创业项目“580”情绪转化站的SWOT分析及战略定位

对四川省省级大学生创业训练项目"580情绪转化站"进行SWOT分析,结果表明:项目优势大于劣势,机会大于风险。在SO(增长型)战略、ST(多文化)战略、WO(扭转型)战略、WT(防御型)四种战略中,充分运用内部优势、准确把握外部机会,同时规避外部劣势和威胁的SO(增长型)战略更适合项目的发展,可以为创业项目产生很好的"杠杆效应",从而达成创业梦想。

施耐德昆腾系列与M580系列PLC组建冗余通信

主要介绍了在一次高炉控制系统升级改造中因控制系统部分升级而造成的通信不兼容问题,通过TCSEGDB23F24FA网络通信和代理组件的使用完成Modbus TCP/IP与Modbus Plus通信组成的冗余通信,同时提出了冗余通信使用中心跳检测、通信测试方式等问题的解决方案。新的控制系统投用后,冗余通信运行情况良好,自动切换功能正常使用。

GAAS80/580焊机管理与维护

GAAS80/580焊机是我国当前焊轨基地最先进、最核心的设备,焊机的性能对钢轨焊缝的质量具有决定性影响。本文从焊机运用与维护进行研究、讨论,旨在引起大家重视,能够有所借鉴。

大鼠心肌缺血-再灌注损伤中转录因子ZFP580表达的变化

目的:研究核转录因子锌指蛋白580(ZFP580)在大鼠心肌缺血-再灌注(I-R)损伤中表达的变化,探讨其可能的作用。方法:48只SD大鼠分为:(1)假手术组;(2)I-R组,结扎冠状动脉左前降支30 min后恢复血液灌注;(3)L-精氨酸(L-Arg)预处理+I-R组,于缺血前给予L-Arg 300 mg/kg,重复I-R组操作;(4)L-Arg预处理+sham组。(2)、(3)组于I-R后1 h或4 h处死动物。各组大鼠取心肌标本HE染色,光镜下计数心肌组织中中性粒细胞数。检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,半定量RT-PCR或免疫组化染色分析ZFP580及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在心肌细胞的表达。结果:I-R后,缺血区心肌细胞肿胀,周围大量中性粒细胞浸润,血清LDH、CK活性及TNF-α浓度升高,心肌ZFP580和eNOS表达下调(P<0.05)。应用L-Arg预处理+I-R后,血清LDH、CK活性及TNF-α浓度降低,心肌ZFP580和eNOS的表达回升。结论:心肌I-R损伤引起ZFP580表达下调。ZFP580及eNOS的表达上调可能是L-Arg预处理拮抗心肌I-R损伤的机制之一。

ZNF580-EGFP融合蛋白的亚细胞定位研究

目的:构建增强型绿色荧光报告蛋白(EGFP)与人ZNF580融合蛋白的真核表达载体,转染MGC803细胞进行表达,研究ZNF580-EGFP融合蛋白在MGC803细胞的亚细胞定位。方法:利用PCR技术扩增ZNF580基因cDNA开放阅读框架全编码区、N端编码区、C端编码区,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1,BglⅡ及HindⅢ双酶切电泳筛选、鉴定并测序。荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在MGC803细胞中的表达及亚细胞定位。结果:酶切pEGFP-ZNF580(1-172)、pEGFP-ZNF580(1-93)、pEGFP-ZNF580(94-172),电泳分析插入片段长度分别为:526bp、289bp、247bp,经连接点两端进行测序证实连接正确。pEGFP-ZNF580(1-172)、pEGFP-ZNF580(94-172)表达的ZNF580-EGFP融合蛋白定位在MGC803细胞核。结论:成功构建真核表达载体并在MGC803细胞中得到表达,分析其核定位信号可能位于ZNF580蛋白的C端C2H2型锌指主构域94-172位氨基酸区间。

