唾液酸粘蛋白单抗5E2、6C10的制备、鉴定及对胃肠癌糖链表达规律的初步探讨

目的 寻找识别新的肿瘤相关粘蛋白抗原的单抗,为阐明胃肠癌粘液糖蛋白的表达规律进而为胃肠肿瘤的预后、分型等提供参考依据。方法 以牛颌下腺粘蛋白(BSM)为免疫原免疫小鼠,以免疫脾细胞与Sp2/0细胞融合建立杂交瘤细胞株,用有限稀释法克隆化,间接ELISA及间接ELISA结合神经氨酸酶消化筛选克隆。以聚丙烯酰胺凝胶电泳,免疫印记(Western-Blot),间接ELISA结合热处理、胰蛋白酶消化、过碘酸氧化以及稀碱处理去除O-乙酰基等方法进行抗体的鉴定。以免疫组化LSAB法观察两株抗体对68例胃癌和55例肠癌粘蛋白糖链抗原的标记情况。结果 两株抗体分别命名为5E2和6C10,Western-Blot显示两株抗体均只与分子量大于220kDa的PAS染色阳性条带反应。两株单抗与BSM的反应都对热处理、胰蛋白酶消化、过碘酸氧化、神经氨酸酶消化等处理敏感。5E2还对稀碱去除O-乙酰基敏感,6C10可以部分吸收sialyl-lewis^a。单抗6C10在早期胃癌及癌旁的阳性率分别为5.5％和52.9％,进展癌及其癌旁的阳性率分别为14.0％和22.9％;在结肠癌及其癌旁的阳性率分别为30.9％和83.8％。单抗5E2在胃早期癌及其癌旁的阳性率分别为16.7％和41.2％,在进展癌及其癌旁的阳性率分别为42.0％和37.5％;在肠癌及其癌旁的阳性率分别为69.1％和91.9％。结论

miRNAs调控E2F5在癌症发生发展中的作用及其机制研究进展

E2F转录因子5(E2F transcription factor 5,E2F5)是腺病毒E2启动子结合因子(adenovirus E2 promoter binding factor,E2F)转录因子家族的一员,参与细胞增殖、分化和凋亡等多种重要细胞过程。由于E2F5在细胞周期调控中发挥重要作用,因此它与多种癌症的发生,发展和预后密切相关。近来随着对微小RNA(microRNAs,miRNAs)研究的进展,发现多种miRNAs通过靶向E2F5来影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭和耐药。本文结合最新研究报道,对E2F5在癌症中的研究进展,特别是不同肿瘤中miRNAs与E2F5之间的关系作一综述,为制定癌症的治疗策略提供新的思路。

LncRNA SNHG12通过调控E2F5对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:分析LncRNA SNHG12通过调控E2F5对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:构建抑制lncRNASNHG12表达的PC3细胞,分RWPE-1组、DU145组、LNCaP组、PC3组,采用实时荧光RT-PCR检测lncRNA SNHG12、E2F5表达。并干扰E2F5表达从而对PC3细胞转染,进一步分为NC组、si-NC组、si-SNHG12组、si-E2F5组、si-SNHG12+OE-si-NC、si-SNHG12+OE-E2F5组,检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况。结果:与癌旁组织相比,前列腺癌组织中lncRNA SNHG12、E2F5表达水平升高(P<0.05)。与RWPE-1组相比,DU145组、LNCaP组、PC3组细胞中LncRNA SNHG12、E2F5表达水平升高,且PC3组LncRNA SNHG12、E2F5表达水平最高(P<0.05)。与si-NC组相比,si-SNHG12组SNHG12表达水平降低(P<0.05),表明干扰lncRNA SNHG12表达的PC3细胞株构建成功,与si-NC组相比,si-SNHG12组CyclinD1、MMP-9、OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低,凋亡细胞升高(P<0.05)。与si-NC组相比,si-E2F5组E2F5表达水平降低(P<0.05),表明干扰E2F5的PC3细胞株构建成功,与si-NC组相比,si-E2F5组CyclinD1、MMP-9、OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低,凋亡细胞升高(P<0.05)。双荧光素酶报告试验显示,与si-NC组相比,E2F5可使SNHG12荧光素酶活性降低(P<0.05),对MUT-SNHG12荧光素酶活性影响较小(P>0.05)。与si-NC组相比,抑制lncRNA SNHG12表达可使PC3细胞中E2F5表达、CyclinD1、MMP-9、OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数降低,凋亡细胞升高(P<0.05),与si-SNHG12+OE-si-NC组相比,si-SNHG12+OE-E2F5组E2F5表达、CyclinD1、MMP-9、OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数升高,凋亡细胞降低(P<0.05)。结论:干扰lncRNA SNHG12表达,可对E2F5表达进行调控,抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭,并促进其癌细胞的凋亡。

