肺复方通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路对A549/DDP细胞耐药性的影响

目的观察肺复方对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的作用及对PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响。方法选用A549/DDP细胞设立不含药血清的空白对照组、肺复方组、顺铂组、联合组,流式细胞术检测各组细胞周期分布和细胞中活性氧(ROS)的变化,Western blotting和RT-PCR检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路及下游血红素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达变化。结果与空白对照组、顺铂组相比,联合组引起细胞G1期阻滞,增加细胞内活性氧的累积,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比,肺复方组和联合组能减少Nrf2核转位,下调p-Akt、HO-1、NQO1、MRP1蛋白表达和mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论肺复方能够通过调控PI3K/Akt/Nrf2信号通路增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549/DDP细胞Snail、E-cadherin表达的影响

目的观察补中益气汤含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导前后,A549/DDP细胞Snail、E-钙黏蛋白(cadherin)表达的影响,探讨补中益气汤对A549/DDP细胞上皮-间充质转化(EMT)的干预作用。方法A549/DDP细胞分为:空白组、TGF-β1组(TGF-β15 ng/L,48 h)、中药组(10%补中益气汤含药血清)、干扰组(Snail干扰)。采用siRNA技术,运用免疫细胞化学法、Western印迹法、实时荧光定量PCR法,检测补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞Snail、E-cadherin及mRNA水平的影响。结果与空白组比较,TGF-β1组E-cadherin及mRNA表达水平显著下调(P<0.05);与TGF-β1组比较,中药组及干扰组E-cadherin及mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。而Snail蛋白及mRNA水平的影响呈现相反的变化趋势。结论Snail作为转录因子,可抑制E-cadherin基因的表达,诱导EMT发生,而补中益气汤含药血清可通过干预Snail蛋白及基因的表达,解除其对E-cadherin的抑制作用,从而逆转A549/DDP细胞EMT。

白杨素通过下调Annexin A3逆转人肺腺癌A549/DDP细胞顺铂的耐药性

目的观察白杨素对肺腺癌顺铂(DDP)耐药性细胞A549/DDP耐药敏感性的影响。方法取A549和A549/DDP细胞,qRT-PCR及Western blot法检测膜联蛋白A3(Annexin A3)基因及蛋白表达,CCK-8法测不同浓度白杨素(0、5、25、50、100 mmoL/L)干预后细胞生存率;将A549/DDP细胞分为A549/DDP组、白杨素组(50 mol/L)、Annexin A3过表达组(Annexin A3mimic组)、Annexin A3阴性对照组(Annexin A3 NC)、白杨素+Annexin A3mimic组,另取A549细胞正常培养作为空白对照组;CCK-8法检测细胞对DDP的半数生存浓度(IC50)及耐药指数;qRT-PCR和Western blot法检测Annexin A3基因和蛋白表达水平,流式细胞义监测细胞凋亡率,小鼠荷瘤实验检测移植瘤体积。结果不同浓度的白杨素均能时效依赖性和剂量依赖性降低A549、A549/DDP细胞生存率(P<0.05),选取50 mol/L为实验浓度作用细胞48 h;与A549细胞比较,A549/DDP细胞Annexin A mRNA及蛋白表达、对DDP的IC50、耐药指数均升高,凋亡率降低(P<0.05);与A549/DDP组比较,白杨素组细胞IC50、耐药指数、Annexin A3 mRNA及蛋白表达降低,细胞凋亡率升高(P<0.05),Annexin A3 mimic组细胞IC50、耐药指数、Annexin A3 mRNA及蛋白表达升高,细胞凋亡率降低(P<0.05);Annexin A3基因高表达可减弱A549/DDP细胞对白杨素的敏感性,降低细胞凋亡率(P<0.05);小鼠荷瘤实验证实,与单独的DDP治疗组比较,白杨素与DDP联合治疗可显著降低小鼠A549/DDP移植瘤瘤体体积(P<0.05),Annexin A3基因高表达的小鼠逆转白杨素与DDP联合治疗效果(P<0.05)。结论白杨素可能通过下调Annexin A3表达,逆转A549/DDP细胞对DDP的耐药性。

淫羊藿苷通过IL-6/STAT3通路逆转肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药的作用机制研究

