不同浓度丹皮酚影响膀胱癌5637细胞增殖、迁移能力和侵袭能力的实验研究

目的:观察不同浓度丹皮酚对膀胱癌5637细胞增殖、迁移能力和侵袭能力的影响及对环氧化酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)的调控作用。方法:通过观察不同浓度丹皮酚作用于膀胱癌5637细胞24 h、48 h、72 h后的细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC50),探讨不同浓度丹皮酚对膀胱癌5637细胞增殖的影响。采用细胞划痕实验、Transwell侵袭实验观察不同浓度丹皮酚对膀胱癌5637细胞迁移能力和侵袭能力的影响。通过酶联免疫吸附试验法测定不同浓度丹皮酚的含药培养基处理膀胱癌5637细胞24 h后对环氧化酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)含量及COX-2活性的影响。结果:膀胱癌5637细胞的存活率随丹皮酚浓度的增加而逐渐下降。在72 h、200μg/mL条件下,丹皮酚对细胞增殖的抑制作用最为明显。处理24 h、48 h、72 h,25μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的膀胱癌5637细胞存活率均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理24h,50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于6.25μg/mL组、12.5μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于25μg/mL组、50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的细胞存活率低于100μg/mL组(P<0.05)。处理48 h、72 h,50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于6.25μg/mL组、12.5μg/mL组、25μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的细胞存活率均低于50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的细胞存活率低于100μg/mL组(P<0.05)。丹皮酚作用膀胱癌5637细胞24 h、48 h、72 h时的IC50分别为88.27、74.24、77.07μg/mL。细胞划痕实验表明,不同浓度的丹皮酚(25、50、100、200μg/mL)处理膀胱癌5637细胞24 h后,细胞的迁移能力均受到抑制,且呈浓度依赖性,各用药组的划痕愈合率均低于对照组(P<0.05);50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的划痕愈合率均低于25μg/mL组,200μg/mL组的划痕愈合率低于50μg/mL组、100μg/mL组(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,不同浓度丹皮酚(25、50、100、200μg/mL)处理膀胱癌5637细胞24 h后,细胞的侵袭能力均受到抑制。随着浓度增加,细胞穿过微孔滤膜的数量递减。25μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的穿膜细胞数均低于对照组(P<0.05)。50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的穿膜细胞数均低于25μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的穿膜细胞数均低于50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的穿膜细胞数均低于100μg/mL组(P<0.05)。膀胱癌5637细胞上清液中的COX-2、PGE2含量及COX-2的活性均随丹皮酚的浓度升高而降低,25μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组、200μg/mL组的COX-2、PGE2含量及COX-2活性均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。50μg/mL组的PGE2含量低于25μg/mL组(P<0.05),100μg/mL组、200μg/mL组的COX-2、PGE2含量及COX-2活性均低于25μg/mL组(P<0.05);100μg/mL组的PGE2含量低于50μg/mL组(P<0.05),200μg/mL组的COX-2、PGE2含量及COX-2活性均低于50μg/mL组、100μg/mL组(P<0.05)。结论:丹皮酚可抑制膀胱癌5637细胞增殖、迁移能力和侵袭能力的作用机制可能与降低COX-2、PGE2含量及COX-2活性有关。

CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系增殖和凋亡的影响

目的 探究细胞周期依赖性激酶7(cyclin-dependent kinase 7,CDK7)抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系增殖和凋亡的影响。方法 采用CCK8实验检测细胞的药物毒性情况,筛选有效药物浓度。采用平板克隆实验评估其在体外的抗肿瘤活性,研究其在一定剂量浓度内对肿瘤细胞的增殖能力的抑制作用。采用划痕实验测定药物对肿瘤细胞迁移能力的影响。采用Western blot实验检测凋亡蛋白的表达水平。结果 CCK8结果显示CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系增殖能力具有抑制作用(P<0.05)。平板克隆实验显示CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系的增殖能力有抑制作用(P均<0.05)。划痕实验显示CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系的迁移能力有抑制作用(P均<0.05)。Western blot实验显示CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系的蛋白表达水平有抑制作用(P均<0.05)。结论 CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌5637细胞系增殖有抑制作用、促进凋亡作用,该项研究结果提示CDK7抑制剂THZ1对膀胱癌有治疗效果。