ZNF580在1-磷酸鞘氨醇诱导内皮细胞迁移和增殖中的作用

目的:研究人锌指蛋白ZNF580在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)诱导内皮细胞迁移和增殖中的作用,为探讨ZNF580功能提供科学依据。方法:RT-PCR检测S1P受体在EA.hy926细胞的表达情况;不同浓度(0～10μmol/L)S1P刺激EA.hy926细胞不同时间(0～12 h)后,RT-PCR和Western blotting检测S1P对ZNF580表达的影响;利用p38 MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580研究S1P是否通过此信号通路影响ZNF580的表达;脂质体转染法获得瞬时过表达和瞬时低表达ZNF580的EA.hy926细胞;Transwell实验及MTT比色法分析ZNF580对内皮细胞迁移和增殖活性的影响。结果:EA.hy926细胞表达S1P1、S1P3和S1P5三种受体,其cDNA的特异性扩增产物分别为352 bp、701 bp和236 bp;S1P刺激EA.hy926细胞后,ZNF580的表达呈现剂量和时间依赖性增高;SB203580能够抑制S1P诱导的ZNF580的上调作用;ZNF580过表达(低表达)后内皮细胞迁移和增殖活性明显增强(减弱)。结论:S1P通过p38 MAPK信号通路影响ZNF580的表达;ZNF580在内皮细胞迁移和增殖过程中起着重要的调控作用。

履行不能与合同终止——以《民法典》第580条第2款为中心

《民法典》第580条第2款新规定的“履行不能情形下的合同终止条款”是合同编部分最为重要的修订,曾引发高度关注与争议。该条文通过赋予当事人请求司法机关终止存在终局性履行不能的合同,进而实现打破合同僵局的功能。本条的引入可填补立法的漏洞,且不会构成对现有合同法体系的颠覆或破坏。双务合同的风险负担及履行抗辩规则均无法有效解决合同僵局问题。在法律适用上,“致使不能实现合同目的”这一构成要件旨在防止可能出现的滥用;未来应考虑通过司法解释或指导性案例将本条扩张适用至金钱债务所引发的合同僵局;第580条第2款在适用上将可产生某种“外溢效应”。

锌指基因ZFP580在大鼠心肌缺血损伤中的表达

【目的】观察大鼠ZFP580基因在急性心肌缺血的不同时期的表达变化,以初步探讨锌指基因ZFP580在心肌缺血损伤中的作用。【方法】腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)建立大鼠急性心肌缺血模型,分别于ISO注射后1h、24h取材,对照组腹腔注射等量生理盐水。观察心肌形态学改变,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶(CK)的含量,半定量RT-PCR及免疫组化方法分析ZFP580 mRNA及蛋白水平的表达变化。【结果】ISO处理组大鼠心肌组织广泛缺血损伤,血清LDH、CK含量明显升高(P<0.05),心室肌ZFP580mRNA表达下调(P<0.05),免疫组化染色阳性细胞百分率明显降低,以ISO注射1h后变化更为明显。【结论】ZFP580是心肌缺血损伤的早期调控基因之一,其表达下调可能参与了心肌缺血损伤的形成。

ZNF580与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在HEK293细胞的表达和定位

[目的]构建人ZNF580与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白真核表达载体,转染细胞进行瞬时表达,分析ZNF580-EGFP融合蛋白在人胚肾HEK293细胞中的表达和亚细胞定位。[方法]利用PCR技术扩增ZNF580基因cDNA开放阅读框架全编码区（编码1-172位氨基酸）、N端编码区（编码1-93位氨基酸）、C端编码区（编码94-172位氨基酸）,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1,BglΠ及HindШ双酶切筛选鉴定并测序。荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在HEK293细胞中的表达及亚细胞定位。[结果]pEGFP-ZNF580（1-172）、pEGFP-ZNF580（94-172）表达的ZNF580-EGFP融合蛋白聚集于HEK293细胞核。[结论]ZNF580蛋白的核定位信号位于其C端C2H2型锌指主构域（94-172位氨基酸区间）。

