3,6ʹ-二芥子酰基蔗糖神经保护作用研究

目的:研究远志中寡糖酯类成分3,6ʹ-二芥子酰基蔗糖(DISS)对神经的保护作用。方法:将不同浓度的DISS与APP-SH-SY5Y细胞共同孵育24 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞的存活率,免疫荧光法检测细胞内活性氧(ROS)水平,生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,ELISA法检测细胞内和培养液中β-淀粉样蛋白(Aβ)含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞内淀粉样前体蛋白(APP)、微管相关蛋白轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)和LC3-Ⅱ的表达。结果:DISS可以提高APP-SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.05),减少细胞内ROS的生成(P<0.01),提高SOD和GSH-Px活力(P<0.05),降低细胞内和培养液中的Aβ含量(P<0.01,P<0.05),明显升高细胞内LC3Ⅱ蛋白表达水平,升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平(P<0.05),对APP表达无明显影响。结论:DISS可能通过降低细胞内氧化应激,减少细胞Aβ表达及调节自噬发挥神经保护作用。

远志中远志酮Ⅲ和3,6′-二芥子酰基蔗糖含量测定方法的改进

目的:改进《中国药典》2020年版所载远志中远志(口山)酮Ⅲ和3,6′-二芥子酰基蔗糖的含量测定方法,解决远志(口山)酮Ⅲ中包含杂质成分且无法完全分离及甲醇和70%甲醇对远志(口山)酮Ⅲ和3,6′-二芥子酰基蔗糖响应值差异大的问题。方法:对照品溶液和供试品溶液的制备均以甲醇作为溶剂,供试品溶液采用超声提取,采用UHPLC方法,以乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~5 min,10%A→14%A;5~12 min,14%A→17%A;12~17 min,17%A→19%A;17~22 min,19%A→21%A;22~30 min,100%A);柱温30℃,体积流量0.3 mL·min^(-1),检测波长320 nm,进样量3μL。结果:采用70%甲醇制备的远志(口山)酮Ⅲ和3,6′-二芥子酰基蔗糖对照品溶液的峰面积分别比采用甲醇制备的相同浓度对照品溶液的峰面积高38.9%和34.5%;采用药典方法测得的远志(口山)酮Ⅲ中实际包含了杂质成分远志(口山)酮Ⅺ,而采用UHPLC梯度洗脱方法可以将远志(口山)酮Ⅲ中包含的杂质成分远志(口山)酮Ⅺ完全分开。结论:改进方法解决了远志(口山)酮Ⅲ中包含杂质成分远志(口山)酮XI且无法完全分离及甲醇和70%甲醇对远志(口山)酮Ⅲ和3,6′-二芥子酰基蔗糖响应值差异大的问题,可以更准确地反映远志中这2个指标成分的真实含量。

远志3,6′-二芥子酰基蔗糖在药物诱发抑郁模型上的药效评价

目的在药物诱发抑郁模型上观察3,6′-二芥子酰基蔗糖(3,′6-d isinapoyl sucrose,DISS)的抗抑郁作用及可能的作用机制。方法采用小鼠5-羟色胺酸(5-hydroxytryptophan,5-HTP)增强实验,小鼠育亨宾(yohimb ine,YOH)毒性增强实验,小鼠阿朴吗啡(apomorph ine,APO)诱导体温下降实验探讨DISS的抗抑郁作用及可能的作用环节,用小鼠自主活动监测仪记录小鼠自发活动行为。结果在小鼠5-HTP增强实验模型上,给予DISS,对5-HTP诱导的小鼠甩头行为具有显著增强作用。在小鼠YOH毒性增强实验模型上,DISS可增强YOH毒性作用。在小鼠APO诱导体温下降实验模型上,ig给予DISS有显著性的拮抗体温降低的作用。结论DISS在药理学抑郁模型有显著的抗抑郁活性。并且其抗抑郁活性与增强5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素能(NE)神经功能均有关。DISS在抗抑郁有效剂量范围内无中枢兴奋或抑制性作用。

