黑地黄丸改善5/6肾切除大鼠肾衰竭模型微炎症状态的免疫调节机制研究

目的:通过黑地黄丸对5/6肾切除肾衰竭大鼠(CRF大鼠)的免疫器官胸腺、脾脏(指数)及血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、CRP水平的影响,探讨黑地黄丸改善CRF大鼠"微炎症状态"的免疫调节机制,并寻求最佳剂量。方法:将50只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,黑地黄丸高、中、低剂量组5组,除空白组外其他各组大鼠均行5/6肾切除术,建立CRF大鼠模型,连续给药12周后测定免疫器官胸腺、脾脏指数,采用ELISA法测定血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、CRP的含量。结果:黑地黄丸各剂量组均能明显升高CRF大鼠胸腺、脾脏指数,同时降低血清IL-1β、TNF-ɑ、IL-6、CRP的水平,升高IL-10水平,提示黑地黄丸对CRF大鼠胸腺和脾具保护作用,并可有效调节CRF大鼠细胞因子紊乱。结论:黑地黄丸对CRF大鼠"微炎症状态"改善机制与其调节大鼠的免疫功能密切相关,具体表现在保护CRF大鼠胸腺、脾脏,抑制炎性因子IL-1β、TNF-ɑ、IL-6的合成与分泌,下调CRP水平,上调IL-10水平等方面。且以黑地黄丸高剂量组效果最佳。

化瘀通络中药对5／6肾切除大鼠纤溶系统的影响

目的观察化瘀通络中药肾络通对5/6肾切除大鼠纤溶系统的影响。方法46只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、苯那普利组、肾络通组。复制5/6肾切除肾衰大鼠模型,采用免疫组织化学及原位杂交方法检测各组大鼠肾组织纤溶酶原激活物组织型(t-PA)、纤溶酶原激活物尿激酶型(u-PA)、纤溶酶原激活物的抑制物-1(PAI-1)及PAI-1mRNA的表达,并进行病理学检测。结果模型组t-PA、u-PA的相对含量及ILD值均显著低于假手术组(P<0.01),而PAI-1及PAI-1mRNA则显著高于假手术组(P<0.01);肾络通组、苯那普利组与模型组相比,t-PA、u-PA的相对含量及ILD值均明显升高(P<0.01或P<0.05),而PAI-1及PAI-1mRNA则明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论化瘀通络中药肾络通能纠正5/6肾切除大鼠纤溶系统的紊乱,延缓肾脏疾病的进程。

黑地黄丸对5/6肾切除大鼠肾衰模型血液流变学的影响

目的通过观察黑地黄丸对5/6肾切除大鼠肾衰模型血液流变学的影响,探讨该方对肾脏的保护机制。方法随机将70只Wistar大鼠分为空白组,模型组,尿毒清组、洛丁新组,黑地黄丸高、中、低剂量组7组,除空白组外其他各组大鼠行5/6肾切除术,建立肾衰大鼠模型,分别连续给药12周后测定全血高切黏度(HS)、全血低切黏度(LS)、血浆黏度(PV)、纤维蛋白原(FIB)、红细胞压积(PCV)、红细胞沉降率(ESR)。结果与尿毒清组和洛丁新组比较,黑地黄丸高剂量组大鼠HS(P<0.01)、LS(P<0.01)、PCV(P<0.01)明显升高,大鼠FIB(P<0.01)、ESR(P<0.05)明显降低。结论黑地黄丸高剂量组通过调节HS、LS、PVC水平,下调PV,抑制FIB合成,降低ESR含量,改善肾衰大鼠的血液流变学达到保护肾功能的作用。