酵母双杂交筛选与转录因子ZNF580相互作用的蛋白

目的:寻找可能与锌指转录因子ZNF580存在相互作用的蛋白。方法:以ZNF580基因开放阅读框作为模版,PCR扩增后连接入酵母表达质粒pGB。诱饵质粒pGB-ZNF580经测序验证后转化酵母菌株Y190,人胎脑cDNA文库亦转化到能稳定表达诱饵蛋白的Y190酵母菌株中,并铺到含有营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-His/-Leu)的培养皿上进行初步筛选。所得阳性克隆再进行β-半乳糖苷酶克隆转移滤纸实验进一步去除假阳性。随机挑取部分阳性克隆,逐一转化入含有诱饵质粒的Y190酵母菌进行一对一验证。分离阳性克隆质粒测序,并应用生物信息学方法分析阳性克隆cDNA编码的蛋白。结果:确定了14种与ZNF580可能存在相互作用的蛋白。结论:初步探讨了ZNF580的功能及其可能参与的信号转导通路,为进一步研究转录因子ZNF580参与动脉粥样硬化的机制奠定了实验基础。

miR-580-3p靶向COL11A1调控肝癌细胞凋亡

目的探究miR-580-3p靶向COL11A1调控肝癌细胞凋亡的机制。方法纳入肝细胞癌(HCC)患者42例,实时荧光定量PCR检测肝癌组织、癌旁组织、人正常肝细胞(LO2、QSG-7701)和人肝癌细胞系(HepG2、Huh-7、Li-7、SK-Hep-1)中COL11A1 mRNA和miR-580-3p表达水平。过表达和敲低miR-580-3p后,CCK8法检测肝癌细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞的凋亡水平和细胞周期。免疫印迹分析肝癌关键通路Akt/PI3K在miR-580-3p中的作用。结果与癌旁组织比较,肝癌组织COL11A1 mRNA表达升高,miR-580-3p表达降低;与人正常肝细胞系比较,人肝癌细胞系miR-580-3p表达降低、COL11A1 mRNA表达升高(P<0.05)。COL11A1mRNA与miR-580-3p表达呈负相关(P<0.05)。miR-580-3p过表达后,人肝癌细胞的增殖水平、COL11A1 mRNA降低,凋亡率升高;miR-580-3p敲低后上述趋势反之,细胞周期停滞在G1/S期。人肝癌细胞凋亡率COL11A1过表达后降低,敲低后升高。p-Akt、p-PI3K表达在敲低COL11A1或过表达miR-580-3p后降低,过表达COL11A1或敲低miR-580-3p后升高。结论肝癌细胞和肝癌组织miR-580-3p表达水平降低,miR-580-3p/COL11A1轴可能通过调控PI3K/Akt通路影响肝癌细胞凋亡。

ZNF580基因对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响

【目的】研究人C2H2型锌指蛋白基因ZNF580在人脐静脉内皮细胞增殖和迁移中的作用。【方法】利用细胞转染技术获得瞬时过表达ZNF580的EA.hy926内皮细胞,并用半定量RT-PCR、Western blotting法检测ZNF580的表达情况;采用MTT比色法和细胞迁移实验检测ZNF580对内皮细胞功能的影响。【结果】获得瞬时过表达ZNF580的内皮细胞(转染效率为60%),且ZNF580基因过表达内皮细胞增殖和迁移能力分别增强3倍和2.5倍。【结论】ZNF580能够促进内皮细胞增殖和迁移。

C57BL/6小鼠ZFP580 C端编码基因的克隆及序列分析

【目的】克隆C57BL/6小鼠ZFP580 C端编码基因cDNA序列,并进行序列测定和分析。【方法】参照GENBANK公布的C57BL/6小鼠ZFP580 cDNA序列(注册号为AK005257),根据ZFP580 C端编码基因cDNA序列设计1对引物,采用RT-PCR技术,从C57BL/6小鼠的肾脏组织中扩增ZFP580 C端编码基因cDNA序列,回收纯化后与T载体连接,构建重组子pMD18-T-ZFP580,转化大肠杆菌DH5α。阳性克隆以限制性酶切分析与PCR法鉴定后,测定序列并分析。【结果】自C57BL/6小鼠肾脏组织获得总RNA,扩增出255 bp的基因片段,成功构建阳性克隆重组子pMD-T-ZFP580,经双酶切和PCR鉴定与预期结果一致。所测定的C57BL/6小鼠ZFP580 C端基因cDNA序列与日本RIKEN基因组中心于GENBANK注册(注册号为AK005257)的完全一致,与人ZNF580 C端编码基因cDNA序列比较,核苷酸序列同源性为90%;该cDNA序列所编码的氨基酸序列与人ZNF580基因C端比较,同源性为100%,均编码有3个串联重复的C2H2型锌指蛋白主构域。其氨基酸序列与大鼠、犬、牛比较,同源性分别为100%、100%、98%。【结论】成功克隆C57BL/6小鼠ZFP580 C端编码基因,该基因在不同种属间高度保守。

