E1B-55KD基因缺陷腺病毒配合热疗治疗转移性肿瘤

[目的 ]研究E1B - 5 5KD基因缺陷腺病毒联合微波热疗是否可以产生协同作用杀伤转移性肿瘤 ,并探讨其可能的作用机制。 [方法 ]将 4 0只近交系 6 15小鼠随机分为腺病毒治疗组 (A) ,热疗组 (B) ,腺病毒 +热疗组 (C) ,对照组 (D) ,每组 10只。建立荷肝癌细胞模型 ,双侧腋下接种肝癌细胞 ,对右侧瘤灶进行药物注射及 /或微波热疗 ,观察左侧瘤灶的变化。 [结果 ]B、C组热休克蛋白产生量明显增多 ;A、B、C组瘤体积较D组均有减小 ,C组与D组间比较具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;A、B、C组瘤重较D组均减小 ,具有显著性差异 (P <0 .0 1) ;右侧腋窝淋巴结转移数测定 :A、B、C组与D组比较 ,转移淋巴结数均少 ,具有统计学意义 ,以C组最为显著 (P <0 .0 1) ;细胞毒性T淋巴细胞计数 (CD8+)在C组有显著增加。 [结论 ]E1B - 5 5KD基因缺陷腺病毒基因治疗辅以微波热疗对转移性肿瘤具有协同抗肿瘤作用 ;该种腺病毒基因治疗联合微波热疗 ,通过激活机体抗肿瘤免疫来杀伤远处转移肿瘤细胞。

E1B-55KD基因缺陷腺病毒联合热疗对肿瘤的治疗作用

目的:通过基因治疗与温热治疗方法相结合,观测两者治疗手段是否有协同作用。方法:将40只荷瘤小鼠随机分为4组,A组:E1B-55KD基因缺陷腺病毒感染组;B组:温热治疗组;C组:E1B-55KD基因缺陷腺病毒感染+温热治疗组;D组:空白对照组。治疗前后测量瘤体直径,实验前后取瘤体称重;Western蛋白分析对HSP进行定位、定量检测;流式细胞仪进行T细胞亚群检测,计算CD3+、CD4+、CD8+细胞含量,CD4+/CD8+值。结果:(1)A、B、C组肿瘤体积较D组均有减少,提示与对照组相比,各治疗组均有不同程度的肿瘤抑制作用,而C组小鼠肿瘤生长受抑最为明显。(2)A、B、C组瘤重分别与D组比较,结果均有减少,其中C组减少最为明显。(3)B、C两组小鼠肿瘤组织经加热后,细胞浆内的热休克蛋白较未加热的A、D两组明显增加。(4)A、B、C组与D组相比较CD8(CTL)均有提高,而以C组t最为显著,提示联合治疗组对CTL增殖的刺激作用更加显著。结论:E1B-55KD基因缺陷腺病毒联合热疗对肿瘤的治疗有协同作用。

癌特异性双靶向载体的安全性及其携带基因的杀伤性

背景与目的:我们创导的“癌症的靶向双基因-病毒治疗”策略可消灭移植性肿瘤,目前最重要的是要提高其安全性,使其只靶向肿瘤细胞,而在正常细胞内不复制或者很少复制。本研究旨在构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,并研究其安全性;在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,研究其杀伤性。方法:用hTERT启动子控制腺病毒复制必需的E1A基因,并将E1B55KD基因删除,构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,使其只靶向p53功能缺乏的肿瘤。在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,通过分子克隆构建质粒pTD55和pTD55-TRAIL,并与包装腺病毒的大质粒pBHGE3在293细胞中同源重组,得到腺病毒TD55和TD55-TRAIL。构建好的病毒体外感染人胚肺细胞MRC5、WI38,人结肠癌细胞SW620、HCT116、人肺癌细胞A549,分别用结晶紫染色法和MTT法检测其对细胞生长的影响。用流式细胞仪测定肿瘤细胞的凋亡率。结果:结晶紫染色结果和MTT结果表明,双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞MRC5和WI38的杀伤作用比ZD55-TRAIL小很多。病毒复制能力分析表明,单靶向腺病毒在正常细胞中的复制倍数是双靶向腺病毒的3～5倍。TD55和TD55-TRAIL均能引起SW620细胞的凋亡,后者是前者的3.3倍。结论:双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞的安全性比以往所构建的单靶向腺病毒ZD55-TRAIL更好,说明双靶向载体TD55比单靶向载体ZD55靶向性更高,如做为治疗药物可增加安全性,在治疗中可大大增加药物的安全性。携带的TRAIL基因能引起肿瘤细胞的凋亡,杀伤力较TD55增加数倍。