高效液相色谱法测定尿中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松的含量

目的 :建立测定尿液中氢化可的松和 6 β 羟基氢化可的松含量的方法。 方法 :尿样 9mL以 5mL醋酸乙酯 乙醚 (4∶1)提取后 ,有机相以氮气吹干 ,以甲醇溶解后进样 ,检测波长为 2 4 0nm。结果 :6 β 羟基氢化可的松和氢化可的松标准曲线方程分别为Y =0 .0 33X - 0 .0 0 7,r =0 .9989和Y =0 .0 6 7X +0 .0 0 2 ,r =0 .9996 ;两者的回收率分别为 98.5 6 %和 99.4 5 % ;RSD分别为 4 .4 7%和 3.85 %。 10例健康志愿者的定时尿中 6 β 羟基氢化可的松和氢化可的松的含量分别为 (194 .1± 6 6 .8) μg·L-1和 (2 4 .0± 9.4 ) μg·L-1。两者之间的比值为 (8.5± 2 .9)。结论 :本法灵敏可靠 ,符合人体尿样中 6 β

LC-MS/MS法同时测定人尿液中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松的浓度

目的建立同时测定人尿液样本中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松浓度的LC-MS/MS方法。方法分别以d4-氢化可的松和d4-6β-羟基氢化可的松为内标,尿液样本加入含内标的甲醇处理后分析。色谱柱为Waters CORTECS C18+柱(2.1 mm×50 mm,2.7μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.6 mL·min^-1。质谱条件采用电喷雾正离子源,扫描方式为多重反应监测,用于定量分析的检测离子分别为m/z 363.2→121.1(氢化可的松)、m/z 367.2→121.1(d4-氢化可的松)、m/z 379.2→325.2(6β-羟基氢化可的松)、m/z 383.2→328.2(d4-6β-羟基氢化可的松)。结果氢化可的松及6β-羟基氢化可的松在1.00~300 ng·mL^-1和5.00~1500 ng·mL^-1内线性良好,定量下限分别为1.00 ng·mL^-1和5.00 ng·mL^-1,批内和批间精密度均<15%,准确度在-6.9%~5.7%范围内,基质效应为95.6%~106.0%,提取回收率为97.2%~108.3%。尿液样本室温放置10 h、反复冻融3次及-80℃冰冻4个月稳定性良好,待测溶液进样器放置24 h稳定。结论该研究建立的分析方法灵敏、准确,样本前处理简便、快捷,可用于人尿液样本中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松浓度的测定,为人体CYP3A4活性的评价提供可靠的检测方法。

高效液相梯度洗脱法测定尿液中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的含量

目的:用HPLC法(梯度洗脱)测定尿液中6β-羟基氢化可的松(6β-OHC)和氢化可的松(HC)的含量,计算6β-OHC和HC的比值以反映人体中CYP3A酶的活性,为其研究提供有效的分析手段。方法:采用YMC-PACK-ODS-A色谱柱(250 mm×4．6 mm,5 0μm),流动相为乙腈-0．1％硫酸铵水溶液梯度洗脱,流速:1 ml·min-1,紫外检测波长:240 nm。结果:尿液中6β-OHC在20-800 ng·ml-1浓度范围内(r=0．998 6),HC在10-480 ng·ml-1浓度范围内(r=0．999 9)线性关系良好,6β- OHC和HC的加样回收率分别为(99．8±3．6)％和(101．8±2．9)％,63名正常儿童的尿液中6β-OHC和HC的平均浓度分别为(109．94±57．13)ng·ml-1和(18．87±12．89)ng·ml-1,其比值为8．02±5．28。结论:本法操作简便、快速,准确度较高,适合人体尿样中糖皮质激素含量测定。

6-羟基己酸甲酯高效催化加氢制备1,6-己二醇的工艺研究

在釜式反应器内进行6-羟基己酸甲酯加氢制备1,6-己二醇的工艺研究,考察了反应温度、反应压力、催化剂质量分数和反应时间等因素对催化加氢过程的影响,并采用气相色谱仪分析监测6-羟基己酸甲酯催化加氢制备1,6-己二醇的反应进程,得到最优工艺条件:温度为200℃、压力为7 MPa、催化剂质量分数为8%、反应时间为6 h。进一步采用核磁共振氢谱和红外光谱等分析手段对产品进行结构确认,结果表明,6-羟基己酸甲酯的转化率达99%,1,6-己二醇选择性最高可达86%。

