噬菌体6肽随机表面表达文库的构建

体外合成编码６肽的随机ＤＮＡ片段以及用于随机ＤＮＡ片段扩增的一对ＰＣＲ引物，再经ＰＣＲ扩增、ＢｇｌＩ酶切扩增产物，获得编码６肽的随机ＤＮＡ克隆片段，并利用已构建的噬菌体表面表达载体（ＦＵＳＥ５）的特性，将随机ＤＮＡ克隆片段与ＦＵＳＥ５载体连接，连接物电转化ＭＣ１Ｏ６１宿主菌，经抗性和插入复活筛选，获得１．６ｘ１０８个独立克隆。构成文库的克隆经酶切、ＰＣＲ扩增、斑点杂交、序列测定、亲和素富集等方法的综合鉴定和评定，以及６肽随机克隆体外增殖和表达特性观察，结果均表明，我们已成功构建了编码６肽的噬菌体随机表面表达文库。对原库作不同批次连续扩增所获扩增库，又进一步证实，已构建的原库具备以质粒和丝状噬菌体二种形式在体外稳定增殖的特性。