肾衰方对5/6肾切除大鼠肾功能及肾组织干预作用

目的:通过实验研究深入探讨肾衰方延缓慢性肾功能不全进展的机制。方法:采用5/6肾切除建立慢性肾功能不全大鼠模型,随机分为4组:正常组、模型组、肾衰方组、科素亚组,用药3个月后观察肾功能、血白蛋白、钙、磷、肾小球面积测定、尿/血渗透压比值及肾脏组织病理的变化。结果:肾衰方能显著改善大鼠症状,降低血肌酐(P<0.01)、尿素氮(P<0.01),降低血磷(P<0.05),升高尿/血渗透压比值(P<0.05)。光镜下肾脏病理明显改善,肾小球增大面积减小。结论:肾衰方能明显改善肾功能,延缓慢性肾衰的发展。为该方的进一步深入研究和临床应用提供了科学的实验依据。

黑地黄丸改善5/6肾切除大鼠肾衰模型肾功能的研究

目的:通过观察黑地黄丸对5/6肾切除肾衰大鼠(CRF大鼠)的血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平的影响,探讨黑地黄丸对CRF大鼠肾功能的影响,并寻求最佳剂量。方法:将70只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,黑地黄丸高、中、低剂量组,尿毒清组,洛丁新组,共7组,除空白组外其他各组大鼠均行5/6肾切除术,建立CRF大鼠模型,连续给药12周后,采用酶偶联速率法测定血清尿素及采用碱性苦味酸法测定血清肌酐动脉含量。结果:与模型组比较,黑地黄丸高、中、低剂量组血清BUN、Scr显著降低(P<0.01)。与黑地黄丸低剂量组比较,黑地黄丸高剂量组、尿毒清组血清BUN降低(P<0.05);与黑地黄丸低剂量组比较,黑地黄丸高剂量组、尿毒清组血清Scr显著降低(P<0.01)。结论:黑地黄丸可以明显降低肾衰大鼠的血清BUN、Scr,从而改善肾功能,延缓CRF进程,其中尤以黑地黄丸高剂量组效果最佳。

黑地黄丸对5/6肾切除大鼠肾衰模型血清IL-8、IL-17含量的影响

目的:通过观察黑地黄丸对5/6肾切除大鼠血清IL-8、IL-17含量的影响,探讨其免疫调节机制。方法:将70只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,尿毒清组,洛丁新组,黑地黄丸高、中、低剂量组,除空白组外其他各组大鼠行5/6肾切除术,建立肾衰大鼠模型,采用ELISA法测定血清中IL-8、IL-17的含量。结果:与尿毒清组和洛丁新组比较,黑地黄丸高剂量组在调整肾衰大鼠血清IL-8和IL-17水平方面作用相当。结论:黑地黄丸能有效降低肾衰大鼠血清IL-8、IL-17含量,提示其免疫调节机制可能与抑制IL-8、IL-17等炎性因子的分泌与释放有关,尤以黑地黄丸高剂量组效果最佳。

洛汀新对5/6肾切除大鼠肾脏保护作用及对转化生长因子-β1表达的影响

肾间质纤维化是各种慢性肾脏病进展至终末期肾衰的共同病变过程,研究如何减缓其进展对保护肾功能具有重大的临床意义。5/6肾切除大鼠模型造模是研究肾小管间质损害的理想模型。血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）作为一种血管活性物质可引起肾脏血流动力学异常,

黑地黄丸对5/6肾切除大鼠肾衰模型血清ACTH COR TSH含量的影响

目的:通过观察黑地黄丸对5/6肾切大鼠肾衰模型血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(COR)、促甲状腺激素(TSH)含量的影响,进一步探讨其免疫调节机制。方法:随机将70只Wistar大鼠分为空白组,模型组,尿毒清组,洛丁新组,黑地黄丸高、中、低剂量组7组,除空白组外其他各组大鼠行5/6肾切除术,建立肾衰大鼠模型,分别连续给药12周后测定ACTH、COR、TSH的含量。结果:与尿毒清、洛丁新组比较,黑地黄丸高剂量组大鼠血清ACTH(P<0.05)、TSH(P<0.01)含量明显升高,且COR含量明显降低(P<0.05)。结论:黑地黄丸是调节肾衰大鼠免疫功能的有效方剂,其调节机制可能与上调大鼠血清ACTH、TSH含量,改善Cor分泌紊乱有关,且以高剂量组效果最好。