目的 探讨淫羊藿苷(ICA)对A549/DDP细胞顺铂耐药的逆转作用及对白细胞介素-6(IL-6)和信号传导子及转录激活子3(STAT3)信号通路的调节。方法 第4代对数生长期的A549/DDP细胞随机分为A549/DDP组和ICA组,MTT法检测不同浓度ICA对细胞增殖率的影响。采用不同浓度DDP及50、100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞,MTT法检测ICA对A549/DDP细胞化疗敏感性的影响。采用4μg/mL DDP和50、100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell试验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR检测细胞中肺耐药蛋白(LRP)和多药耐药蛋白(MRP) mRNA相对表达量,蛋白印迹法检测IL-6、STAT3、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量。结果 细胞增殖率随ICA浓度的增加而降低(P<0.05)。与单独使用不同浓度DDP处理A549/DDP细胞比较,50和100μmol/L ICA处理提高细胞对DDP的敏感性,降低DDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)(P<0.05)。50和100μmol/L ICA处理A549/DDP细胞,细胞侵袭能力减弱、LRP和MRP mRNA相对表达量以及IL-6、STAT3和Bcl-2蛋白相对表达量降低,细胞凋亡率和Bax蛋白相对表达量升高。结论 ICA可增强A549/DDP细胞对DDP的敏感性,逆转耐药性,其可能是通过抑制IL-6/STAT3信号通路发挥作用。

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549/DDP细胞的耐药逆转及其机制

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用及对多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响。方法MTT法测定白花蛇舌草乙醇提取物对A549/DDP细胞耐药的逆转作用;半定量RT-PCR和Western Blot分别检测肿瘤细胞MRP mRNA和蛋白的表达。结果白花蛇舌草乙醇提取物使A549/DDP细胞对DDP的耐药倍数由10.294下降至5.586;并显著降低A549/DDP MRP mRNA和蛋白的表达。结论白花蛇舌草乙醇提取物可以部分逆转肺腺癌A549/DDP细胞对DDP的耐药;其逆转作用可能通过降低细胞MRP的表达来实现。

人参单体Rh_2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的体外研究

背景与目的肺癌已成为人类癌症主要死亡原因之一。从植物中开发抗肿瘤药物是国内外抗肿瘤新药开发的一个热点。本研究的目的是观察人参单体Rh2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞系凋亡的作用,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养的人肺腺癌A549/DDP细胞经不同浓度梯度的人参单体Rh2干预,分别应用MTT实验观察其对细胞增殖的影响,用流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数及相关基因表达的改变,以及用双抗体夹心ELISA法测定细胞上清液sApo-1/Fas浓度变化。结果①人参单体Rh2可抑制A549/DDP细胞的生长,并呈剂量、时间依赖作用。②人参单体Rh2处理A549/DDP细胞24h,实验组凋亡指数显著高于对照组(P<0.001),G0/G1期细胞比例显著高于对照组(P<0.01),S期细胞比例显著低于对照组(P<0.01),G2/M期细胞比例与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。③实验组p53、Fas阳性表达率显著高于对照组(P<0.01,P<0.001),Bcl-2阳性表达率显著低于对照组(P<0.001)。④实验组A549/DDP细胞培养上清液于不同时间sApo-1/Fas含量均显著低于对照组(P<0.05)。结论人参单体Rh2具有诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的作用,其分子机制可能是上调p53和Fas及下调Bcl-2的表达、通过Fas/FasL系统途径诱导细胞凋亡。

橙皮苷诱导人非小细胞肺癌A549/DDP细胞凋亡的实验研究

目的观察橙皮苷对人非小细胞肺癌A549/DDP细胞凋亡的影响。方法培养耐顺铂的人非小细胞肺癌A549/DDP细胞,分别用6,12,24,48和96 mg/L橙皮苷作用A549/DDP细胞24 h,在荧光显微镜下观察细胞形态变化,采用流式细胞计量仪检测细胞凋亡情况。结果经不同浓度的橙皮苷作用A549/DDP细胞24h后,镜下见A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染,荧光成团块分布;流式细胞计量仪检测结果显示,6mg/L橙皮苷即可促使A549/DDP细胞出现早期凋亡,且凋亡率随橙皮苷剂量增大而逐渐增加,呈现出明显的剂量依赖关系(P<0.05)。结论橙皮苷可以诱导A549/DDP细胞凋亡。