桔梗皂苷D对人移行细胞癌5637细胞诱导凋亡作用分析及机制研究

研究桔梗皂苷D对人移行细胞癌5637细胞诱导凋亡作用分析及机制。方法 通过HE染色结合电子显微镜观察的方法,判断细胞形态学状况;通过流式细胞学检测的方式,观察细胞凋亡情况;通过Western blot检测的方式,观察与细胞凋亡通路有关的蛋白表达;通过PCR检测法的方式,观察p53、Bcl-2、Bax mRNA表达水平;通过免疫组织检测法的方式,观察与细胞凋亡有关的蛋白。结果 相对于对照组,实验组细胞凋亡指数更高一些,实验组Survivin、Livin表达水平更低一些,实验组Caspas-9、Caspas-8、Caspas-3及Cyt-c表达水平更高一些。结论 对人移行细胞癌患者治疗时,摄入一定的桔梗皂苷D后,可通过对提升Caspas-9、Caspas-8、Caspas-3、Cyt-c及p53表达水平,降低Bcl-2表达水平,促进线粒体途径等方式,使移行细胞癌5637细胞凋亡,以此达到治疗的目的。

雷帕霉素对膀胱癌5637细胞增殖及细胞周期的影响

目的探讨雷帕霉素对膀胱癌5637细胞增殖能力和细胞周期的影响。方法 5637细胞贴壁培养于含10%胎牛血清、100 U/m L青霉素、100μg/m L链霉素的RPMI 1640培养液中,37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养。处理组加入50、100、200和400 nmol/L的雷帕霉素,对照组不加药物,每天更换RPMI 1640培养液。MTT法检测处理组的生长抑制率,流式细胞术检测不同浓度的雷帕霉素对5637细胞增殖周期的影响。结果与对照组相比,雷帕霉素对5637细胞有明显抑制作用,呈浓度依赖性和时间依赖性。雷帕霉素可以将5637细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制细胞的增殖,且未见明显的凋亡情况。结论雷帕霉素使5637细胞阻滞在G0/G1期,抑制了膀胱癌5637细胞的增殖,说明雷帕霉素的作用靶点参与了5637的增殖过程,其有望成为膀胱癌治疗的新靶点。

lncRNA HULC在膀胱癌组织中的表达及其对5637细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HULC在膀胱癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系,以及沉默HULC对膀胱癌5637细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。方法:选取2014年6月至2017年12月郑州人民医院手术切除的102例膀胱癌患者的癌及癌旁组织标本,以及人膀胱癌细胞株5637和人正常膀胱上皮细胞株SV-HUC-1,用qPCR法检测膀胱癌组织及细胞中HULC的表达,并分析HULC表达与膀胱癌患者临床病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线评估HULC对预后的影响。利用siRNA干扰技术将si-HULC、si-NC质粒转染进5637细胞中,分别采用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验及Transwell小室法检测沉默HULC对5637细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果:膀胱癌组织中HULC的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),HULC表达水平与患者肿瘤分级、肿瘤分期及淋巴结转移相关联(均P<0.05),HULC高表达患者的OS与PFS明显低于低表达者(均P<0.05)。5637细胞中HULC的表达水平明显高于SV-HUC-1细胞(P<0.01),沉默HULC后的5637细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(均P<0.01)、细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:lncRNA HULC在膀胱癌组织及5637细胞中均高表达,沉默HULC表达可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进凋亡。

苹果酸舒尼替尼对体外膀胱癌5637细胞系增殖的影响

苹果酸舒尼替尼是靶向受体酪氨酸激酶（recep-tortyrosinekinases，RTKs）的小分子抗肿瘤药物，已被EAU肾癌临床治疗指南和NCCN肾细胞癌指南推荐为晚期转移性肾细胞癌的一线药物，可通过抑制多个RTKs磷酸化和激活阻断信号传导，抑制肿瘤细胞增殖和新生血管形成。苹果酸舒尼替尼的作用靶点较广泛，

熊果酸对膀胱癌5637细胞的作用研究

目的观察熊果酸对高危浅表性膀胱癌5637细胞株的体外作用,为熊果酸用于膀胱癌治疗提供依据。方法体外常规培养5637细胞,取对数生长期细胞随机分为两组。实验组加入质量浓度为10、50、100、200 ug/mL的熊果酸分别处理24h、48h;对照组不加熊果酸。采用MTT法检测各组细胞生长抑制率;流式细胞仪检测凋亡率;western-bolt法检测survivin因子蛋白表达。结果熊果酸对5637细胞有明显的抑制增殖的作用,并对其有诱导凋亡的作用。结论 10～200 ug/mL熊果酸可有效抑制5637细胞增殖(P<0.05),抑制作用呈时间-剂量依赖性。作用48h时200 ug/mL的抑制率为47.38±4.69%,凋亡率为45.20±1.32%,与对照组比较,P均<0.01;survivin因子蛋白表达随药物浓度增高而下降。