黑地黄丸改善5/6肾切除大鼠肾衰模型肾功能研究

目的:观察黑地黄丸对5/6肾切除大鼠肾衰(CRF大鼠)模型的血清尿素、肌酐水平的影响。方法:70只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,黑地黄丸高、中、低剂量组,尿毒清组,洛丁新组。除空白组外其他各组大鼠均行5/6肾切除术,建立CRF大鼠模型,连续给药12周后,采用酶偶联速率法测定血清尿素及采用碱性苦味酸法测定血清肌酐动脉含量。结果:与模型组比较,黑地黄丸高、中、低剂量组血清BUN、Scr降低显著(P<0.01)。与黑地黄丸低剂量组比较,黑地黄丸高剂量组、尿毒清组血清BUN降低(P<0.05)。与黑地黄丸低剂量组比较,黑地黄丸高剂量组、尿毒清组血清Scr降低显著(P<0.01)。结论:黑地黄丸可以明显降低肾衰大鼠的血清BUN、Scr,从而改善肾功能,延缓CRF进程,尤以黑地黄丸高剂量效果最佳。

反义α肌动蛋白基因腺病毒载体转染5/6肾切除大鼠抑制肾纤维化进展的研究

目的观察大鼠血管平滑肌α肌动蛋白基因反义腺病毒载体(pAdanti-α-SMA)转染5/6肾切除大鼠对其肾脏纤维化进程的影响。方法建立pAdanti-α-SMA转染5/6肾切除大鼠模型。实验分组,A组:正常对照;B组:5/6肾切除大鼠;C组:pAdanti-α-SMA转染的5/6肾切除大鼠。统计20周后存活率及血肌酐,行肾脏病理检查和肾脏损伤指数评分,行α-SMA、TGF-β1、PDGF-BB的免疫组化并用Tiger920图像分析仪做半定量分析。结果各组存活率为95.0%、58.8%、82.9%;各组平均血肌酐为:39.74、132.57、88.65;各组肾损伤总指数:0.79、16.91、1.43;各组α-SMA+细胞Tiger920图像分析仪结果:1.22、1.81、1.37。结论pAdanti-α-SMA转染可延缓大鼠肾脏纤维化进程。

三芪口服液对5/6肾切除大鼠血小板膜糖蛋白CD62P表达的影响

目的:观察三芪口服液对慢性肾衰竭大鼠血小板膜糖蛋白(CD62P)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、包醛氧淀粉组,及三芪口服液治疗高、中、低剂量组(TMH、TMM、TML组)。观察12周,检测大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血红细胞压积(HCT)、血小板计数(PLT)和CD62P的表达。结果:三芪口服液治疗后,与模型组比较能降低BUN、Scr值,下调CD62P,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:三芪口服液在一定程度上可下调CD62P的表达,这可能是其改善肾功能的机制之一。

益肾解毒汤对5/6肾切除大鼠肾组织中HIF-1α、CTGF和TGF-β_1表达的影响

目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、CTGF和TGF-β1在肾间质纤维化中的表达及作用,观察益肾解毒汤对其表达的影响。方法:用5/6肾切除大鼠制作肾间质纤维化模型,分假手术组,模型组,氯沙坦组和益肾解毒汤组。术后8周,常规HE染色观察肾脏组织病理变化,用Masson染色法检测胶原在肾脏的沉积;Western blot法检测HIF-1α、CTGF和TGF-β1在肾组织中的表达。结果:与假手术组比较,模型组肾组织中HIF-1α、CTGF和TGF-β1蛋白水平均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,益肾解毒汤组肾组织中HIF-1α、CTGF和TGF-β1蛋白水平均明显降低(P<0.01)。结论:HIF-1α通过调节CTGF和TGF-β1的表达,抑制细胞外基质降解而导致肾间质的纤维化,益肾解毒汤可通过减少HIF-1α蛋白水平来减轻肾间质纤维化。