基因工程腺病毒H101逆转A549/DDP细胞对顺铂耐药性的实验研究

背景及目的:耐药性产生是化疗失败的主要原因之一,克服耐药性的方法之一是使用逆转剂。目前尚无一种理想的、可应用于临床的顺铂(DDP)耐药逆转剂。本研究探讨基因工程腺病毒H101对DDP耐药性的逆转作用及其机制。方法:体外利用人肺腺癌细胞株A549的DDP耐药模型A549/DDP,采用MTT法检测H101对A549/DDP细胞耐药性的逆转作用。用流式细胞仪(FCM)测定细胞多药耐药蛋白1(multidrugresistantprotein1,MRP1)、谷胱甘肽鄄S鄄转移酶(GST)及TOPO鄄Ⅱ蛋白表达量,荧光鄄考马斯亮蓝法检测细胞内GSH含量,原子吸收法测定细胞内铂浓度。结果:A549/DDP细胞对DDP的耐药指数为14.3。加入H101后,DDP对A549/DDP的半数抑制浓度(IC50)由352.4μmol/L降至61.6μmol/L,逆转倍数为5.7倍。FCM检测结果显示,A549/DDP细胞的GST和TOPO鄄Ⅱ蛋白水平均较A549细胞高,而两种细胞内均未检测到MRP1的表达,经H101处理后的A549/DDP细胞胞内GST蛋白和TOPO鄄Ⅱ蛋白水平均明显下降。A549/DDP胞内GSH含量比A549高2倍多;H101感染A549/DDP细胞后,胞内的GSH含量下降,随着H101剂量的增加,胞内GSH含量逐渐下降,达A549细胞内GSH水平。原子吸收法测定细胞内铂含量的结果显示,A549细胞内铂含量是A549/DDP细胞内铂含量的3倍,加入H101后,A549细胞内铂的含量无明显变化,但A549/DDP细胞内铂的含量明显增加。结论:H101能逆转A549/DDP对DDP的耐药性,H101逆转DDP耐药性的机制可能是减少A549/DDP细胞内GSH和TOPOⅡ蛋白的水平,增加了A549/DDP细胞内铂的蓄积。

姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响

目的:探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法:采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线,MTT法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h后,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率.以20μmol/L的姜黄素作用细胞24h后,流式细胞仪分析细胞周期.结果:亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.24±0.24)h和(32.88±0.11)h(P>0.05);顺铂处理A549和A549/DDP细胞72h后,半数抑制浓度(IC50)分别为13.57μmol/L和146.79μmol/L,A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数为10.82.姜黄素对A549/DDP细胞增殖有抑制作用,并且呈时间浓度依赖性(P<0.05).姜黄素作用后,Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染荧光成团块分布.流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P<0.05).20μmol/L的姜黄素作用细胞24h,引发G2期阻滞.结论:姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖.其作用可能是通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的.

补中益气汤与siRNA对肺腺癌A549/DDP细胞耐药逆转作用的比较

目的比较补中益气汤含药血清与siRNA技术(RNA)对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP的耐药效果及对多药耐药蛋白P-gp表达的影响。方法制备补中益气汤含药血清,设计并合成针对P-gp基因对应序列的siRNA,转染A549/DDP细胞;实验分组为空白对照组、补中益气汤含药血清处理组、siRNA处理组,利用RT-PCR检测P-gp mRNA,Western印迹及免疫细胞化学法检测P-gp蛋白质的表达;MTT法检测A549/DDP细胞耐药逆转效果。结果补中益气汤含药血清和siRNA均能降低P-gp mRNA和蛋白质表达,恢复顺铂敏感性,耐药倍数分别降至2.01、2.73,具有统计学意义(P<0.05)。结论补中益气汤含药血清和siRNA均能有效逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的多药耐药。