MTT比色法检测苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖、MALAT1、HOTAIR及UCA1的影响

目的探讨噻唑蓝(MTT)比色法检测苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖、肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)、长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)基因及尿路上皮癌相关1(UCA1)的影响。方法按MTT法的相关操作原则与相关流程提取膀胱癌患者的苦瓜MAP30蛋白后进行克隆、表达及纯化处理,接着提取其处理膀胱癌5637细胞并进行MTT检测。探析苦瓜MAP30蛋白对5637细胞增殖和对MALAT1、HOTAIR及UCA1表达的相关性。结果抑制率:膀胱癌5637细胞增殖时所产生的抑制率越高时,MAP30蛋白浓度也越高,且时间越长,即MAP30蛋白浓度与膀胱癌5637细胞增殖呈正比(P<0.05)。凋亡率:膀胱癌5637细胞凋亡随MAP30浓度递增而逐渐上升,且MAP30浓度(培养48 h)为400μg/mL时,膀胱癌5637细胞凋亡率达到最高,MAP30浓度与膀胱癌5637细胞凋亡呈正比(P<0.05)。膀胱癌5637细胞lncRNA MALAT-1、HOTAIR、UCA1表达水平随苦瓜MAP30蛋白浓度的递增而逐渐降低,检测时间为48 h且苦瓜MAP30蛋白浓度为400μg/mL时上述三项指标的表达水平均显著低于48、24 h的其他苦瓜MAP30蛋白浓度(P<0.05)。结论苦瓜MAP30蛋白对膀胱癌5637细胞增殖的抑制和凋亡诱导方面有较好的效果,且可下调MALAT-1、HOTAIR、UCA1表达水平。

盐霉素对人膀胱癌5637细胞的生长抑制作用

目的:探讨盐霉素对人膀胱癌5637细胞生长、凋亡和侵袭力的影响,阐明其可能的作用机制。方法:取体外培养的对数生长期人膀胱癌5637细胞,分为空白对照组和不同剂量(15、30和60μmol·L-1)盐霉素组。MTT比色法检测各组人膀胱癌5637细胞的生长抑制率,流式细胞术检测各组人膀胱癌5637细胞的细胞凋亡率,Matrigel侵袭实验检测各组人膀胱癌5637细胞的侵袭能力,Western蛋白印迹实验检测各组人膀胱癌5637细胞中Wnt/β-catenin途径β-catenin蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,各剂量盐霉素组膀胱癌5637细胞的生长抑制率明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞穿膜数目减少(P<0.05),β-catenin蛋白表达水平减少(P<0.05)。与低剂量(15μmol·L-1)盐霉素组比较,高剂量(60μmol·L-1)盐霉组人膀胱癌5637细胞生长抑制率升高(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞穿膜数目减少(P<0.05),β-catenin蛋白表达量减少(P<0.05)。结论:盐霉素对人膀胱癌5637细胞的生长有较明显抑制作用,促进细胞凋亡,降低细胞侵袭力,并且这种抑制作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号传导途径来实现的。

沉默S100P对膀胱癌5637细胞生物学特性的影响

目的:探讨S100P基因对膀胱癌细胞生物学特性的影响。方法:将膀胱癌5637细胞分为空白对照组、阴性对照组和S100P siRNA组。空白对照组常规培养,S100P siRNA组细胞感染含S100P siRNA的慢病毒,阴性对照组感染空病毒。感染48 h后,采用实时荧光定量PCR检测3组细胞中S100P mRNA的表达水平,采用Western blot法检测S100P、Cyclin D1、CDK2、P53、NF-κB、Ezrin、P-gp蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖抑制率及吡柔比星对细胞的IC50,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与空白对照组和阴性对照组比较,S100P siRNA组细胞S100P mRNA和蛋白表达水平,Cyclin D1、CDK2、P53、NF-k B、Ezrin、P-gp蛋白表达水平均降低(P<0.05)。S100P siRNA组细胞增殖抑制率和凋亡率均高于阴性对照组(P<0.05),吡柔比星的IC50低于空白对照组(P<0.05)。结论:S100P与膀胱癌细胞的增殖、凋亡及化疗敏感性关系密切。