美拉德反应中间体2,3-二氢-3,5-二羟基-6-甲基-4(H)吡喃-4-酮的研究进展

2,3-二氢-3,5-二羟基-6-甲基-4(H)吡喃-4-酮(2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl-4H-pyran-4-one,DDMP),是美拉德反应关键中间体之一,在美拉德反应产物调控中起到重要作用。DDMP属于烯醇酮类化合物,广泛存在于天然尤其是热加工食品,具有抗氧化、抗菌、心脏保护等作用。当前,随着对食品安全、风味和活性功能关注度的不断提升,学者对DDMP进行了广泛而深入的研究。该文基于近年来相关文献,对DDMP的存在、形成及降解、生物活性及感官特性等方面的研究进展进行全面系统的总结,旨在为DDMP在食品、医药、香料领域的基础和应用研究提供参考。

6-羟基染料木素及其甲基化衍生物的合成和抗氧化与抗缺氧活性

目的:缺氧是一种常见的病理现象,通常由机体组织供氧不足或无法有效利用氧导致。羟基化及甲氧基化黄酮类化合物具有显著的抗缺氧活性。本研究旨在探索6-羟基染料木素(6-hydroxygenistein,6-OHG)及其甲基化衍生物的合成方法和抗氧化与抗缺氧活性。方法:以鹰嘴豆芽素A为原料,经甲基化反应、溴化反应、甲氧基化反应及去甲基化反应得到6-OHG及其4个甲基化衍生物[4’,6,7-三甲氧基-5-羟基异黄酮(化合物3)、4’,5,6,7-四甲氧基异黄酮(化合物4)、4’,6-二甲氧基-5,7-二羟基异黄酮(化合物6)、4’-甲氧基-5,6,7-三羟基异黄酮(化合物7)]。采用氢-1核磁共振波谱法(1H-nuclear magnetic resonance spectroscopy,1H-NMR)和质谱法(mass spectrometry,MS)表征产物结构;高压液相色谱法检测化合物的纯度;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除实验检测化合物的体外抗氧化活性。将PC12细胞分为正常组、缺氧模型组、芦丁组(1×10-9~1×10^(-5)mol/L),以及常氧和缺氧条件下的目标化合物组(1×10-9~1×10^(-5)mol/L),采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,筛选得到抗缺氧活性优异的目标化合物及其最佳抗缺氧活性时的药物浓度。分别用抗缺氧活性优异的目标化合物、芦丁的最佳药物浓度处理PC12细胞后,在光镜下观察细胞形态,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的蛋白质表达水平。结果:6-OHG及其4个甲基化衍生物的结构无误,纯度均>97%。当浓度为4 mmol/L时,化合物7和6-OHG的DPPH自由基清除率分别为81.16%和86.94%,均高于阳性对照芦丁,而化合物3、4、6的清除率均低于20%。与正常组相比,缺氧模型组的细胞活力显著下降(P<0.01);与缺氧模型组相比,化合物3、4、6对缺氧条件下的细胞活力无显著影响;在所有实验浓度下,6-OHG组的细胞活力均显著高于缺氧模型组(均P<0.05);在给药浓度为1×10^(-7)或1×10^(-6)mol/L时,化合物7组的细胞活力显著高于缺氧模型组(均P<0.05)。6-OHG和化合物7的抗缺氧活性优异,最佳药物浓度分别为1×10^(-6)和1×10^(-7)mol/L。采用6-OHG(1×10^(-6)mol/L)和化合物7(1×10^(-7)mol/L)处理PC12细胞后,与缺氧模型组相比,细胞损伤明显减轻,细胞凋亡率显著下降(P<0.01),HIF-1α和VEGF蛋白质的表达水平显著下调(均P<0.01)。结论:优化后的合成路线可提高6-OHG的产率,通过甲基化和选择性去甲基化得到4个衍生物。6-OHG和其衍生物化合物7表现出优异的体外抗氧化和抗缺氧活性,该活性与其分子中存在的A环邻三酚羟基结构有关。