补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞生长周期作用的影响

目的评估补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞生长周期的影响效果。方法体外培养人肺腺癌A549/DDP细胞,实验分组为:空白对照组,补中益气汤组和脾细胞处理组。用不同浓度的补中益气汤含药血清和脾细胞刺激A549/DDP细胞,采用MTT法(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)测定2种方法对细胞的直接杀伤作用;流式细胞术检测2种方法对细胞凋亡的影响;荧光显微镜观察2种方法对凋亡小体产生的影响。结果MTT法显示同空白对照组相比,补中益气汤含药血清对细胞生长均有抑制作用(P<0.05),且该法同脾细胞作用后效果类似;2种方法处理后,流式细胞术均可见特征性的细胞凋亡峰;在荧光显微镜下可见凋亡细胞。结论补中益气汤含药血清在体外能阻滞A549/DDP细胞的生长增殖,诱导该细胞发生凋亡,且效果同脾细胞类似。

槐耳清膏对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的影响及顺铂耐药逆转作用

目的:探讨槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞和A549/DDP细胞增殖的抑制影响及其顺铂耐药细胞A549/DDP的逆转作用。方法:以体外培养的人肺腺癌A549及A549/DDP细胞为实验模型,采用MTT法测定不同浓度槐耳清膏对A549细胞及A549/DDP细胞的增殖抑制率,并运用流式细胞术检测顺铂联合槐耳清膏对A549/DDP细胞的变化,以及增敏作用效应。结果:槐耳清膏对A549细胞及A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,随着药物浓度的增加,其抑制率逐渐增加,具有明显的量-效关系(P<0.05)。顺铂40μmol/L作用于A549及A549/DDP细胞48 h后,其凋亡率分别为(27.61±3.45)%和(17.93±1.73)%,两组间有统计学差异(P<0.01)。槐耳清膏1 mg/m L作用于人肺腺癌A549和A549/DDP细胞40 h后,再以相同浓度顺铂诱导,A549细胞凋亡率为(32.35±2.68)%,A549/DDP细胞凋亡率为(30.01±3.65)%,两组间无统计学意义,但与单独DDP作用相比,差异具有显著意义(P<0.01)。结论:槐耳清膏能显著抑制人肺腺癌A549及A549/DDP细胞的增殖,诱导细胞凋亡,还可以增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞药物泵P-gp及LRP蛋白表达的影响

目的:用补中益气汤含药血清处理A549/DDP细胞,观测药物泵P-gp及LRP的表达,并同小干扰RNA片段(siRNA)靶向切除P-gp、LRP基因后对这两种蛋白表达的影响相比较.方法:补中益气汤含药血清处理A549/DDP细胞,设计并合成针对P-gp、LRP基因对应序列的siRNA,采用转染试剂对细胞进行转染.两种蛋白实验分组均为:空白对照组、含药血清处理组及siRNA处理组.采用RT-PCR检测P-gp及LRP mRNA,免疫细胞化学法检测蛋白表达及定位,WB检测蛋白表达.结果:补中益气汤含药血清可以降低两种药物泵的表达,效果同siRNA类似,具有统计学差异(P<0.05).结论:补中益气汤含药血清能降低A549/DDP细胞上P-gp和LRP的表达.

补中益气汤含药血清联合siRNA对肺腺癌A549/DDP细胞的LRP表达影响

目的:运用小干扰RNA片段(small interfering RNA,siRNA)的方法特异性沉默肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)基因,观测该方法同补中益气汤含药血清联合应用逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的效果。方法:设计并合成针对LRP基因对应序列的siRNA,采用转染试剂对细胞进行转染。实验分组为:空白对照组、补中益气汤含药血清组、siRNA组及补中益气汤含药血清+siRNA组,利用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测对该基因的抑制作用,Western blot及免疫细胞化学法检测蛋白质表达。结果:参照空白对照组,补中益气汤含药血清组、siRNA组及补中益气汤含药血清+siRNA组mRNA及LRP蛋白表达均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补中益气汤含药血清和siRNA均能降低A549/DDP的LRP蛋白表达,并且2种因素之间存在交互作用。