不同产地远志中远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷A含量测定

目的:建立同时测定山西、甘肃等不同省区产远志中远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷A 3种成分含量的HPLC测定方法。方法:超声提取,ODS-C18色谱柱,柱温35℃,流动相为0.05%磷酸乙腈溶液(A)-0.05%磷酸水溶液(B),梯度洗脱;检测波长315 nm。结果:远志中3种成分在30 min内良好分离,其它成分在65 min内基本分离。3种成分在0.002~1.0μg质量范围内线性关系良好、平均加样回收率95.3%~109.0%。结论:不同产地中远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷A含量范围分别为1.01~7.47、2.44~5.63、2.13~7.19 mg·g^(-1)。方法操作简便,结果准确,可用于远志药材3种成分含量测定。

3,6'-二芥子酰基蔗糖抗抑郁作用及对新生大鼠海马神经前体细胞增殖的影响

目的探讨远志活性成分3,6'-二芥子酰基蔗糖(DISS)的抗抑郁作用及对新生大鼠海马神经前体细胞增殖的影响。方法通过小鼠悬尾和强迫游泳试验来考察DISS抗抑郁作用;体外分离培养新生大鼠海马神经前体细胞,同时给予DISS,用四甲基噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,观察DISS对神经细胞增殖的影响,并初步探讨其抗抑郁的作用机制。结果DISS不同剂量(5,10,20mg/kg)给药后,能明显缩短小鼠在悬尾和强迫游泳试验中的不动时间,并且随着剂量的增大抗抑郁作用逐渐降低;DISS不同质量浓度(0.4,10,50μg/mL)对所培养具神经前体细胞特性的细胞有促进增殖的作用。结论DISS具有较好的抗抑郁作用,该作用可能是通过调控神经干细胞的增殖、促进功能性神经再生和保护作用实现的。

HPLC法测定萸苁强肾胶囊中远志[口山]酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖和马钱苷

目的采用高效液相色谱法定量测定萸苁强肾胶囊中远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖和马钱苷。方法萸苁强肾胶囊用75%甲醇作为溶剂超声提取。Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);体积流量1.0 mL/min;远志酮Ⅲ和3,6'-二芥子酰基蔗糖的测定以乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)为流动相,检测波长330 nm;马钱苷的测定以四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)为流动相,检测波长234 nm。结果远志酮Ⅲ和3,6'-二芥子酰基蔗糖分别在0.027 7～0.554 0μg(r=0.999 7)、0.065 1～1.302 0μg(r=0.999 9)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.81%、99.20%,RSD(n=6)分别为0.46%、0.94%;马钱苷在0.060 8～1.216μg进样量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 3),平均加样回收率为99.08%,RSD为1.19%(n=6)。结论该方法测定结果准确、灵敏、重复性好。

高速逆流色谱分离纯化远志中3,6′-二芥子酰基蔗糖酯和远志蔗糖酯A

目的研究制备型高速逆流色谱从远志中分离纯化3,6′-二芥子酰基蔗糖酯和远志蔗糖酯A。方法采用分析型高速逆流色谱摸索制备型高速逆流色谱的分离条件。根据化合物的光谱数据,鉴定结构。结果选择乙酸乙酯-正丁醇-水(4:1:5,v/v/v)为制备型高速逆流色谱分离的溶剂系统,从400mg远志样品中得到3,6′-二芥子酰基蔗糖酯和远志蔗糖酯A分别为24.6mg和45.2mg,HPLC检测纯度分别为93%和95%。结论本法简单快速,为远志及同属植物中糖酯类化合物的制备提供了一种新的分离方法 。

远志毛状根诱导及其3,6’-二芥子酰基蔗糖酯测定

目的从远志诱导出毛状根,并检测其寡糖酯类成分的产生。方法应用发根农杆菌A4、R1600和R1000菌株分别感染远志外植体,采用高效液相色谱(HPLC)法检测诱导出的毛状根中3,6’-二芥子酰基蔗糖酯的含量。结果 3种发根农杆菌均能诱导远志外植体产生毛状根,且毛状根中都检测到3,6’-二芥子酰基蔗糖酯,A4菌株诱导远志下胚轴产生的毛状根的3,6’-二芥子酰基蔗糖酯含量高于R1600和R1000菌株(F=5 066.792,P<0.05)。结论用远志毛状根培养物生产寡糖酯类成分是一条值得探索的新途径。