lncRNASOX2-OT调节miR-215-5p/ZEB2轴抑制人前列腺癌细胞系增殖和上皮间质转化研究

目的探讨长非编码RNA SRY盒转录因子2重叠转录本(lncRNA SOX2-OT)调节miR-215-5p/E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)轴对前列腺癌细胞增殖和上皮间质转化(EMT)的影响。方法将PC-3细胞分为对照组、si-SOX2-OT组、si-NC组、si-SOX2-OT+anti-miR-215-5p组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中SOX2-OT、miR-215-5p与ZEB2表达。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)及5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖;流式细胞术检测PC-3细胞凋亡率;Transwell检测PC-3细胞迁移、侵袭;qRT-PCR检测PC-3细胞miR-215-5p、ZEB2 mRNA、凋亡蛋白与EMT标志蛋白转录表达;Western blot检测PC-3细胞ZEB2、凋亡蛋白与EMT标志蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证PC-3细胞中SOX2-OT对miR-215-5p及miR-215-5p对ZEB2的靶向调节作用。结果与人前列腺上皮细胞相比,人前列腺癌组织源细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、22RV1中SOX2-OT、ZEB2 mRNA表达升高,miR-215-5p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,si-SOX2-OT组细胞活力、EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、细胞ZEB2、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Vimentin mRNA和蛋白表达均降低,细胞凋亡率、miR-215-5p及Bcl-2相关X基因(Bax)、E-cadherin mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达可减弱敲低SOX2-OT对PC-3细胞的影响。结论敲低SOX2-OT可通过促进miR-215-5p表达而下调ZEB2的表达,从而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并诱导细胞凋亡。

E2F5和SATB1在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞生物学功能的影响

目的:研究E2F5和核基质结合区结合蛋白质1(SATB1)在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞(MCF-7)生物学功能的影响。方法:选取30例乳腺癌患者为研究对象,收集其新切除的乳腺癌组织和配对癌旁组织,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定E2F5 mRNA、SATB1 mRNA的组织表达水平,免疫组织化学法测定E2F5、SATB1的组织表达水平,在MCF-7细胞中转染E2F5和核基质结合区结合蛋白质(SATB),分析E2F5和SATB表达对MCF-7细胞生物学功能的影响。结果:乳腺癌组织中SATB1 mRNA、E2F5 mRNA的表达水平均高出癌旁组织;且乳腺癌组织中SATB1、E2F5蛋白表达也高出癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);MCF-7细胞内转染pGV141-E2F5和SATB1的相对表达量、细胞增殖率、迁移以及侵袭细胞数量较空白对照组、空载组升高,差异有统计学意义(P<0.05);SATB1、E2F5蛋白中高表达患者在病理分期、淋巴结转移上,差异有统计学意义(P<0.05);且SATB1、E2F5蛋白与病理分期、淋巴结转移呈现正相关性(P<0.05)。结论:E2F5和SATB1在乳腺癌中呈现高表达,且在MCF-7细胞增殖、迁移以及侵袭上具有重要意义,另外其表达与病理分期、淋巴结转移存在密切关系,为后续治疗提供有利依据。

miR-372靶向E2F转录因子5抑制宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞的恶性生物学行为