通络保肾复方对5/6肾切除大鼠模型Ⅰ型胶原蛋白和VEGF的影响

目的研究通络保肾复方对5/6肾切除大鼠肾脏病理、肾组织Ⅰ型胶原蛋白和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、代文组、保肾康组、中药组5组,每组12只。除正常组外其余4组行5/6肾切除术。模型组大鼠予生理盐水灌胃,保肾康组、代文组、中药组分别给予保肾康、代文、通络保肾复方灌胃,于4周、6周时分别收集各组大鼠的12 h尿液,检测12 h尿蛋白定量。然后各组均于喂养6周时处死。观察大鼠肾脏病理学改变。用免疫组化和原位杂交检测大鼠肾组织Ⅰ型胶原蛋白和VEGF。结果肾脏病理示:中药组细胞增生明显轻于模型组,毛细血管开放较好,肾小管结构基本正常。代文、保肾康和中药组对降低12 h尿蛋白定量均有作用,但无差异。代文组及中药组的大鼠肾组织中Ⅰ型胶原蛋白表达比模型组明显下降(P<0.01)。代文组及中药组的大鼠肾组织中VEGF表达比模型组明显增加(P<0.01)。结论通络保肾复方可减轻大鼠肾组织中炎性细胞浸润和肾组织固有细胞增生,抑制大鼠肾组织Ⅰ型胶原蛋白和增加VEGF的表达,从而延缓肾纤维化进程和肾功能的恶化速度。

冬虫夏草对5／6肾切除大鼠肾脏TGF-β1的影响

目的观察冬虫夏草对肾小球硬化大鼠转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响，并探讨其作用机制。方法将36只正常Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和冬虫夏草组。模型组和冬虫夏草组行5／6肾切除术制备进行性肾小球硬化模型。冬虫夏草组每天给予冬虫夏草（2．5g·kg^-1·d^-1）水提液灌胃，模型组和正常对照组每天给予等量的自来水灌胃。末次术后4周各组分别处死大鼠6只，术后9周处死剩余6只。测定血生化指标和尿蛋白排泄量，检测大鼠肾组织中TGF-β1 mRNA、TGF-β1的表达。结果①模型组术后4周24h尿蛋白定量增高，血浆白蛋白降低，胆固醇与低密度脂蛋白增高，TGF-β1及其mRNA的表达均增高。与模型组相比，冬虫夏草组尿蛋白排泄减少，血胆固醇降低，低密度脂蛋白降低，TGF-β1 mRNA的表达明显减少，TGF-β1的表达减弱。②术后9周，模型组肾脏病变进一步加重，血肌酐升高。与之相比，冬虫夏草组尿蛋白排泄减少、血白蛋白增高；血胆固醇降低、低密度脂蛋白降低、血肌酐降低；TGF-β1 mRNA的表达明显减少、TGF-β1的表达减弱。结论随着大鼠肾小球硬化程度的加重，TGF-β1的表达增加；冬虫夏草干预治疗后，TGF-β1的表达明显下调，提示TGF-β1参与了肾小球硬化的进展，冬虫夏草可以延缓肾小球的硬化。

梓醇对5/6肾切除大鼠肾组织TGF-β1、CTGF表达的影响

目的:观察梓醇(catalpol)对肾衰大鼠肾组织TGF-β1、CTGF表达的影响。方法:将Wistar大鼠50只随机分为正常组,模型组,梓醇高、中、低剂量(100、50、10 mg/kg)组。除正常组外,其余各组大鼠均行5/6(ablation/infarction,A/I)肾切除法建立肾衰竭大鼠模型,从手术当日开始,梓醇各剂量组连续灌胃给药60 d。检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、超敏反应蛋白(hs-CRP)、血红蛋白(Hb)水平变化,ELISA法检测肾纤维化指标肾皮质转化生长因子(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的水平变化,HE染色观察大鼠肾脏病理变化,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、CTGF的表达。结果:模型组大鼠血清Cr、BUN、hs-CRP水平显著升高(P<0.01)、Hb水平明显降低(P<0.01);血TGF-β1、CTGF含量显著上升(P<0.01);肾组织TGF-β1、CTGF的表达量增多。比较模型组,梓醇高(P<0.01)、中(P<0.05)、低(P<0.05)剂量组大鼠血清Cr、BUN、hs-CRP、TGF-β1、CTGF水平降低,Hb水平升高,肾组织TGF-β1、CTGF的表达量减少,其中尤以梓醇高剂量组疗效最佳。结论:梓醇可有效阻断大鼠肾纤维化进程、改善微炎症反应,保护大鼠肾功能,其作用机制可能与通过下调TGF-β1、CTGF表达,抑制纤维细胞增殖,减少纤维组织增生、炎性浸润相关,且具剂量依赖性。

