6'-羟基爵床素A诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其机制

目的探讨6＇-羟基爵床素A（JR6）对人肝癌Hep G2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法体外培养人肝癌Hep G2细胞,采用MTT法观察不同浓度的JR6和5-氟尿嘧啶（5-FU）对Hep G2细胞存活的作用,荧光显微镜观察Hoechst33258染色后细胞核形态改变,用流式细胞仪检测AnnexinⅤ-FITC/PI双染后Hep G2细胞的凋亡率,JC-1荧光染色观察药物对细胞线粒体膜电位的影响,Western蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白细胞色素c、Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果 JR6 6.1~196μmol·L-1和5-FU 3.4~192μmol·L-1分别作用Hep G2细胞48 h,对Hep G2细胞存活具有抑制作用,IC50分别为74.90和49.75μmol·L-1。JR6 12.3,49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,细胞凋亡率明显增加,由正常对照组的（6.9±2.0）%增加至（13.8±2.0）%,（18.6±4.3）%和（32.4±3.2）%（P〈0.05,P〈0.01）。Hoechst33258染色结果显示,JR6 49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,部分细胞出现细胞核固缩和染色质凝集等凋亡变化。线粒体膜电位检测结果发现,JR6 49和196μmol·L-1作用48 h能使Hep G2细胞线粒体膜电位水平明显降低（P〈0.05,P〈0.01）。线粒体凋亡相关蛋白的检测结果表明,JR6 12.3,49和196μmol·L-1作用Hep G2细胞48 h,胞浆细胞色素c表达增加,促凋亡蛋白Bax表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,且Bax/Bcl-2比值增加（P〈0.05,P〈0.01）。JR6 49μmol·L-1和5-FU组上述蛋白表达无明显差异。结论 JR6可能通过促进细胞色素c释放、打破Bcl-2/Bax平衡诱导Hep G2细胞凋亡。

爵床化学成分、药理作用与临床应用的研究进展及其质量标志物预测分析

爵床主要含有木脂素、黄酮、生物碱等类型的化学成分,临床上常用于辅助治疗疟疾、热病、肺热咳嗽、毒蛇咬伤等疾病。现代药理研究表明其具有抗血小板聚集、镇痛、抗肿瘤和抗炎等多种药理作用。本综述对爵床的本草考证进行了更具体的归纳,并结合国内外研究对爵床的化学成分、药理作用以及临床应用进行了总结,基于“五原则”及网络药理学、传统药性对爵床的质量标志物(Q-Marker)进行预测分析。初步预测6′-羟基爵床脂定A、6'-羟基爵床脂定B、6'-羟基爵床脂定C、爵床脂定B、金不换甲醚、山奈酚等成分可作为爵床的Q-Marker,以期为更好地开发和利用爵床属植物资源提供借鉴。

LC-MS/MS法测定裸鼠肝脏中6'-羟基爵床定A的浓度

目的建立测定裸鼠肝组织中6'-羟基爵床定A浓度的LC-MS/MS法,并用于裸鼠的组织分布研究。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱;流动相为水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱,流速0.5 ml.min-1,柱温为室温。采用ESI源,以多反应监测方式分别监测离子对m/z 410.8→136.9(6'-羟基爵床定A)和m/z 386.1→122.0(内标丁螺环酮)。肝组织匀浆后采用蛋白沉淀法进行预处理。结果 6'-羟基爵床定A在裸鼠肝组织中的线性范围为1.0～2000ng.ml-1,日内精密度RSD小于8.61%;日间精密度RSD小于8.15%,回收率在89.3%～98.3%范围内。结论该方法简单、灵敏、准确,适用于裸鼠肝组织中6'-羟基爵床定A的浓度测定及其组织分布研究。