RP-HPLC法测定健康者尿液中6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的含量

目的建立RP-HPLC法同时检测人尿样中内源性氢化可的松及其代谢产物6β-羟基氢化可的松的含量。方法采用岛津Insertil ODS-3反相色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行梯度洗脱,柱温为30℃,流动相为水-乙腈,检测波长240nm。尿样用液-液萃取法处理,萃取剂为乙酸乙酯。结果 6β-羟基氢化可的松和氢化可的松标准曲线分别为y=0.004 l x-0.119 2,r=0.999 0;y=0.0127x-0.050 5,r=0.997 8,两者回收率均>95%,日内、日间RSD均<5%。20名健康志愿者尿中6β-羟基氢化可的松与氢化可的松质量浓度分别为(151.90±94.05)和(26.38±20.07)μg·L^(-1),比值为6.32±2.36。结论本方法专属性强、灵敏度高、简单可靠,适用于大样本分析。

综合型有机化学实验:6-氨基-1,2,3,4-四氢-1-萘酮的双甲基化

针对目前有机化学基础实验陈旧、缺乏系统性等问题,强化实验教学“两性一度”的探索,设计了6-氨基-1,2,3,4-四氢-1-萘酮的双甲基化创新综合有机化学实验。在碱性条件下,以碘甲烷作为甲基化试剂进行取代反应生成二甲基取代产物,并利用核磁共振氢谱(^(1)H NMR)、核磁共振碳谱(^(13)C NMR)、高效液相色谱对产物进行结构表征。包含文献检索、实验设计、实验操作、样品表征和数据分析等学习内容,可以使得学生在理论知识和实践操作两个方面能力有所提升,进而提高学生的综合素质。

双水相体系中甾类化合物6-甲基氢化可的松的生物转化研究

双水相体系作为一种新型生物反应体系,与其他反应体系相比,双水相体系具有生物相容性高、反应条件温和以及实现生物反应-产物分离耦合等优点.利用简单节杆菌Arthrobacter simplex UR016在PEG/Dextran双水相体系中对6-甲基氢化可的松进行Δ^1脱氢制备6-甲基泼尼松龙,对双水相体系的组成进行了选择和优化,研究得到的最佳转化体系组成和配比为16%PEG20000/4%Dextran40000.在构建的此双水相转化体系中最适6-甲基氢化可的松底物加入量为4.5 g/L,转化48 h,6-甲基氢化可的松的转化率可达到95.72%,较水相脱氢转化率提高了25%～30%.

鼠脑组织中6-羟基-1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉及其相关生物胺的高效液相色谱-电化学检测

建立了大鼠脑组织中6-羟基-1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉（6-OH-MTHβC）、5-羟色胺（5-HT）和5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）含量的高效液相色谱-库仑阵列电化学检测（HPLC-ECD）方法。采用的色谱柱为Discovery（HS F5柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为缓冲液（40mmol/L柠檬酸＋20mmol/L磷酸氢二钠＋0.3mmol/L乙二胺四乙酸二钠,pH4.0）-甲醇（体积比为78∶22）混合液,流速为1mL/min。6-OH-MTHβC、5-HT、5-HIAA在1.0~500.0μg/L范围内线性关系良好（r〉0.999 2）,检出限分别为0.56,0.26,0.53μg/L,日内和日间精密度（以相对标准偏差表示）均低于6.1%,回收率分别为87.1%~98.2%,87.0%~95.3%,90.1%~97.7%。用该方法检测新生7d的SD胎鼠脑内6-OH-MTHβC及5-HT、5-HIAA的含量,发现SD胎鼠在急性酒精中毒8h后6-OH-MTHβC显著上升（P〈0.05）;而5-HT和5-HIAA的含量有所下降,但无显著性差异。该法简便、稳定、灵敏度高,适用于测定鼠脑组织中6-OH-MTHβC和5-HT,5-HIAA含量的相关研究。

H_3PW_6Mo_6O_(40)/SiO_2催化合成5-乙氧羰基-4-(4-羟基苯基)-6-甲基-3,4-二氢嘧啶-2(1H)-酮

以催化剂H3PW6Mo6O40/SiO2合成5-乙氧羰基-4-(4-羟基苯基)-6-甲基-3,4-二氢嘧啶-2(1H)-酮,探讨了反应时间、反应温度、催化剂用量和对羟基苯甲醛、乙酰乙酸乙酯,尿素的物质的量化对产品回收率的影响.实验表明:H3PW6Mo6O40/SiO2是合成目标产物的良好催化剂.在反应时间为75min,反应温度为90℃,催化剂的用量占反应物料总质量的1.0%,n1(对羟基苯甲醛)∶n2(乙酰乙酸乙酯)∶n3(尿素)为1∶1.2∶1.5的优化条件下,产品收率可达到89.7%.通过熔点,IR和MS等测试手段对合成的3,4-二氢嘧啶酮化合物进行了表征.