5／6肾切除大鼠残肾组织HIF-1α、nNOS蛋白表达及丹参多酚酸盐的作用机制

慢性氧缺失是促进慢性肾脏病进展和纤维化的重要原因。丹参多酚酸盐可显著改善肾功能，但其确切机制尚不明确。本研究通过构建5／6肾切除肾衰竭大鼠模型，从肾氧耗及细胞与分子水平等探讨丹参多酚酸盐改善肾功能、抗肾纤维化的作用机制。

5／6肾切除大鼠自体动静脉内瘘模型的建立

自体动静脉内瘘是维持性血液透析（MHD）最理想的血管通路，但由于内膜增生导致内瘘成熟失败和迟发丧失功能，严重影响了其远期疗效，因此，有关研究主要集中在抑制血管平滑肌细胞增殖。采用吻合法能在慢性肾衰竭动物建立自体动静脉内瘘模型，但吻合技术的熟练程度会影响结果。我们成功地在5／6肾切除大鼠采用套管法建立自体动静脉内瘘模型，报告如下。

肾切除5/6大鼠肾小管线粒体自由基与肾病理的相关性研究

研究表明 ,无论何种病因进入终末期肾病阶段时 ,肾组织都具有相同的病理变化 ,这说明不同肾病所致CRF的发展存在着共同的病理性机制 :CRF的发展即是肾硬化的发展 ,包括肾小球硬化和小管间质纤维化 ,综合前人研究和实验研究结果 ,均可以得出以下这样结论 :( 1) 5 /6肾切除大鼠的CRF模型是一种“肾小管高代谢”的模型。 ( 2 )CRF“肾小管高代谢”的机理是小管细胞线粒体超负荷 ,小管细胞线粒体超负荷时产生过量的自由基反过来损伤了线粒体 ,从而导致小管细胞损伤、凋亡 ,甚至坏死和肾脏功能减退。 ( 3 )通过抑制高代谢的肾小管或提高线粒体氧化磷酸化效率和有效清除产生的自由基 ,能有效减缓肾硬化和CRF的进程。

六味地黄汤对5/6肾切除大鼠肌酐、尿素氮及24h尿蛋白定量的影响

目的:观察六味地黄汤对5/6肾切除大鼠残肾的保护作用。方法:按照随机数字表法将72只SD雄性大鼠分为正常组(12只)、假手术组(12只)和手术组(48只)。手术组行5/6肾切除术诱导大鼠肾衰模型,假手术组同期行两次手术,每次仅打开腹腔,暴露肾脏后,再将肾脏纳入腹中,缝合关腹。造模后3d,将造模成功的43只大鼠随机分为模型组(15只)、依那普利组(14只)和六味地黄汤组(14只),分别对各组大鼠进行干预灌胃8周。观察大鼠毛色、行为及死亡率;所有大鼠每两周固定时间称重,留取24h尿,检验24h尿蛋白定量;于第8周抽取腹主动脉血,留取血清,检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)。结果:六味地黄汤组大鼠体质量增长情况接近正常组;六味地黄汤长期使用可降低5/6肾切除大鼠尿蛋白和SCr水平,对BUN水平影响不大。结论:六味地黄汤能有效保护5/6肾切除大鼠残余肾功能,降低血肌酐水平,改善大鼠生存质量。