3,6'-二芥子酰基蔗糖对卒中后抑郁星型胶质细胞的影响

目的 建立脑卒中后抑郁(PSD)大鼠模型,探讨3,6'-二芥子酰基蔗糖(3,6-disinapoyl?sucrose)对PSD大鼠行为学改变和星型胶质细胞(AS)功能的影响.方法 通过大鼠中动脉栓塞制备大鼠卒中模型,在此基础上利用孤养联合束缚应激处理,制备PSD模型,将PSD模型大鼠随机分为PSD+盐水组(PSD+NS组)、PSD+远志组(PSD+YZ组)、PSD+氟西汀组(PSD+FLX组),治疗后观察大鼠糖水偏好程度变化,采用免疫组织化学方法标记大鼠顶叶星型胶质细胞,用图像分析软件分析胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)平均光密度值(MOD).结果?PSD大鼠给药3周后,PSD+NS组较干预组大鼠糖水偏好程度显著下降(P<0.05),且PSD+YZ组大鼠糖水偏好程度显著上升(P<0.001).PSD+NS组GFAP的MOD较PSD+YZ组明显降低(P<0.05),PSD+YZ组GFAP的MOD与PSD+FLX组相当(P>0.05).结论 大鼠中动脉栓塞结合孤养束缚可为卒中后抑郁实验研究提供较理想的动物模型.3,6'-二芥子酰基蔗糖可能通过上调GFAP的表达,改善星型胶质细胞功能,发挥抗抑郁的作用.

水中2,4,6-三芳基-3-芳酰基-4-羟基环己基-1,1-二甲腈的洁净合成

研究了十六烷基三乙基溴化铵(HTEAB)催化、水介质中,查尔酮和丙二腈加热回流合成系列2,4,6-三芳基-3-芳酰基-4-羟基环己基-1,1-二甲腈化合物.产物经1HNMR,IR和元素分析进行了结构表征.此方法具有反应条件温和、操作简便、产率较高、环境友好的优点.

三氯蔗糖中间体6,1’,6’-三氧三苯甲基-五乙酰基蔗糖(TRISPA)的RP-HPLC分析

建立了三氯蔗糖合成过程中的中间体6,1’,6’-三氧三苯甲基-五乙酰基蔗糖(TRISPA)的RP-HPLC检测方法:采用Waters XTerraTMRP185μm,3.9×150mm色谱柱;以乙腈:水(84:16)作流动相;流速0.6ml/min;检测波长为234nm;TRISPA在0.05～0.8mg/ml范围内线性良好,检测限为5ng(S/N=3);平均回收率为99.2%;方法相对标准偏差为0.34%。该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,取得了很好的效果。

三氯蔗糖-6-乙酸酯脱乙酰基制三氯蔗糖的工艺研究

研究了三氯蔗糖-6-乙酸酯（TGS-6-A）醇解为三氯蔗糖的工艺。重结晶的三氯蔗糖-6-乙酸酯于CH3ONa／CH3OH体系中醇解，用H^＋型阳离子交换树脂中和，蒸去甲醇、乙酸甲酯等，在水相中用活性炭脱色，水溶液经浓缩，在38℃以上结晶数小时，分离得三氯蔗糖。用乙酸乙酯和水对三氯蔗糖进行重结晶，可得质量分数在98％以上的三氯蔗糖产品。对产物三氯蔗糖，经熔点测定、元素分析、IR及^1H NMR确认了结构。三氯蔗糖-6-乙酸酯醇解为三氯蔗糖的收率为65％～70％。该方法为工业化生产三氯蔗糖提供了一个可行的方法。

1-烷基-6-氟-1,4-二氢-7-(4-酰基-1-哌嗪基)-4-氧代喹啉-3-羧酸类似物的合成及其抗菌活性

目的设计合成具有广谱抗菌活性的含氟喹诺酮类化合物。方法利用吡酮酸 7位哌嗪基 4位氮上存在的活性氢为反应修饰基点 ,与磺酰氯 ,酰氯 ,氯甲酸酯进行Schotten Baumann酰基化反应设计合成一系列含有磺酰基、酰基和烷氧羰基类氟喹诺酮类似物。结果合成了 2 0个含有磺酰基、酰基和烷氧羰基的氟喹诺酮类似物 ,利用元素分析、核磁共振进行了结构确认。结论合成了16个未见报道的新化合物 ,初步体外活性测试结果表明 ,其中的 4个化合物有较高的生物活性。