2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇对内毒素诱导巨噬细胞活化的影响

目的检测2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇对细菌内毒素诱导的巨噬细胞RAW264.7释放TNF-α、IL-6及TNF-αmRNA表达的影响。方法 RAW264.7细胞经不同浓度(0、10、20、40、80、160 mg/L)2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇预处理后,ELISA法分别检测LPS(100μg/L)刺激的RAW264.7细胞释放TNF-α和IL-6的水平,Real-Time PCR法检测TNF-αmRNA的表达水平。MTT法检测2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇对RAW264.7细胞活力的影响,以排除实验用量2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇的细胞毒性作用。结果不同浓度的2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇预处理后,可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞释放TNF-α和IL-6,显著抑制TNF-αmRNA的表达,并都具有量效关系。MTT实验结果显示,低于320 mg/L浓度的2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇对RAW264.7细胞无明显的毒性作用。结论 2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇能够拮抗LPS对炎症反应细胞的刺激效应,有望成为脓毒症防治药物的候选药物前体。

H_6P_2W_(18)O_(62)/SiO_2催化合成5-乙氧羰基-4-(4-羟基苯基)-6-甲基-3,4-二氢嘧啶-2(1H)-酮

采用H6P2W18O62/SiO2为催化剂,以对羟基苯甲醛、乙酰乙酸乙酯、尿素为原料合成5-乙氧羰基-4-(4-羟基苯基)-6-甲基-3,4-二氢嘧啶-2(1H)-酮.探讨H6P2W18O62/SiO2对本反应的催化活性,较系统地研究了反应物物质的量比、催化剂用量、反应时间、反应温度四因素对产物收率的影响.实验表明:H6P2W18O62/SiO2是合成5-乙氧羰基-4-(4-羟基苯基)-6-甲基-3,4-二氢嘧啶-2(1H)-酮的良好催化剂;在n(对羟基苯甲醛)∶n(乙酰乙酸乙酯)∶n(尿素)=1∶1.5∶1.5,催化剂的用量占反应物料总质量的1.5%,反应温度为80℃,反应时间为60 min的最佳条件下,其收率可达94.4%.

简单节杆菌催化6α-甲基醋酸可的松C_(1,2)脱氢动力学

研究了简单节杆菌催化6α-甲基醋酸可的松C1,2脱氢转化生成6α-甲基醋酸强的松的动力学。分别考察了菌体质量浓度、底物质量浓度及添加不同质量浓度的产物对脱氢反应过程的影响。结果表明,随着菌体质量浓度的增加,脱氢反应速率随之加快。较高质量浓度的底物及不同质量浓度的产物均会对脱氢反应产生抑制作用。建立了该脱氢反应的动力学模型,经线性化回归拟合出该反应的动力学参数。

Pt/C活性催化剂催化氢化合成6-氯-2-羟基喹喔啉

以对氯邻硝基乙酰乙酰苯胺为原料 ,在碱性条件下经环合及催化氢化合成 6 氯 2 羟基喹喔啉。采用自制的Pt/C催化剂 ,考察了反应条件对产品收率的影响 ,在 85℃ ,1 0～ 1 3MPa氢气压力下进行加氢还原反应 ,总收率 89 6 % (以对氯邻硝基乙酰乙酰苯胺转化为 6 氯 2 羟基喹喔啉 )。

6-(2,4-二羟基苯基偶氮)-2,3-二氢-1,4-酞嗪二酮化学发光性能的研究

报道了化学发光试剂6 (2,4 二羟基苯基偶氮) 2,3 二氢 1,4 酞嗪二酮的合成。研究了试剂的物理化学性质和化学发光性能。结果表明,试剂的酸离解常数pk1=4.96,pk2=11.64。在强碱性介质中,试剂产生化学发光,最大发光波长在450nm。金属离子以Co2+、Mn2+、Fe3+、Cr3+对试剂 KOH H2O2体系有较强的催化作用。