CTHRC1通过活化FAK-ERK1/2信号通路促进膀胱癌5637细胞迁移和侵袭

目的:探讨胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在膀胱癌组织和细胞中的表达及其对膀胱癌5637细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法:利用TCGA和Arrayexpress数据库中膀胱癌基因表达数据,分析CTHRC1转录和翻译水平。收集2014年9月至2020年12月重庆医科大学附属第一医院手术切除的144例膀胱癌组织和25例全膀胱切除的癌旁组织标本,以及人膀胱癌细胞RT4、5637、T24、UMUC-3、TCCSUP和输尿管上皮永生化细胞SV-HUC-1。采用免疫组织化学染色法、qPCR法和WB法检测膀胱癌组织和细胞中CTHRC1的表达水平,通过Kaplan-Meier曲线分析CTHRC1表达对总生存期(OS)的影响。运用RNAi技术,敲降5637细胞CTHRC1表达后,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测CTHRC1表达下调对5637细胞迁移和侵袭的影响。利用基因集富集分析(GSEA)预测CTHRC1相关的潜在信号通路,WB法检测敲降CTHRC1表达对FAK-ERK1/2通路相关蛋白表达的影响。结果:CTHRC1的转录和翻译水平在肌层浸润性膀胱癌(MIBC)组织和细胞中表达显著上调(均P<0.05),CTHRC1高表达组患者5年OS较低表达患者缩短(P<0.05)。干扰CTHRC1表达后,膀胱癌5637细胞迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01)。GSEA预测显示,CTHRC1高表达组主要富集在黏着斑激酶(FAK)、肌动蛋白细胞骨架调节、FAK和ERK1/2信号通路。WB法实验结果表明,重组CTHRC1蛋白促进膀胱癌5637细胞FAK-ERK1/2信号通路活化(P<0.05或P<0.01)。结论:CTHRC1在MIBC中表达上调,且与膀胱癌患者不良预后密切相关;CTHRC1促进膀胱癌细胞迁移和侵袭,该过程可能与FAK-ERK1/2信号通路的激活有关。

桔梗皂苷D对人移行细胞癌5637细胞株的诱导凋亡作用及其分子机制

目的探讨桔梗皂苷D对人移行细胞癌5637细胞诱导凋亡作用及分子机制。方法 HE染色和透射电子显微镜观察细胞的形态学变化;流式细胞学技术检测细胞凋亡率的变化;Western blot法检测凋亡通路相关蛋白的表达变化;PCR法检测p53、Bcl-2、Bax mRNA表达;免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果通过HE染色和电子显微镜观察桔梗皂苷D组5637细胞,可见凋亡细胞,凋亡指数明显高于对照组(P<0.01);与对照组细胞相比,桔梗皂苷D组5637细胞Survivin、Livin表达量明显下降(P<0.05);Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3、Cyt-c表达量与对照组比较,明显增加(P<0.05);p53、Bax mRNA水平明显升高,Bcl-2 mRNA表达下降(P<0.01);Bax、Caspase-9、Caspase-8以及Caspase-3表达较对照组增多,而Bcl-2表达则明显下降(P<0.01)。结论桔梗皂苷D能诱导人移行细胞癌5637细胞凋亡,其作用机制可能与上调Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3、Cyt-c、p53和下调Bcl-2表达、激活线粒体途径和死亡受体途径有关。

丹参素对膀胱癌5637细胞Src/FAK信号通路及上皮间质转化的影响

目的:探讨丹参素(Dss)对膀胱癌5637细胞类固醇受体共激活因子/黏着斑激酶(Src/FAK)信号通路及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:用不同浓度的Dss(0、40、60和80μg/mL)处理膀胱癌5637细胞24 h后,分别命名为Dss-0组、Dss-40组、Dss-60组和Dss-80组;采用实时荧光定量聚合酶链反应检测膀胱癌5637细胞中EMT标志基因[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的信使核糖核酸(mRNA)]表达水平,采用蛋白质印迹法检测膀胱癌5637细胞中Src/FAK信号通路相关蛋白表达水平,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测膀胱癌5637细胞增殖情况,采用划痕实验检测膀胱癌5637细胞的迁移能力。结果:Dss-0组、Dss-40组、Dss-60组和Dss-80组膀胱癌5637细胞E-cadherin mRNA表达水平依次升高,N-cadherin mRNA、Vimentin mRNA、磷酸化Src(p-Src)/Src蛋白、磷酸化FAK(p-FAK)/FAK蛋白表达水平以及吸光度、迁移率依次降低,呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:Dss可能通过抑制Src/FAK信号通路来阻碍膀胱癌5637细胞EMT过程,进而抑制膀胱癌5637细胞增殖和迁移。