目的:探讨微小RNA-372(miR-372)对宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞恶性生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:RT-qPCR检测宫颈鳞状细胞癌组织及其癌旁组织中miR-372和E2F转录因子5(E2F5)表达水平,构建miR-372过表达和低表达SiHa细胞系(miR-372、anti-miR-372),采用MTT法、流式细胞术、Transwell法及Western blot分别检测细胞增殖、凋亡、侵袭情况及其相关蛋白水平。在线预测miR-372与E2F5靶向关系并进行双色荧光素酶实验验证,在miR-372过表达SiHa细胞系上调E2F5,观察细胞增殖、凋亡和侵袭情况。结果:癌组织中miR-372表达低于其癌旁组织(P<0.05),而E2F5表达高于其癌旁组织(P<0.05)。miR-372过表达抑制细胞增殖、侵袭和核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(cyclin A1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)表达(P<0.05);上调细胞凋亡和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)、Caspase-3、B淋巴细胞瘤2蛋白/Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2/Bax)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达(P<0.05)。miR-372可靶向抑制E2F5表达,E2F5过表达可缓解miR-372对SiHa细胞作用效果。结论:miR-372过表达可抑制SiHa细胞增殖和侵袭、促进细胞凋亡,可能与靶向作用抑制E2F5表达有关。

胃腺癌细胞中miR-23a靶基因PPP2R5E的鉴定

目的利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证mi R-23a的靶基因PPP2R5E。方法选取表达绿色荧光蛋白的质粒pc DNA3/EGFP,将PPP2R5E-3’UTR的特异性序列插入其中,并与红色荧光蛋白表达质粒p Ds Red2-N1及表达mi R-23a的质粒共同稳定转染胃腺癌细胞MGC803,稳定转染后提取细胞蛋白,荧光分光光度计进行定量检测。并通过半定量RT-PCR、实时定量PCR检测mi R-23a功能受抑制或过表达mi R-23a的MGC803细胞或胃腺癌组织中PPP2R5E基因m RNA的表达情况,验证mi R-23a对其调控作用。表达si RNA抑制MGC803中PPP2R5E m RNA的表达后,通过MTT和平板克隆形成实验观察其对胃腺癌细胞系MGC803细胞活性和克隆形成能力的影响。结果绿色荧光蛋白的表达量,稳定转染pc DNA3/EGFPPPP2R5E-3’UTR质粒和mi R-23a质粒组明显低于pc DNA3/EGFP-PPP2R5E-3’UTR和pc DNA3共同稳定转染组。mi R-23a功能受抑制的胃腺癌细胞MGC803中靶基因PPP2R5E的m RNA表达水平升高;相反,过表达mi R-23a的胃腺癌细胞MGC803及胃腺癌组织中靶基因PPP2R5E的m RNA表达水平下降。沉默MGC803细胞中的PPP2R5E后,细胞活性和克隆形成能力均加强。结论 PPP2R5E可能是mi R-23a的直接靶基因。

微小核糖核酸miR-613通过下调E2F5的表达抑制前列腺癌细胞增殖

目的研究微小核糖核酸miR-613在前列腺癌组织及细胞系中的表达及其对前列腺癌细胞增殖的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测前列腺癌组织及细胞系中miR-613的表达情况,并检测各组细胞中E2F5 mRNA的表达情况;蛋白质印迹法检测E2F5蛋白的表达;通过细胞增殖实验检测过表达miR-613后细胞的增殖能力;集落形成实验检测单个细胞克隆增殖情况;双荧光素酶报告实验验证miR-613和E2F5是否靶向结合。结果qPCR结果显示,miR-613在前列腺癌组织和细胞系均显示低表达。与Control组相比,转染miR-613组PC3和LnCap细胞中E2F5蛋白表达水平降低,细胞增殖明显受抑制。而在过表达E2F5后,PC3和LnCap细胞增殖又明显回升,可逆转miR-613的调节作用。双荧光素酶报告实验结果表明,miR-613能够直接靶向E2F53′-UTR。结论miR-613能够通过下调E2F5转录因子的表达而抑制前列腺癌细胞增殖。

