Al^(3+)和Cr^(6+)对菊芋多酚氧化酶同工酶的酶活影响

本文论述采用聚丙烯酰胺电泳法(PAGE),以T=7.5%,T=10%,T=13%,T=15%四种浓度不同的凝胶系统分离经Al^(3+)和Cr6+处理过的菊芋中的多酚氧化酶(PPO)同工酶进行的实验,用两种染色配方进行染色比较,并进行酶谱分析,得到的结果表明:(1)在T=10%凝胶系统中菊芋PPO同工酶分离效果最好,共有10条酶带;(2)在两种染色液配方中,配方一的染色效果较好;(3)经Al^(3+)处理过的菊芋中的多酚氧化酶(PPO)同工酶的酶活比没有处理过的菊芋中的多酚氧化酶(PPO)同工酶的酶活性低,说明Al^(3+)对菊芋中的多酚氧化酶(PPO)同工酶的活性有抑制作用;(4)经Cr^(6+)处理过的菊芋中的多酚氧化酶(PPO)同工酶的酶活与没有处理过的菊芋中的多酚氧化酶(PPO)同工酶的酶活相差不大,说明Cr^(6+)对菊芋中的多酚氧化酶(PPO)同工酶的活性抑制不明显。

微小RNA-488靶向6-磷酸果糖激酶-2／果糖双磷酸酶-2同工酶3基因对前列腺癌细胞增殖与糖酵解的影响

目的 探讨微小RNA（miRNA，miR）-488对前列腺癌细胞株增殖及糖酵解能力的影响及其机制。 方法 实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测miR-488在前列腺癌细胞株的表达。生物信息学、双荧光素酶实验验证miR-488的靶点，转染miR-488模拟物24 h后，以25 μg蛋白行Western blot、Real-time PCR检测6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3（PFKFB3）的表达。转染miR-488模拟物或同时转染过表达PFKFB3质粒24 h后，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测PC-3、DU145细胞增殖，通过糖摄取及乳酸分泌实验检测糖酵解能力。结果 与正常前列腺上皮细胞RWPE-1比较，miR-488在PC-3、DU145细胞中的表达水平分别为0.26±0.03（P＝0.031）、0.19±0.04（P＝0.021），而在22RV1、LNCaP细胞中的表达差异无统计学意义。上调miR-488表达后，PC-3、DU145细胞的糖摄取率分别为对照组的0.54±0.03（P＝0.042）、0.52±0.01（P＝0.032），乳酸分泌率分别为对照组的0.55±0.02（P＝0.037）、0.61±0.17（P＝0.048），提示糖酵解能力明显下降，细胞增殖能力明显降低。生物信息学及双荧光素酶实验均表明PFKFB3是miR-488的靶点，上调miR-488表达后，PFKFB3 mRNA及蛋白表达均明显降低。同时上调miR-488与PFKFB3表达后，细胞的糖摄取分别为0.79±0.12、0.82±0.11，乳酸分泌分别为对照组的0.77±0.07（P＝0.015）、0.83±0.04（P＝0.026），提示糖酵解能力升高。此外，细胞增殖能力也明显升高。结论 miR-488可通过下调靶蛋白PFKFB3的表达，从而调控前列腺癌细胞的增殖与糖酵解。

6-磷酸果糖激酶-2／果糖双磷酸酶-2同工酶3基因敲除小鼠模型的构建

目的建立6-磷酸果糖激酶-2／果糖双磷酸酶-2同工酶3（PFKFB3）基因敲除小鼠模型。方法利用类转录激活样效应因子核酸酶（TALEN）技术，通过构建针对PFKFB3基因的TALEN质粒，并将构建好的TALEN质粒在体外反转录为mRNA。利用原核显微注射分别将0．1μl转录后的浓度为50ng／山的mRNA注射到C57BL／6品系小鼠受精卵中，将受精卵回送到ICR代孕母鼠输卵管中，得到F0代基因敲除杂合子小鼠。将FU代饲养至10周龄后合笼，从而构建基因敲除纯合子小鼠。所有子代鼠出生1周后剪尾，提取RNA后反转录，PCR产物作为模板进行基因测序鉴定基因型。结果通过TALEN技术成功构建了f1D代基因敲除杂合子小鼠3只，基因测序结果表明分别于靶基因位置缺失了10、4、1对碱基对；因PFKFB3基因敲除纯合子具有胚胎致死性，6只F1代基因敲除小鼠的基因测序结果显示，针对靶基因，编号4、5的小鼠缺失了1对碱基对，6号小鼠缺失4对碱基对，7、8、9号小鼠缺失10对碱基对。结论成功构建了PFKFB3基因敲除杂合子（＋／-）小鼠．。