七(2,3-二-O-乙酰基-6-O-叔丁基二甲基硅烷基)-β-环糊精毛细管色谱柱的研制及色谱性能

合成了七(2,3-二-O-乙酰基-6-O-叔丁基二甲基硅烷基)-β-环糊精,并采用静态法成功地将其涂渍到弹性石英毛细管柱上。研究了其气相色谱分离性能,发现此固定相涂渍性好,柱效较高,热稳定性好,对卤代芳烃异构体以及难分离的二取代苯的位置异构体具有良好的分离能力。

1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌抑制卵巢癌细胞SKOV3侵润转移的研究

目的:研究化合物1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌抑制卵巢癌细胞SKOV3侵润转移作用。方法:利用细胞划痕实验、MTT法、明胶酶谱实验等方法,研究1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌对SKOV3细胞侵润、黏附和迁移能力的影响。结果:1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌具有抑制SKOV3细胞运动迁移能力和抑制SKOV3细胞的黏附能力;无细胞毒作用浓度的1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌处理SKOV3细胞后,基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性均有一定程度的降低。结论:1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌具有抑制SKOV3细胞侵润、黏附和迁移能力。

6-甲基-4-(4-甲氧酰基苯基)-5-甲氧羰基-3,4-二氢嘧啶-2-酮的合成及与牛血清白蛋白的相互作用

合成并表征了6-甲基-4-(4-甲氧酰基苯基)-5-甲氧羰基-3,4-二氢嘧啶-2-酮,利用荧光光谱法和紫外光谱法研究了该化合物与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。结果表明,化合物对BSA内源荧光的猝灭为静态猝灭;化合物与BSA的结合常数(Ka)和结合位点数(n)在298 K时分别是7.043 7×102L/mol和0.970 3,化合物与BSA以接近1∶1(物质的量比)的比例生成基态复合物;热力学数据表明化合物与BSA主要以疏水作用力相结合(ΔH>0,ΔS>0,ΔG<0);结合距离(r)为3.49 nm,表明化合物与BSA分子之间发生了非辐射能量转移。

6-(4-苯磺酰基-3-甲基-2-丁烯)-基-2,3-二甲氧基-5-甲基氢醌双苄醚的合成

以异戊二烯为原料,经与苯磺酰氯加成、水解乙酰化、皂化3步反应,制得末端羟基取代的异戊二烯短侧链——(E)-1-苯磺酰基-2-甲基-4-羟基-2-丁烯(简称产物A),并用乙酸乙酯-乙醚混合溶剂对产物A进行提纯精制。以还原型辅酶Q0(氢醌)为母环,杂多酸为催化剂,与产物A进行偶联反应,然后采用溴化苄对母环羟基进行保护,用乙醚-异丙醚的混合溶剂进行提纯精制,选择性结晶得到了侧链延长法合成辅酶Q10的关键中间体辅酶Q1前体,即6-(4-苯磺酰基-3-甲基-2-丁烯)-基-2,3-二甲氧基-5-甲基氢醌双苄醚(简称产物B)。探讨了各主要影响因素对合成反应过程及结果的影响,目标产物B收率达75%(以产物A为基准)。产物A与目标产物B经测熔点、1H NMR分析和FTIR分析鉴定,确证其为(E)-异构体。

双氯乙酰基二苯并-18-冠-6的合成

以多聚磷酸 ( PPA)为催化剂和反应溶剂 ,氯乙酸为酰化剂 ,对二苯并 - 1 8-冠 - 6进行酰化 ,成功地合成了双氯乙酰取代二苯并 - 1 8-冠 - 6.产物由 IR、MS和元素分析鉴定了其结构 .

2,6-二乙酰基吡啶的合成

以2,6-吡啶二甲酸为原料,经酯化后以金属钠作为新型碱性试剂,通过克莱森缩合制备出标题化合物,两步反应收率分别高达93.7%和76.7%。与传统的碱性试剂乙醇钠相比,产率得到了较大提高,并且实验操作大大简化。