基于Oncomine和TCGA数据库分析E2F5在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的:通过数据挖掘分析E2F5在前列腺癌(PCa)组织中的表达及临床意义。方法:基于GEPIA、Oncomine数据库分析E2F5在PCa中的差异性表达及其与预后的关系。高通量基因芯片筛选敲低E2F5差异表达的基因并应用Western blot验证。结果:E2F5 mRNA在PCa组织中表达明显高于正常前列腺组织(P<0.001)。LinkedOmics数据库分析显示E2F5 mRNA在不同T分期(P<0.001)和N分期(P<0.05)中存在差异性表达。在Oncomine数据库中Taylor Prostate 3芯片数据中,Gleason评分≤3+4患者PCa组织中E2F5 mRNA表达水平显著低于Gleason≥4+3的患者(P<0.05);T 2期患者PCa组织中E2F5 mRNA表达水平显著低于T 3+T 4期的患者(P<0.05);未复发患者PCa组织中E2F5 mRNA表达水平显著低于复发的患者(P<0.01)。基因芯片结果显示:敲低E2F5表达水平后,310个基因显著上调,228个基因显著下调。KEGG富集分析结果表明,下调E2F5后主要影响p53、细胞周期、Wnt等信号通路。Western blot证实下调E2F5后CDK6和CDC25A蛋白表达水平下降。结论:在PCa中E2F5的表达与患者的Gleason评分、T分期、N分期及复发与否有一定的相关性。E2F5通过调控周期相关的基因促进PCa的进展。

大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)逆转录病毒周期蛋白(OrfA)相互作用蛋白的酵母双杂交筛选

大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤(WDS)在秋季发生春季萎缩的季节性生长特点与大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助基因的表达有关.其中辅助基因orfA的表达产物OrfA蛋白可能是1个潜在的肿瘤相关因子,OrfA与细胞周期蛋白cyclin A和cyclin D同源,也被称为逆转录病毒周期蛋白(retroviral-cyclin).为了深入研究OrfA的作用和功能,我们构建了诱饵表达载体pGBKT7-orfA,采用酵母双杂交技术,从HeLa cDNA文库中筛选与其相互的蛋白因子.通过2轮高强度压力的筛选、β-半乳糖苷酶活性验证、回转验证以及测序分析,最终获得了1个与OrfA相互作用的转录因子E2F5.OrfA C端78个氨基酸的多肽或者缺失C端78个氨基酸的OrfA突变体均不能在酵母双杂交系统中与E2F5相互作用.这些发现为进一步研究OrfA在肿瘤萎缩中的功能奠定了基础.

一种自制的RNA分离试剂及其在鱼组织总RNA提取中的应用

【目的】尝试自制一种价格低廉的RNA分离试剂,并检验其应用效果。【方法】以商业化的TRizolReagent为对照,使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA,采用分光光度计法、变性琼脂糖凝胶电泳法和RT-PCR检测其品质,并用提取的总RNA合成草鱼皮肤cDNA。同时使用自制RNA分离试剂提取斑马鱼总RNA,通过RT-PCR进行E2F5基因全长(1 092bp)的克隆,构建其真核和酵母表达载体并测序。【结果】使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA的品质与用TRizol Reagent提取的总RNA品质相当,用之成功地合成了草鱼皮肤cDNA。使用自制RNA分离试剂提取得到了更高品质的斑马鱼总RNA,用之成功地克隆了斑马鱼E2F5基因,构建了其真核表达载体pcDNA3.1-flag-Zf E2F5和酵母表达载体pGAD GH-Zf E2F5。【结论】自制RNA分离试剂能够用于鱼类组织总RNA的提取,提取的总RNA能满足后续cDNA合成及RT-PCR克隆特定基因的需要。

两系杂交稻短光敏核不育材料E5—2育性稳定性研究初报

经过连续5年的周年育性观测及单株选择，对短光敏核不育株系E5－2的育性稳定性进行了系统的研究。结果表明：短光敏核不育株系E5－2育性主要受光照长短变化控制，受温度变化影响小，其育性对光温的反应表现为长日照诱导下可育，短日照诱导下不育，临界光长为13．0h以上。

2-甲基-5-(E)-(邻甲氧基苯亚甲基)环戊酮Mannich碱类化合物的合成及其抗炎活性

目的设计合成 2 甲基 5 (E) (邻甲氧基苯亚甲基 )环戊酮曼尼希碱类化合物 ,并对其抗炎活性进行初步评价。方法以N 环戊烯基吗啉、邻甲氧基苯甲醛及多种胺类为原料 ,经多步反应合成目标化合物 ,并以二甲苯致小鼠耳肿胀模型测试目标化合物的抗炎活性。结果共合成 8个新化合物 ,经IR ,1H NMR和MS确证其结构。其中两个化合物的抗炎活性与阿司匹林相当。结论羰基α位被烷基取代的环戊酮曼尼希碱仍具有较强的抗炎作用。