6-磷酸果糖激酶-2／果糖双磷酸酶-2同工酶3基因对前列腺癌细胞增殖的影响

目的观察6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3（PFKFB3）在前列腺癌组织中的表达及其对PC3和DU145前列腺癌细胞增殖的影响。方法采用免疫组织化学染色（抗体浓度1∶50）方法，观察PFKFB3基因在前列腺癌组织及癌旁组织中的表达。实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR，40个循环，188 bp）、Western blot法[30 μl，10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）]检测PFKFB3 mRNA和蛋白在前列腺癌细胞及前列腺上皮细胞中的表达。采用平板克隆形成实验（40 μmol/L H2O2）与细胞生长实验[20 μl噻唑蓝（MTT）]对比观察敲除PFKFB3基因前后前列腺癌细胞的生长。结果PFKFB3基因在前列腺癌组织中的表达（2.42±0.16）明显高于癌旁组织（1.38±0.10），差异有统计学意义（P＝0.031）；前列腺癌细胞中PFKFB3 mRNA和蛋白表达水平均高于前列腺上皮细胞，分别为2.0～2.6倍和2.5～4.5倍（P＝0.015）；敲除PFKFB3基因后，平板克隆形成实验结果显示细胞克隆形成率为敲除前的22%～35%（P＝0.018），细胞生长实验结果显示前列腺癌细胞的增殖在第4天受抑制，为对照组的28%～30%（P＝0.026）。结论PFKFB3基因在前列腺癌细胞和组织中高表达，PFKFB3基因对前列腺癌细胞的增殖有一定的促进作用。

非离子态NH_3和Hg^(2+)对草鱼免疫血清及前肾的LDH与G6PDH的影响

运用同工酶分析技术 ,发现 NH3 对草鱼的 LDH表达的影响主要为前肾 ,表现为 B基因表达较多或其酶活性变化 ;它同时也使 G6 PDH的条带减少 ;Hg2 + 对前肾 LDH的影响则主要表现为 L DH1与LDH2 ,而使 G6 PDH的酶带从 12条减少为血清的 8条和前肾的 9条 ,表明 NH3 和 Hg2 +

m^(6)A去甲基化酶ALKBH5对大鼠S1PR3基因3′-非编码区双荧光素酶活性的影响

[目的]明确m^(6)A去甲基化酶ALKBH5对含S1PR3基因3′-非编码区(3′-UTR)双荧光素酶报告基因的调控作用。[方法]以大鼠前额叶皮层脑区cDNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增S1PR3基因3′-UTR中含有m^(6)A修饰位点的目的片段。利用重叠延伸PCR方法将三个靶序列GGACT、GGACT、AGACT中的第三位A突变为C,并将野生型S1PR3-3′-UTR片段和突变型S1PR3-mut-3′-UTR片段分别正向插入到pmiR-RB-ReportTMvector载体中。将pcDNA3.1-ALKBH5或空载体pcDNA3.1与野生型和突变型双荧光素酶报告载体分别共转染PC12细胞,并检测荧光素酶活性。[结果]成功构建了包含S1PR3基因3′-UTR野生型双荧光素酶报告载体pmiR-S1PR3-3′-UTR和突变型双荧光素酶报告载体pmiR-S1PR3-mut-3′-UTR。荧光素酶活性分析表明与空载体pcDNA3.1组相比,ALKBH5可显著降低野生型及突变型C1和C2报告载体荧光素酶的活性(P<0.05),而对突变型C3没有影响(P>0.05)。[结论]初步证明S1PR3基因3′-UTR区是去甲基化酶ALKBH5的作用靶点,ALKBH5通过识别S1PR3基因3′-UTR区C3处的m^(6)A修饰位点而降低pmiR-S1PR3-3′-UTR荧光素酶的活性。

