一对检测肺炎衣原体的新引物

为建立一种更敏感的肺炎衣原体PCR检测方法 ,根据肺炎衣原体种特异性 5 3kDa蛋白基因序列设计一对引物5 3A、5 3B ,用PCR进行肺炎衣原体的检测研究。结果该引物仅能扩增肺炎衣原体DNA ,而与沙眼衣原体 ,鹦鹉热衣原体不反应 ,且对呼吸道常见病原菌之DNA的扩增亦为阴性 ,它能扩增出少至 10fg的肺炎衣原体DNA ,比我们以前合成的一对肺炎衣原体 16srRNA基因检测引物Cpnl、Cpn2更敏感 ,分别用这两对引物检测 30例有呼吸道疾患病人的鼻咽拭子标本 ,PCR的阳性符合率为 86 7%。表明 5 3A、5 3B是一对有效、实用。

重庆地区肺炎衣原体感染株的部分基因分析

目的 用两对引物对临床标本中肺炎衣原体进行检测 ,对阳性PCR产物部分序列进行测定和同源性分析 ,探讨肺炎衣原体的基因分型。方法 用根据肺炎衣原体 16srRNA及种特异性 5 3kDa蛋白抗原基因序列设计的两对引物Cpnl～Cpn2 ,5 3A～ 5 3B对 1994年 5月～ 1999年 3月间采集的有呼吸道疾患病人的鼻咽拭子标本 182份进行PCR检测 ,从阳性标本中随意挑取 13 6和 14 4号标本 ,纯化PCR产物 ,进行核苷酸测序 ,并将测序结果与已报道的肺炎衣原体分离株进行同源性比较分析。结果 标准AR - 3 9株及 2 1例标本均扩增得到约 4 60nts的 16srRNA基因片段 ,2 5例标本扩增得约 83 0nts的5 3kDa蛋白基因核酸片段。对 13 6、14 4号标本的PCR产物测序结果显示 ,2 4 4nts的 16srRNA基因序列完全相同 ,且与标准肺炎衣原体AR - 3 9、TW 183、IOL2 0 7及CWL0 2 9的对应序列 10 0 %同源 ,而与马肺炎衣原体分离株N16相比较有 3处突变 ,与非洲热带蟾蜍分离株CPXT1比较有 3处突变 ,与小鼠肺炎衣原体分离株J13 8相比有一处不同 ,表明人的肺炎衣原体株 16rRNA基因较为保守 ,与动物分离株有差异 ;标本 14 5nts的 5 3kDa蛋白基因也 10 0 %同源 ,该序列与从人体分离的AR - 3 9株以及从小鼠分离的J13 8株序列完全一致 ,表明肺炎衣原体 5