绿色荧光蛋白报告基因与ZNF580基因重组真核表达载体的构建与鉴定

【目的】构建具有绿色荧光蛋白报告 (GFP)基因的ZNF5 80真核表达载体 ,为转染细胞提供基础。【方法】根据ZNF5 80cDNA序列的开读框架设计上、下游引物 ,利用PCR技术扩增ZNF5 80cDNA开放阅读框序列 ,将PCR目的片段与PGEM T载体连接并克隆 ,酶切含目的片段PGEM T质粒及 pEGFP C1载体 ,回收纯化后做定向克隆连接 ,BglⅡ及HindⅢ双酶切电泳筛选、鉴定并测序。【结果】酶切 pEGFP C1 ZNF5 80 ,电泳分析插入片段长度为 :5 2 4bp ,与预期的结果一致 ,经连接点两端进行测序 ,测序结果显示接头两端序列连接正确。【结论】成功构建真核表达载体pEGFP C1 ZNF5 80。

siRNA沉默ZNF580基因对内皮细胞MMP-2的表达及侵袭能力的影响

【目的】观察ZNF580基因沉默后内皮细胞MMP-2的表达及迁移和侵袭能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】针对ZNF580基因不同部位设计并化学合成3对不同靶向小干扰RNA(siRNA),脂质体介导瞬时转染EA.hy926内皮细胞;应用半定量RT-PCR、Western blotting及明胶酶谱检测转染前后内皮细胞ZNF580和MMP-2 mRNA、蛋白的表达及活性变化;运用划痕愈合实验和Transwell小室模型检测转染前后内皮细胞迁移和侵袭能力的改变。【结果】筛选出最佳干扰序列siRNA序列3;下调ZNF580基因表达后,MMP-2 mRNA的表达及明胶酶的活性均下调(P<0.05),且内皮细胞体外迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01)。【结论】ZNF580在内皮细胞运动转移过程中具有重要作用,可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。

基于AMC580多视角航空摄影系统的快速真三维数据生产及应用初探

本文主要介绍了AMC580多视角航空摄影系统及倾斜摄影技术基本原理,并以张家界市武陵源区三维数据生产为例介绍了数据生产过程及初步应用。结果表明,此方法能高效、高质量地实现真三维数据生产,将用户引入符合人眼视觉习惯的真实且直观的世界。但以倾斜摄影获取到的三维数据为基础开展广泛而有效的应用仍然需要进一步深入。

ZFP580基因在高脂血症小鼠主动脉组织中的表达

目的探讨ZFP580基因在高脂血症小鼠主动脉组织中的表达情况。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组和高脂血症组。采用逆转录PCR方法,检测2组小鼠主动脉组织中ZFP580的表达。结果 ZFP580在两组小鼠的主动脉组织中均有表达,而高脂血症组表达量明显低于对照组(P<0.01)。结论血脂升高使ZFP580在C57BL/6小鼠主动脉组织中表达明显下调,表明ZFP580表达改变与高脂血症的发生存在一定关系。

雌激素对去势高脂血症C57BL/6模型小鼠ZFP580 mRNA表达的影响

目的探讨雌激素对C57BL/6小鼠主动脉中ZFP580基因表达的影响。方法建立假手术组、去势对照组(卵巢切除)、去势实验组(卵巢切除并腹腔内注射苯甲酸雌二醇)C57BL/6小鼠高脂血症模型并鉴定;提取C57BL/6小鼠主动脉总RNA,设计并合成ZFP580及β-actin基因的引物,利用半定量RT-PCR方法分析ZFP580的mRNA水平。结果成功构建去势C57BL/6小鼠高脂血症模型;去势对照组小鼠ZFP580基因表达水平与假手术组和实验组相比均下降(P<0.05),而后两者表达水平比较无显著差异(P>0.05)。结论小鼠在摘除卵巢失去雌激素的调控后,ZFP580基因表达下调,小鼠在去势后定期给予雌激素,ZFP580基因表达回复至假手术组水平,说明雌激素能够上调ZFP580基因表达。