芦丁对人肺癌A549/DDP细胞耐药性的逆转作用及其机制

目的:本研究旨在观察芦丁(RT)对人肺癌A549/DDP细胞顺铂(DDP)耐药性的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:体外常规培养A549细胞和A549/DDP细胞,给予不同剂量RT和/或DDP处理48 h后,采用CCK-8法、Chou-Talalay中效分析法、流式细胞术、免疫印迹法和实时定量PCR反应分别检测了细胞活力、药物联合效应、细胞凋亡、IKKα和p65蛋白磷酸化水平以及MRP1和GST-π蛋白和mRNA表达水平。结果:DDP可剂量依赖性地抑制A549细胞和A549/DDP细胞活力(P<0.05),A549/DDP细胞耐药倍数为7.49;RT可协同增强DDP对A549/DDP细胞的抑制作用,逆转倍数为2.33;与对照组相比,DDP组A549/DDP细胞凋亡率显著升高(P<0.05),而低毒剂量的RT可协同增强DDP引起的A549/DDP细胞凋亡(P<0.05);同时,RT和IKK16均可抑制A549/DDP细胞中IKKα和p65蛋白磷酸化(P<0.05),下调MRP1和GST-π的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),且两者联用时抑制作用增强(P<0.05)。结论:RT可通过抑制IKKα/p65通路,进而下调MRP1和GST-π表达,以逆转A549/DDP细胞顺铂耐药性。

MicroRNA-98对A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨MicroRNA-98(miR-98)对肺腺癌耐顺铂细胞系A549/DDP顺铂耐药性的影响。方法利用MicroRNA(miRNA)芯片及生物信息学筛选出miR-98。将miR-98质粒载体瞬时转染至A549/DDP细胞;MTT检测细胞药物敏感性的改变。结果在A549/DDP细胞中miR-98表达水平下调。转染miR-98的A549/DDP细胞生长抑制率明显增高。结论miR-98能够增加肺腺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂的药物敏感性。

沉默三联基序蛋白25基因对A549/DDP细胞株顺铂耐药性及凋亡的影响

目的:三联基序蛋白25(tripartite motif containing 25,TRIM25)为泛素化E3连接酶,通过抑制TRIM25表达,研究其对肺癌顺铂(cis-dichlorodiamine platinum,DDP)耐药细胞株A549/DDP耐药性及凋亡的影响。方法:针对TRIM25基因设计4条不同序列sh RNA,分别构建重组质粒载体pt1、pt2、pt3、pt4。利用脂质体将质粒转染至A549/DDP细胞,采用real-time PCR、Western blot检测抑制效果,MTT实验和流式细胞仪(flow cytometry,FCM)实验分别检测在DDP作用下细胞耐药性改变和凋亡情况。结果:干扰质粒pt1在m RNA和蛋白质水平上均能特异性地抑制TRIM25的表达;MTT法结果显示,抑制TRIM25表达后,干扰组pt1细胞IC50值低于p NC组(P=0.001)及对照组(P=0.000);FCM结果显示,干扰组pt1的细胞凋亡率明显低于p NC组(P=0.005)、对照组(P=0.004)。结论:抑制TRIM25表达后,能有效地降低A549/DDP细胞株的DDP耐药性并促进其凋亡。

siMDR1重组慢病毒载体的构建及其对A549和A549/DDP细胞的影响

背景与目的:肿瘤细胞的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)是导致化疗失败的最主要原因,也是癌症术后复发及转移的主要原因。本研究旨在探讨MDR1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)重组慢病毒对人肺腺癌A549细胞和对顺铂耐药的A549/DDP细胞的MDR1基因的抑制作用。方法:设计获得针对MDR1的短发卡状RNA(small hair pin RNA,shRNA)的寡核苷酸序列,退火后插入线性化的pSUPER载体(H1启动子下游)。把构建获得的载体转染A549细胞,RT-PCR法检测其对MDR1的干扰作用,筛选确定MDR1基因RNAi有效靶序列;合成靶序列的OligoDNA,与含启动子和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的PTM载体连接产生PTM-siMDR1慢病毒载体;用重组慢病毒体外感染A549和A549/DDP细胞。结果:成功构建可以表达针对MDR1的发卡状RNAi,能有效的下调MDR1的表达。成功构建获得针对MDR1基因的慢病毒载体PTM-siMDR1,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为0.5×109TU/mL。感染PTM-siMDR1的A549/DDP细胞对顺铂的敏感性明显提高,逆转倍数达3.81倍。结论:siMDR1重组慢病毒载体感染A549/DDP细胞,能明显改善其对顺铂的耐药性。