miR-23a通过调节PPP2R5E促进人舌鳞癌细胞的增殖

目的: 探讨miR-23a在人舌鳞癌细胞增殖中的作用机制。 方法: 收集舌鳞癌的临床组织标本,并培养舌鳞癌细胞系Tca8113和CAL27。实时定量PCR检测miR-23a和PPP2R5E舌鳞癌组织中的表达。过表达或封闭miR-23a后,应用MTT、平板集落形成实验和生长曲线实验检测miR-23a和PPP2R5E对舌鳞癌细胞增殖的影响。荧光素酶报告实验验证miR-23a对PPP2R5E的调控关系。 结果: miR-23a在舌鳞癌组织中的表达明显上调(P<0.01),而且可以促进舌鳞癌细胞增殖。生物信息学预测和荧光素报告实验显示PPP2R5E是miR-23a的直接靶基因。PPP2R5E在舌鳞癌组织中表达降低,且抑制舌鳞癌细胞增殖。PPP2R5E过表达可以逆转miR-23a对舌鳞癌细胞的促进增殖作用。 结论: miR-23a可以通过PPP2R5E促进舌鳞癌细胞的增殖,在舌鳞癌的发生发展中发挥致癌基因功能。

E2F5和MYC癌基因在前列腺癌中的表达及其意义

目的：检测染色体8q21～24区域E2F5和M删苗基因在前列腺癌（prostatecancer，PCa）细胞系、癌组织及癌旁组织中的表达，分析其表达水平与临床病理参数的关系，并探讨其意义。方法：采用DNA qPCR检测PCa细胞系Dul45、LNCap、PC3和Pca组织标本中E2F5和MyC基因DNA拷贝数，Westernblot和免疫组织化学技术检测前列腺癌和癌旁组织中E2F5和MYC蛋白的表达，结合患者临床病理参数进一步验证和分析蛋白表达及其临床意义。结果：DNAqPCR结果显示，PCa组织中E2F5和MYCDNA拷贝数较癌旁组织明显增加（P〈0．05或P〈0．01），但在癌细胞系中其表达与对照组比较无明显变化（P〉0．05）。Westernblot显示，在PCa组织中E2F5和MYC蛋白表达水平显著高于癌旁组织（尸〈0．05或P〈0.01）。免疫组化染色发现，与癌旁良性组织相比，E2F5和MYC蛋白表达显著增加（P均〈0．01）。而且，E2F5的过表达与高的Gleason评分（P〈0．01）、临床分期（P〈0．01）、阳性转移（P〈0．01）、生化复发阳性（P〈0．01）相关。MYC的过表达与阳性转移（P=0．02）、生化复发阳性（P=0．02）相关。且PCa组织中E2F5和MYC蛋白表达两者呈正相关关系（rs=0．5，P〈0．01）。结论：E2F5和MYC的表达增加可能与PCa的发生发展密切相关，E2F5可能是Pca新的潜在候选分子标志物。

5-甲氧基-2-{(E)-[(3-甲基吡啶-2-基)亚氨基]甲基}苯酚的合成与表征

研究2-羟基-4-甲氧基苯甲醛与2-氨基-3-甲基吡啶缩合反应合成新型席夫碱衍生物5-甲氧基-2-{(E)-[(3-甲基吡啶-2-基)亚氨基]甲基}苯酚的方法。实验结果表明:当2-羟基-4-甲氧基苯甲醛与2-氨基-3-甲基吡啶摩尔比为1:1,反应时间为6 h,反应温度为75℃时,反应产率最高。用IR、1H NMR、元素分析和X射线单晶衍射法对产物结构表征,表明:目标化合物属单斜晶系,空间群为P21/n,晶胞参数β=96.54o,a=4.64(7),b=28.23(4),c=9.46(14),Dc=1.30×103kg/m3,Z=4,V=1 230(3)3,μ=0.09 mm-1,R1=0.10,w R2=0.18。