PFKFB3在肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(PFKFB3)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PFKFB3在42例HCC组织及其对应癌旁组织中的表达情况,并研究其与临床病理参数(性别、年龄、肿瘤直径、淋巴转移、静脉癌栓、治疗前甲胎蛋白、分化程度及肝内转移)间的关系,采用Kaplan-Meier法分析PFKFB3 mRNA表达对HCC患者生存的影响。结果 HCC和癌旁组织中PFKFB3 mRNA的阳性表达率分别为73.81%(31/42)和52.38%(22/42),相对表达量为1.075±0.171和0.877±0.451,HCC组织中PFKFB3mRNA的阳性表达率及相对表达量均高于癌旁组织(P<0.05);PFKFB3 mRNA的表达与肿瘤TNM分期、分化程度、肝内转移及总生存期有关(P<0.05)。结论 PFKFB3在HCC的发生发展中发挥作用,且影响肝癌的分化、转移并提示肝癌患者预后不佳;可作为评估HCC恶性程度的生物学指标。

PFKFB3在结直肠腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶同工酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatases 3 isozyme,PFKFB3)在结直肠腺癌中的表达及其意义。方法:选取31例结直肠腺癌患者手术切除的癌组织及其对应的癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测PFKFB3 mRNA表达,免疫组织化学法检测PFKFB3蛋白的表达,并探讨免疫组化阳性表达率与临床病理参数间的关系。结果:qRT-PCR结果显示,31例结直肠腺癌组织PFKFB3基因的相对表达量为1.93±1.73,明显高于其相对应的癌旁组织,差异有统计学意义(t=-2.985,P<0.01)。免疫组织化学结果显示,结直肠腺癌组织及其对应的癌旁组织PFKFB3阳性表达率分别为61.3%(19/31)和3.2%(1/31),差异有统计学意义(P<0.01)。PFKFB3的高表达与肿瘤直径、分化程度、侵袭、转移及治疗前癌胚抗原水平有关(均P<0.05)。结论:PFKFB3对结直肠腺癌具有潜在的临床诊断价值,且与肿瘤的恶性程度存在一定的相关关系。

PFKFB3促进糖尿病视网膜微血管损伤

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病的主要微血管并发症,其主要病理改变为视网膜微血管渗漏、血管新生等。6-磷酸果糖激酶-2/2,6双磷酸激酶同工酶3(PFKFB3)作为糖酵解的关键酶,在血管内皮细胞中高表达,当受到低氧、炎症刺激因子、生长因子等因素刺激时其表达上调并对血管内皮细胞的能量代谢发挥重要的调节作用。近期研究发现PFKFB3可通过促进糖酵解、加快细胞周期、抑制细胞凋亡等多种途径促进细胞的增殖,同时通过影响内皮细胞的伪足生成、亚型分化等过程促进细胞的迁移,在以上两个过程的作用下加速血管新生的进程,从而促进DR的发生发展。

炎性细胞因子在射频导管消融术治疗房颤大鼠中的表达及对心肌损伤的影响

目的:本研究旨在探讨炎性细胞因子在射频导管消融术治疗房颤大鼠中的表达及对心肌损伤的影响。方法:选择60只6周龄SPF级雄性SD大鼠,体重为180~200 g,随机将其分为空白组、模型组及射频导管消融术组各20只。其中空白组正常饲养1周;模型组及射频导管消融术组均建立房颤动物模型,空白组饲养1周后,经鼠尾注射50μg/100 g生理盐水;模型组造模成功后,将氯化钙(10 mg/ml)与乙酰胆碱(66μg/ml)混合后经鼠尾静脉注射;射频导管消融术组房颤造模方法与模型组相同,造模成功后3 d给予射频导管消融术,术后根据心肌肌钙蛋白T(CTnT)的水平超过0.08 ng/L则为心肌损伤组(7只),未超过则为未发生心肌损伤组(12只)。结果:模型组及射频导管消融术组造模后,40只大鼠中2只大鼠死亡,造模成功率为95.00%(38/40)。最终模型组19只大鼠、射频导管消融术组19只大鼠造模成功。空白组大鼠皮毛有光泽,饮食、水正常,呼吸均匀,活动灵敏;模型组大鼠毛色无光泽,眼睛充血,饮食、水减少,呼吸、心率加快,动作迟缓,乏力,目光呆滞;射频导管消融术组大鼠无明显食欲减退,心率、呼吸稍加快,眼睛充血,喜倦卧。模型组的房颤持续时间及房颤诱发时间均高于未发生心肌损伤组及心肌损伤组,心肌损伤组的房颤持续时间及房颤诱发时间均高于未发生心肌损伤组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。空白组大鼠心肌细胞正常,排列整齐、致密,细胞形态正常;模型组大鼠心肌细胞间质增多,间隙增大,排列紊乱,存在大量炎症浸润;未发生心肌损伤组大鼠心肌组织间质稍增多,排列尚整齐,不存在明显的炎症细胞浸润;心肌损伤组:大鼠心肌细胞间质明显增多,间隙稍增加,排列稍乱,存在炎症浸润。心肌损伤组的白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)均高于空白组、未发生心肌损伤组,模型组、未发生心肌损伤组的IL-1β、IL-6、TNF-α均高于空白组,模型组的IL-1β、IL-6、TNF-α均高于未发生心肌损伤组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。心肌损伤组的血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(iNOS)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)水平均高于空白组、未发生心肌损伤组,模型组、未发生心肌损伤组的CK-MB、NO、iNOS、Caspase-3水平均高于空白组,模型组的CK-MB、NO、iNOS、Caspase-3水平均高于未发生心肌损伤组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:IL-1β、IL-6、TNF-α在房颤心肌损伤大鼠中呈高表达,其机制为上述炎性细胞因子能够调节心肌细胞功能及心肌细胞凋亡。