二甲双胍对膀胱癌5637细胞系热休克蛋白及VEGF表达的影响

目的探讨二甲双胍对膀胱癌5637细胞系热休克蛋白及VEGF表达的影响。方法选用膀胱癌5637细胞,分为对照组、二甲双胍2 mM组、5 mM组、10 mM组、20 mM组,各组分别处理膀胱癌5637细胞。采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期变化,采用平板克隆形成试验检测细胞克隆形成率,采用Western blot法检测细胞HSP-70、HSP-90α、VEGF蛋白表达水平。结果与对照组比较,二甲双胍各浓度组在24、48、72 h对膀胱癌5637细胞增殖抑制率较高（P〈0.05）,且浓度越高、作用时间越长,对细胞增殖的抑制作用越强。与对照组比较,二甲双胍各浓度组膀胱癌5637细胞克隆形成率较低（P〈0.05）。与对照组比较,二甲双胍各浓度组G1期细胞比例较高,S期细胞比例较低（P〈0.05）,二甲双胍2 mM组、5 mM组G2期细胞比例较低（P〈0.05）。与对照组比较,二甲双胍各浓度组膀胱癌5637细胞HSP-70、HSP-90α、VEGF蛋白表达水平较低（P〈0.05）。结论二甲双胍对膀胱癌5637细胞系HSP-70、HSP-90α及VEGF表达有明显抑制作用,能够抑制细胞增殖、克隆,促进细胞发生G1期阻滞,引起细胞凋亡,作用呈剂量依赖性。

miR-128-3p过表达靶向MAPK1抑制膀胱癌5637细胞株的侵袭,迁移和上皮间质转化

目的 研究miR-128-3p过表达对膀胱癌5637细胞株的侵袭,迁移和上皮间质转化影响。方法 基因预测软件TargetScan筛选出miR-128-3p的靶基因,荧光素酶报告实验验证;RT-PCR检测miR-128-3p和MAPK1的表达,Transwell检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测Ecadherin、N-cadherin、ERK1/2、c-Myc和c-fos的表达,免疫荧光检测Vimentin的表达;裸鼠皮下注射建立移植瘤模型,30 d后检测瘤重量,绘制存活曲线,检测移植瘤中Vimentin、miR-128-3p、MAPK1、ERK1/2、cMyc和c-fos的量。结果 miR-128-3p靶向抑制MAPK1表达;miR-128-3p过表达后,侵袭细胞数目、伤口愈合率降低,E-cadherin表达上调,N-cadherin表达下调,Vimentin阳性率减少,p-ERK1/2、c-Myc和c-fos表达下调。经miR-128-3p干预,裸鼠体内移植瘤重量减轻,存活率增加,miR-128-3p表达上调,MAPK1的表达下调,Vimentin阳性率减少,p-ERK1/2、c-Myc和c-fos表达下调。结论 过表达miR-128-3p通过靶向抑制MAPK1表达来抑制膀胱癌细胞5637的侵袭能力、迁移能力、上皮-间充质转化和ERK1/2、cMyc和c-fos通路。

RNA干扰对5637膀胱癌细胞生存素基因表达的影响

目的研究RNA干扰(RNAi)对膀胱癌5637细胞生存素(survivin)基因表达的干扰效应。方法化学合成生存素序列特异性双链RNA(dsRNA),用Lipofectamine2000转染5637细胞,采用荧光定量PCR检测生存素基因的表达,用流式细胞仪检测Annexin v标记的凋亡细胞。结果序列特异性dsRNA-生存素可显著抑制生存素基因在转录水平上的表达,和阴性对照组相比,浓度为40nmol/L的dsRNA-生存素在转染5637细胞24、48h后生存素mRNA表达的抑制率分别为29%和53%,浓度为100nmol/L时抑制率为46%和86%。生存素基因表达的抑制与5637细胞的凋亡呈正相关。结论转染dsRNA-生存素可明显抑制膀胱癌5637细胞株生存素基因的表达,并伴有细胞凋亡。