Isodihydroauroglaucin诱导的细胞凋亡可能与其诱导DNA损伤有关

目的对化合物2-(3E,5E-庚二烯基)-3,6-二羟基-5-(3-甲基-2-丁烯基)苯甲醛(isodihydroau-roglaucin)的抗癌活性进行研究。方法利用细胞毒实验测定isodihydroauroglaucin对人宫颈癌细胞(HeLa)的生长抑制作用;通过DNA含量分析和Annexin V-FITC/PI双染实验检测isodihydroauro-glaucin诱导的HeLa细胞死亡;利用单细胞凝胶电泳方法检测isodihydroauroglaucin对DNA的损伤作用。结果 Isodihydroauroglaucin对HeLa细胞的生长具有抑制作用,其IC50值为170μmol.L-1;DNA含量分析和Annexin V-FITC/PI双染实验表明isodihydroauroglaucin诱导HeLa细胞凋亡;isodi-hydroauroglaucin对DNA有损伤作用。结论 Isodihydroauroglaucin可能通过诱导DNA损伤诱导He-La细胞凋亡。

基于miR-138-5p/E2F3信号通路探讨柠檬苦素对人非小细胞肺癌H1299细胞生物学行为的影响

目的:基于微小RNA-138-5p(miR-138-5p)/E2F转录因子3(E2F3)信号通路探讨柠檬苦素对人非小细胞肺癌H1299细胞生物学行为的影响。方法:设H1299细胞组、氟尿嘧啶组(25μg·ml-1)、柠檬苦素低、高剂量组(40,80μg·ml-1),以上各组每孔设6个平行样,培养72 h。培养结束后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力,结晶紫染色测定单克隆形成数目,Transwell小室测定细胞侵袭迁移水平,流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Westernblot)法测定细胞miR-138-5p、E2F3 mRNA及蛋白水平。结果:与H1299细胞组比较,氟尿嘧啶组、柠檬苦素低、高剂量组光密度(OD)值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达水平显著降低,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与氟尿嘧啶组比较,柠檬苦素低剂量组OD值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达水平显著升高,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著降低(P<0.05);柠檬苦素高剂量组OD值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达显著降低,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著升高(P<0.05)。柠檬苦素高、低剂量组间各指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论:柠檬苦素能抑制人非小细胞肺癌H1299细胞增殖、侵袭迁移,促进非小细胞肺癌H1299细胞凋亡;其机制可能与柠檬苦素通过促进H1299细胞miR-138-5p表达,抑制E2F3 mRNA和蛋白表达,进而抑制miR-138-5p/E2F3通路的激活有关。

5-甲氧基-2-[(E)-(6-甲基吡啶-2-亚氨基)甲基]苯酚的合成与表征

研究了以2-羟基-4-甲氧基苯甲醛和2-氨基-6-甲基吡啶为原料合成新型席夫碱化合物5-甲氧基-2-[(E)-(6-甲基吡啶-2-亚氨基)甲基]苯酚的方法。当2-羟基-4-甲氧基苯甲醛与2-氨基-6-甲基吡啶摩尔比为1∶1.6,反应时间为6 h,反应温度为75℃时,反应产率最高。采用元素分析、UV-Vis、IR、1H NMR、X-射线单晶衍射等方法进行结构表征。该化合物为单斜晶系,空间群P21/c,a=1.1886(3)nm,b=0.65948(16)nm,c=1.6897(4)nm,β=108.505(3)°,V=1.2560(5)nm3,Dc=1.281 g·cm-3,Z=4,F(000)=512,μ=0.087 mm-1,R1=0.0477,wR2=0.1342。通过π···π堆积和分子内氢键O2-H2···N1、C8-H8A···N2形成较稳定的晶体结构,并具有蓝色荧光。

5-甲氧基-2-[(E)-(吡啶-3-亚氨基)甲基]苯酚的微波固相合成与表征

研究了以2-羟基-4-甲氧基苯甲醛和3-氨基吡啶为原料,微波固相反应合成新型席夫碱衍生物——标题化合物的方法。当2-羟基-4-甲氧基苯甲醛与3-氨基吡啶物质的量比为1.5∶1、反应时间为8 min、微波功率为920 W时,反应产率可达94%以上。用IR、1HNMR、元素分析和X-射线单晶衍射法表征了产物结构。该化合物属正交晶系,空间群为P212121,a=3.940(2),b=10.506(5),c=26.811(14),Dc=1.366 Mg/m3,Z=4,V=1 109.8(10)3,μ=0.094mm-1,R1=0.066 5,wR2=0.106 9。