PFKFB3在胶质瘤组织中的表达及其对H4细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨恶性胶质瘤组织中糖酵解限速酶6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)的表达水平及PFKFB3抑制剂PFK15对胶质瘤H4细胞增殖、迁移、克隆形成和体内成瘤的影响。方法:采集2015年2月1日至2016年1月31日安康市中医医院神经外科手术切除的31例恶性脑胶质瘤及相应瘤旁组织标本,应用免疫组化技术和Western blotting检测胶质瘤和瘤旁组织中PFKFB3的表达水平。用不同浓度的(1.25、2.5、5.0μmol/L)PFK15抑制胶质瘤H4细胞的PFKFB3表达,通过MTT法、EdU细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验、克隆形成实验和裸鼠体内成瘤实验分别观察PFK15对H4细胞增殖、迁移、侵袭、克隆形成和体内成瘤的影响。结果:PFKFB3在胶质瘤组织中阳性率显著高于瘤旁组织[(80.60±8.98)%vs(41.57±10.16)%,P<0.05]。MTT和EdU实验结果显示,PFK15可明显抑制H4的增殖活性(P<0.05),且抑制作用具有浓度依赖性。PFK15处理后的H4细胞迁移、侵袭和克隆形成能力明显低于对照组(均P<0.05)。注射PFK15的裸鼠H4细胞移植瘤体积明显小于对照组裸鼠[(254.15±154.25)vs(801.52±224.25)mm3,P<0.01]。结论:PFKFB3在恶性胶质瘤组织中高表达,下调PFKB3可显著抑制胶质瘤H4细胞的恶性生物学行为和体内成瘤,PFKFB3可作为恶性胶质瘤生物治疗潜在的分子靶点。

PFKFB3在胃癌中的表达及对胃癌细胞生长和凋亡的影响研究

背景与目的:6-磷酸果糖激酶-2同工酶3(6-phosphofructo-2-kinase 3,PFKFB3)与肿瘤的发生、发展密切相关,且对肿瘤细胞的生物学行为具有重要的调节作用。分析PFKFB3在胃癌组织及癌旁组织中的表达,并观察其对胃癌细胞生长和凋亡的作用及机制。方法:采用TCGA数据库分析72例在南昌大学第二附属医院及第三附属医院经外科手术切除的新鲜胃癌标本及其相应的癌旁组织中PFKFB3的表达,并分析PFKFB3的表达与胃癌预后的关系。进一步通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)及免疫组织化学法分析胃癌组织标本及癌旁组织标本中PFKFB3的表达。shNC及shPFKFB3质粒转染至胃癌细胞中,采用RTFQ-PCR和Western blot验证转染效率。分别通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、EdU实验、流式细胞术和Western blot分析PFKFB3下调后对胃癌细胞的增殖能力、细胞周期变化和细胞凋亡的影响。最后采用Western blot分析PFKFB3影响胃癌细胞生长的机制。结果:TCGA数据库分析显示,胃癌组织中PFKFB3的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),且PFKFB3高表达与胃癌患者较差的预后密切相关。另外,RTFQ-PCR、Western blot及免疫组织化学检测也同样证实PFKFB3在胃癌组织中高表达(P<0.01),且PFKFB3的表达升高与淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05)。沉默胃癌细胞中PFKFB3的表达后,其生长能力明显减弱(P<0.01),胃癌细胞凋亡比例增加(P<0.01),细胞周期G1期阻滞(P<0.01)。PFKFB3通过激活磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路而调控胃癌细胞的生长。结论:PFKFB3在胃癌组织中高表达,且与患者预后密切相关,沉默PFKFB3的表达后抑制胃癌细胞的生长并促进其凋亡,PFKFB3可能是胃癌靶向治疗的潜在生物标志物。

