Gen Bank上公布序列完全一致;Western-bolt检测到Hsp65-Esat6融合蛋白相对分子质量(Mr)为75 000 k Da;RT-PCR方法检测出p IGM,p IHsp65GM和p IHsp65-Esat6GM转染组细胞均有h GM-CSF mRNA表达,三组细胞中h GM-CSF基因mRNA的表达量差异无统计学意义(P>0.05).ELISA方法检测到p IHsp65-Esat6GM转染组细胞培养上清中h GM-CSF的表达,且与空载体对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:成功构建和表达了p IHsp65-Esat6GM质粒,为研制优于卡介苗(BCG)的新型抗结核病的DNA疫苗奠定了基础.