shRNA干扰Bmi-1基因表达载体构建及其对膀胱癌5637细胞增殖抑制作用的研究

目的:构建shRNA体内表达载体pGeneClipTM-shRNA,研究抑制Bmi-1基因表达对膀胱癌5637细胞凋亡的影响。方法:构建靶向Bmi-1的shRNA真核表达质粒pGe-neClipTM-B1、pGeneClipTM-B2以及pGene-ClipTM-B-neg(阴性对照质粒),采用脂质体转染试剂转染膀胱癌5637细胞,采用RT-PCR、蛋白质印迹法技术检测转染前后5637细胞中Bmi-1基因表达的变化;利用MTT法检测表达质粒对5637细胞增殖的影响;并利用流式法和蛋白质印迹法技术检测表达质粒对5637细胞凋亡的作用及影响机制。结果:经酶切、测序鉴定,重组质粒均在1 200 bp左右出现酶切条带,符合设计要求。RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,5637细胞经小RNA干扰后Bmi-1的mRNA和蛋白质表达水平明显降低,P<0.05。与阴性对照组和未转染组相比,转染Bmi-1 shRNA组细胞增殖明显受到抑制,P<0.05。转染Bmi-1 shRNA组细胞凋亡率分别为19.95%和27.27%,与未转染组7.23%和阴性对照组6.78%相比,转染Bmi-1 shRNA组细胞凋亡率明显增加,P<0.05。结论:减少膀胱癌5637细胞Bmi-1基因的表达可抑制5637细胞增殖并促进细胞凋亡。

siRNA下调SNCG基因表达抑制膀胱癌细胞系5637的增殖和侵袭

目的探讨突触核蛋白γ(SNCG)基因对膀胱癌细胞5637增殖和侵袭能力的影响。方法设计并合成3对SNCG-siRNA序列,转染5637细胞后,用RT-q PCR和Western blot检测SNCG的表达。分别通过CCK-8增殖实验和侵袭实验评估5637细胞增殖和侵袭能力。结果与膀胱癌细胞系T24、EJ和UMUC-3相比,5637细胞中SNCG表达水平最高(P<0.05);与空白和阴性对照组相比,3对SNCG-siRNA序列转染5637后均可抑制SNCG mRNA和SNCG蛋白的表达(P<0.05),但SNCG-siRNA-244组抑制效果最明显;实验组5637细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05),且细胞的侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论通过特异性干扰SNCG基因的表达可抑制膀胱癌细胞5637的增殖和侵袭,SNCG的siRNA序列可能成为膀胱癌治疗的新靶点。

水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其相关机制。方法采用MTT法观察不同浓度SB对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR检测凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达变化。结果MTT检测发现:随着SB浓度增加和作用时间延长,对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用增强,且各组间比较均有显著性差异(P<0.01),并呈时间-剂量依赖关系;倒置显微镜发现应用SB干预后,5637细胞体积缩小,变形,胞浆浓缩,核固缩深染;人膀胱癌细胞株5637中Survivin的mRNA表达随着SB浓度增加和时间延长相应下降。结论SB可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖;并下调凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。

隐丹参酮对人膀胱癌5637细胞增殖和凋亡的影响

目的研究隐丹参酮对膀胱癌5637细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法对照组膀胱癌5637细胞用含0.1%DMSO的培养基培养,40,80,120,160μmol·L^-1隐丹参酮组膀胱癌5637细胞用0.1%DMSO配制成的40,80,120,160μmol·L^-1的隐丹参酮处理。以CCK-8检测各组细胞的增殖抑制率;以流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;以蛋白质印迹(Western Blot)检测各组Bcl-2、Bax、P53、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白的表达。结果对照组和40,80,120,160μmol·L^-1隐丹参酮组72 h增殖抑制率分别为(0.00±3.76)%,(38.90±3.51)%,(76.69±3.70)%,(85.61±2.77)%,(94.88±0.38)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组和20,40,80μmol·L^-1隐丹参酮组的细胞凋亡率分别为(1.83±0.31)%,(16.37±0.70)%,(25.20±1.05)%,(35.60±1.95)%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和40,80μmol·L^-1隐丹参酮组的Bcl-2相关X蛋白(Bax)相对表达量分别为1.00±0.14,2.44±0.21,2.30±0.19;cleaved Caspase-3蛋白相对表达量分别为1.00±0.12,2.05±0.23,2.23±0.19;B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白相对表达量分别为1.00±0.12,0.58±0.05,0.19±0.02,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论隐丹参酮能够抑制膀胱癌5637细胞增殖,诱导其凋亡,其发生机制可能与上调Bax、cleaved Caspase-3,下调Bcl-2有关。