PFKFB3、S1P2在2型糖尿病大鼠视网膜中的表达及tBHQ的干预作用

目的研究6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase-3,PFKFB3)、1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine 1-phosphate receptor 2,S1P2)在2型糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜中的表达,并探讨叔丁基对苯二酚(tertiary butylhydroquinone,t BHQ)与PFKFB3、S1P2的关系。方法雄性Sprague Dawley大鼠60只,分为正常对照组(NC组)、DM组和t BHQ组。后两组诱导2型DM模型,其中t BHQ组于造模成功后7 d在高脂高糖饲料中添加10 g·L-1t BHQ进行干预,DM组大鼠继续使用高脂高糖饲料喂养。于t BHQ干预后4周和12周各组大鼠心脏采血,检测血清空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、空腹血清胰岛素(fasting serum insulin,FINs)含量。采用免疫组织化学法及实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法定量检测各组大鼠视网膜中PFKFB3、S1P2、VEGF蛋白及m RNA的分布和表达。采用TUNEL法检测各组大鼠视网膜神经节细胞的凋亡指数。结果三组大鼠在4周和12周的FPG、FINs总体比较差异均有统计学意义(均为P=0.000)。4周和12周时各组中均可见PFKFB3、S1P2、VEGF蛋白的阳性表达,且主要分布于视网膜神经节细胞层、内核层。免疫组织化学及q RT-PCR检测结果显示,各组大鼠在造模后不同时间点视网膜中PFKFB3、S1P2、VEGF蛋白及m RNA的相对表达量的总体比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。4周和12周时,DM组PFKFB3、S1P2、VEGF的表达较NC组增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);t BHQ组PFKFB3、S1P2、VEGF的表达较DM组降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与4周比较,12周时DM组PFKFB3、S1P2、VEGF的蛋白和m RNA表达均增加(均为P<0.05),t BHQ组S1P2蛋白和m RNA的表达较4周降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。TUNEL法检测结果显示,4周和12周时DM组凋亡指数均较NC组增多,t BHQ组均较DM组减少(均为P<0.05);与4周比较,12周时DM组凋亡指数增高,t BHQ组降低(均为P<0.05)。结论PFKFB3、S1P2及VEGF共同参与2型DM大鼠视网膜的病理过程,其可能是通过PFKFB3/VEGF/S1P2信号途径起作用,并可能与视网膜神经节细胞的凋亡相关;tBHQ对2型DM大鼠视网膜有一定的保护作用。

间尼索地平对人孕烷X受体介导的CYP450酶的转录调节作用

间尼索地平（m-nisoldipine,MNS）[化学名称：1,4-二氢-2,6-二甲基-4-（3-硝基苯基）-3,5-吡啶二羧酸甲酯异丁酯]是由河北医科大学药学院首次合成的一类新型二氢吡啶类药物,存在一个手性中心,可拆分为两个光学对映体（R,Sm-nisoldipine）^（[1]）。二氢吡啶类药物为钙通道拮抗剂,特异性高,在临床上广泛用于治疗高血压。