氢化可的松治疗肺炎支原体引起的小儿大叶性肺炎短期的临床疗效及对血清PCT、IL-6和CRP水平的影响

目的:探讨氢化可的松对肺炎支原体引起的大叶性肺炎患儿体内降钙素原(PCT)、白细胞介素6(IL-6)和血清C反应蛋白(CRP)水平的影响。方法:2016年6月-2018年6月收治肺炎支原体引起的大叶性肺炎患儿95例,随机分为两组。对照组患儿采用基础药物,试验组患儿在此基础上使用氢化可的松,对比治疗前后两组患儿PCT、IL-6和CRP水平的变化情况。结果:两组患儿通过分组治疗后,其PCT、IL-6和CRP水平显著低于治疗前,同时试验组患儿PCT、IL-6、CRP水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:氢化可的松能够有效降低支原体大叶性肺炎患儿体内的PCT、IL-6和CRP水平,对患儿的治疗有着较好的效果,值得在临床上进一步应用及推广。

超声萃取-同位素稀释液相色谱-质谱法检测血清中氢化可的松

建立了液相色谱-质谱检测血清中氢化可的松含量的方法。血清加内标后平衡30 min,加乙腈除蛋白,将混合液超声10 min,再以3000 r/min离心15 min,取出上清液用氮气吹干,用水复溶后,以相同体积乙酸乙酯萃取两次,将两次萃取的乙酸乙酯合并,氮气吹干,然后用200μL流动相复溶,液相分离采用ZorbaxEclipse Plus C18色谱柱,流动相为甲醇和含0.1%甲酸的水溶液(43∶57,V/V),日间和日内标准偏差分别为0.3%～0.7%和0.3%～0.6%,回收率为99.6%～101.0%,定量限为1.68μg/kg。运用本方法检测了3种人体血清中氢化可的松含量,并研究了血清中氢化可的松的稳定性。

β-环糊精包合技术在微生物转化生产氢化可的松中的应用

为提高甾体生物转化的底物投料浓度,采用超声法制备底物RS-β-环糊精包合物。以新月弯孢霉为实验菌种,培养后加入溶有包合物的磷酸盐缓冲液制备氢化可的松。结果表明,采用β-环糊精包合后甾体底物浓度可由2g/L提高至3g/L,2L发酵罐中氢化可的松收率为57.8%。

不同剂量氢化可的松对早期脓毒性休克大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

目的观察不同剂量氢化可的松(HC)对早期脓毒性休克大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的影响。方法分2次注射灭活大肠杆菌O111:B4,建立早期脓毒性休克大鼠模型。1.观察不同剂量HC对早期脓毒性休克的作用。模型鼠随机分为休克组、大剂量组(HD组:HC 150 mg/kg)、中剂量组(MD组:HC 20 mg/kg)、小剂量组(LD组:6 mg/kg),并设对照组。监测皮质醇、促肾上腺皮质激素(ACTH)水平,肾上腺、垂体、脑组织病理及糖皮质激素受体(GR)表达。2.观察HPA轴分泌节律性。模型及对照组大鼠各24只。以昼夜24 h为周期,每2h测定各组2只大鼠的皮质醇、ACTH。实验结果采用双因素方差分析。结果对照组ACTH及皮质醇分泌均有24h周期节律性变化。休克实验模型节律性消失。休克组皮质醇水平明显高于对照组(P<0.05)。应用不同剂量HC后,3组皮质醇水平均显著升高,其升高程度与给药量不成比例。3组ACTH水平均较休克组显著升高(Pa<0.05),组间差异无统计学意义。脓毒性休克早期脑组织病理改变较对照组明显(P<0.05),但肾上腺、垂体未见明显病理结构改变。应用HC后,MD、LD组病理损伤评分均降低,以LD组降低最明显,差异显著(P<0.05)。HD组脑组织病理改变与休克组间无明显差异。休克组GR表达显著低于对照组(P<0.05)。MD、LD组GR表达均较休克组有所升高,但仅LD组差异显著(P<0.05),HD组与休克组无明显差异。结论脓毒性休克早期,不需针对HPA轴的时间节律性使用HC;肾上腺及垂体超微结构无明显改变,支持肾上腺功能不全为功能性肾上腺功能不全。中小剂量对垂体、脑组织有一定保护作用。作为糖皮质激素发挥作用的主要结合物GR表达下调。应用HC干预,小剂量使GR表达上调最显著,可更有效的发挥皮质醇作用。