槲皮素联合顺铂调控PI3K/Akt信号通路对肺癌A549/DDP细胞增殖与凋亡的影响

目的研究槲皮素联合顺铂对肺癌A549/DDP细胞增殖与凋亡的影响,并探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路的作用机制。方法将对数生长期人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP分为槲皮素+顺铂组(给予160μmol/L浓度的槲皮素和25μmol/L浓度的顺铂)、顺铂组(给予25μmol/L浓度的顺铂)、槲皮素组(给予160μmol/L浓度的槲皮素)和对照组(不经药物干预)。CCK-8法观察细胞增殖抑制率;流式细胞术计算细胞凋亡率;Western blot检测p-PI3K、p-Akt蛋白水平的表达。结果各组A549/DDP细胞增殖抑制率和细胞凋亡率比较,差异均有统计学意义(F分别=12.26、163.10,P均<0.05)。槲皮素组的细胞增殖抑制率和细胞凋亡率高于对照组,差异均有统计学意义(t分别=20.58、8.54,P均<0.05);顺铂组的细胞增殖抑制率和细胞凋亡率高于槲皮素组,差异均有统计学意义(t分别=2.17、6.32,P均<0.05);槲皮素+顺铂组的细胞增殖抑制率和细胞凋亡率高于顺铂组,差异均有统计学意义(t分别=2.54、5.78,P均<0.05)。各组A549/DDP细胞p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(F分别=47.88、41.30,P均<0.05)。槲皮素组的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达水平较对照组明显降低,差异均有统计学意义(t分别=4.76、4.09,P均<0.05);顺铂组的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达水平较槲皮素组明显降低,差异均有统计学意义(t分别=2.38、4.34,P均<0.05);槲皮素+顺铂组的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达水平低于顺铂组,差异均有统计学意义(t分别=7.05、10.28,P均<0.05)。结论槲皮素与顺铂联用能够抑制A549/DDP细胞增殖,诱导A549/DDP细胞凋亡,其机制与PI3K/Akt信号通路有关。

黄芪多糖对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的影响及其机制

目的:探讨黄芪多糖(APS)对人肺癌顺铂(DDP)耐药A549/DDP细胞耐药性的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:将对数生长期A549/DDP细胞分为对照组(不经药物干预)、APS组(给予25、50、100、200和400 mg·L^-1 APS)、DDP组(给予2、4、8、16和32 mg·L^-1 DDP)及APS+DDP组(给予100 mg·L^-1 APS和2、4、8、16和32 mg·L^-1 DDP),药物处理A549/DDP细胞24 h,采用CCK-8法检测各组A549/DDP细胞增殖抑制率,并计算半数抑制浓度(IC50)。将A549/DDP细胞分为对照组(不经药物干预)、APS组(给予100 mg·L^-1 APS)、DDP组(给予11.46 mg·L^-1 DDP)及APS+DDP组(给予100 mg·L^-1 APS和11.46 mg·L^-1 DDP),药物处理细胞24 h,采用Transwell小室法检测各组A549/DDP细胞迁移情况,流式细胞术检测各组A549/DDP细胞凋亡率和线粒体膜电位,Western blotting法检测各组A549/DDP细胞中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、P糖蛋白(P-gp)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达水平。结果:CCK-8法检测,与DDP组比较,APS+DDP组的A549/DDP细胞IC50降低。Transwell小室法检测,与对照组比较,APS组A549/DDP细胞迁移能力无明显变化;与DDP组比较,APS+DDP组A549/DDP细胞迁移数降低。流式细胞术检测,与对照组比较,APS组A549/DDP细胞凋亡率和线粒体膜电位差异无统计学意义(P>0.05),DDP组A549/DDP细胞凋亡率升高,线粒体膜电位降低(P<0.05);与DDP组比较,APS+DDP组A549/DDP细胞凋亡率升高,线粒体膜电位降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,APS组A549/DDP细胞中Bcl-2和P-gp蛋白表达水平降低(P<0.05),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值降低(P<0.05),Bax蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与APS组比较,DDP组A549/DDP细胞中Bcl-2和P-gp蛋白表达水平降低(P<0.05),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值降低P<0.05),Bax蛋白表达水平升高(P<0.05);与DDP组比较,APS+DDP组A549/DDP细胞中Bcl-2和P-gp蛋白表达水平降低(P<0.05),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值降低(P<0.05),Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:APS能逆转A549/DDP细胞耐药性,其机制可能与其阻断PI3K/AKT信号通路和诱导线粒体损伤有关联。