基于HPLC-QAMS法对清热通淋丸中7种成分的质量控制研究

目的建立高效液相一测多评法(HPLC-QAMS)同时测定清热通淋丸中三叶豆紫檀苷、苦参醇I、苦参酮、槐属二氢黄酮G、6′-羟基爵床脂素B、6′-羟基爵床脂素A和爵床脂素B的含量。方法采用高效液相色谱法,以Agilent Zorbax SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃。以苦参酮为内参物,建立其他6个成分的相对校正因子,计算含量。结果三叶豆紫檀苷、苦参醇Ⅰ、苦参酮、槐属二氢黄酮G、6′-羟基爵床脂素B、6′-羟基爵床脂素A和爵床脂素B的质量浓度分别在0.91~22.75μg/ml(r=0.999 5)、1.89~47.25μg/ml (r=0.999 3)、5.67~141.75μg/ml (r=0.999 7)、1.29~32.25μg/ml (r=0.999 5)、1.48~37.00μg/ml (r=0.999 6)、2.56~64.00μg/ml (r=0.999 4)、4.09~102.25μg/ml (r=0.999 8)范围内线性关系良好,平均加样回收率(RSD)分别为97.99%(1.42%)、98.44%(0.85%)、99.47%(0.92%)、96.98%(1.21%)、99.50%(0.74%)、100.00%(1.04%)和98.39%(1.32%),建立的高效液相一测多评法用于测定清热通淋丸中7种指标性成分的含量,一测多评法所得结果与外标法无明显差异。结论所建立的HPLC-QAMS法结果准确,可用于清热通淋丸的质量控制。

苗药妇肤康喷雾剂的HPLC指纹图谱研究

目的:建立苗药妇肤康喷雾剂的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法:色谱柱为Thermo Hypersil GOLD C18,流动相为乙腈-0.2%冰醋酸(梯度洗脱),检测波长为262 nm,流速为0.6 m L/min,柱温为25℃,进样量为10μL。以6′-羟基-爵床定B为参照,绘制10批样品的HPLC图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004 A版),对10批样品进行相似度评价,确定10批样品的共有峰。采用建立的方法测定10批样品中6′-羟基-爵床定B和爵床定B的含量。结果:10批样品的HPLC指纹图谱有12个共有峰,相似度均大于0.90,其HPLC指纹图谱与对照指纹图谱具有较好的一致性。10批样品中6′-羟基-爵床定B和爵床定B含量分别为1.64~5.84、0.83~2.78 mg/100 m L。结论:建立的方法操作简便,结果准确可靠,可为妇肤康喷雾剂的质量评价提供参考。

HPLC同时测定爵床药材中6′-羟基-爵床定B和6′-羟基-爵床定A的含量

目的:建立爵床药材中6′-羟基-爵床定B和6′-羟基-爵床定A2个活性成分的HPLC含量测定方法。方法:采用RAINBOW Micsphere-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈-水(40∶60),流速:1.0mL.min-1,检测波长256nm,柱温30℃。结果:6′-羟基-爵床定B和6′-羟基-爵床定A的线性范围分别为2.2～22.0μg·mL-1(r=0.9996)和1.7～17.0μg·mL-1(r=0.9999);平均回收率(n=3)分别为98.1%(RSD=2.5%)和99.4%(RSD=1.8%)。结论:本方法稳定,重现性好,操作简单,可用于爵床药材的质量控制。

RP-HPLC法同时测定爵床药材中6'-羟基-爵床定B、新爵床脂定B和TaiwanE的含量

目的:建立爵床药材中6'-羟基-爵床定B、新爵床脂定B和Taiwan E 3个活性成分的HPLC含量测定方法。方法:采用Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱(0～9 min,40%乙腈;9～10 min,40%→45%乙腈;10～40 min,45%乙腈),流速0.8 mL·min-1,检测波长256 nm,柱温30℃。结果:6'-羟基-爵床定B、新爵床脂定B和Tai-wan E的线性范围分别为0.023～0.454μg(r=0.9999)、0.022～0.446μg(r=0.9999)和0.024～0.478μg(r=0.9998);平均回收率分别为101.7%(RSD=1.6%)、95.7%(RSD=0.30%)和99.4%(RSD=1.7%)。结论:本方法可用于爵床药材的质量控制。