SOX6基因3'UTR区野生型和突变型重组质粒的构建与鉴定

目的:构建含单核苷酸多态性(SNP)位点rs1065024的SOX6基因3'UTR双荧光素酶报告基因载体,并用生物信息学软件预测与rs1065024位点区域相结合的mi RNA,为进一步研究此SNP位点的功能及mi RNA与SOX6基因3'UTR区之间的关系奠定基础。方法:提取人全血基因组DNA,以基因组DNA为模板,通过PCR扩增含SNP位点在内的SOX6基因3'UTR片段,经过胶回收纯化后,将回收的目的片段插入双荧光素酶报告基因载体p MIR-REPORT中,再经DH5a转化扩增,挑单克隆进行菌落PCR并进行质粒提取,对质粒进行双酶切鉴定,最后进行DNA测序鉴定。针对SNP进行定点突变,构建出野生型和突变型重组质粒,并用生物信息学软件预测出与SNP位点相结合的mi RNA。结果:经单菌落质粒测序验证显示带有T碱基的SOX6基因3'UTR重组质粒p MIR-REPORT-3'UTR-T构建成功;经定点突变,成功将p MIR-REPORT-3'UTR-T质粒转变为p MIR-REPORT-3'UTR-C,经比对未引入任何其他突变;生物信息学预测显示,rs1065024位点位于mi R-190b、mi R-190a-5p、mi R-451b、mi R-4791与SOX6基因3'UTR的结合区域,其多态的改变可以影响mi RNA与m RNA的结合效率。结论:本研究成功构建了含SNP位点rs1065024的p MIR-REPORT-SOX6-3'UTR野生型和突变型重组质粒,为今后SOX6基因3'UTR的SNP位点的功能及mi RNA与SOX6基因3'UTR区之间的关系研究奠定基础。

PFKFB3基因在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞糖酵解及生长的影响

目的探讨6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(PFKFB3)基因在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞糖酵解及生长的影响。方法收集我院病理科前列腺增生和前列腺癌蜡块组织,应用免疫组化技术检测PFKFB3的表达水平。通过荧光定量PCR和Western blot实验检测正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)和四种前列腺癌细胞系(PC3、LNCaP、DU145、C4-2)中PFKFB3的表达。应用RNA干扰技术敲低PFKFB3表达,采用细胞糖酵解试剂盒、CCK-8和克隆形成实验检测PFKFB3对前列腺癌细胞的糖酵解和增殖活性的影响。结果与前列腺增生组织相比,前列腺癌组织中的PFKFB3表达量明显增高[(59.7±0.25)vs(3.08±0.16),P<0.05],且病理Gleason评分越高,PFKFB3表达量也越高。同样PFKFB3在不同前列腺癌细胞系中均明显高表达。抑制PFKFB3基因表达后,前列腺癌细胞的糖酵解和增殖能力显著降低。结论PFKFB3基因在前列腺癌恶性进展中表达上调,促进肿瘤细胞的糖酵解和增殖,靶向PFKFB3可能为前列腺癌分子诊断和治疗提供潜在的应用价值。

血清ω-3多不饱和脂肪酸表达和新生儿高胆红素血症的相关性分析

目的探讨血清ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFAs)在新生儿高胆红素血症(NHB)中的水平及其与NHB的关系,为临床判定NHB提供一定参考依据。方法选取2016年4月—2020年1月台州市立医院诊治的82例NHB患儿进行研究(NHB组),并选取同期83例健康新生儿进行对照研究(对照组)。采用高效气相色谱法检测两组受试者血清ω-3PUFAs百分含量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组受试者血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、人肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)水平,采用新生儿行为神经评分(NBNA)评估两组新生儿神经功能,Pearson法分析NHB患儿血清ω-3PUFAs水平与NSE、CK-MB水平、NBNA评分的相关性,采用Logistic回归法分析NHB患儿的影响因素。结果NHB组胎膜早破、母子血型不合比例及排便时间>24 h患儿比例、血清NSE、CK-MB水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);男/女比例、出生体质量、胎龄、分娩方式与对照组差异无统计学意义(P>0.05);NHB组患儿血清ω-3PUFAs水平、NBNA评分均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NHB患儿血清ω-3PUFAs水平与NSE、CK-MB均呈负相关(P<0.05),与NBNA评分呈正相关(P<0.05)。胎膜早破、母子血型不合、NSE、CK-MB是影响NHB发生的危险因素(P<0.05),ω-3PUFAs、NBNA评分是影响NHB发生的保护因素(P<0.05)。结论ω-3PUFAs在NHB患儿血清中水平降低,可能与NSE、CK-MB、神经发育相互影响,协同影响NHB疾病发展,ω-3PUFAs水平有助于筛查NHB患儿。