HPLC-ELSD法测定龙泽熊胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量

目的:以牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸为指标,建立龙泽熊胆胶囊中熊胆粉的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱串联蒸发光检测器,色谱柱为ChromCore AQ C 18(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈(A)-5 mmol•L^(-1)醋酸铵溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~40 min,25%A;40~50 min,25%A→29%A;50~80 min,29%A;80~100 min,29%A→40%A),流速1.0 mL•min^(-1),柱温30℃,ELSD漂移管温度110℃,氮流量2.5L•min^(-1)。结果:牛磺熊去氧胆酸进样量在1.069~9.57μg内、牛磺鹅去氧胆酸进样量在0.74046~7.40464μg内,进样量的对数与峰面积的对数呈良好的线性关系;仪器精密度、重复性、稳定性试验的RSD<2.0%;经低、中、高3个浓度的准确度试验考察,牛磺熊去氧胆酸的回收率为95.2%~97.7%,牛磺鹅去氧胆酸的回收率为91.9%~95.9%。测定样品42批次,牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量分别为0.18~0.43、0.10~0.44 mg•粒^(-1)。结论:本法适用于龙泽熊胆胶囊中熊胆粉的质量控制,可为完善龙泽熊胆胶囊的质量标准提供科学的依据。

6-乙基-鹅去氧胆酸治疗对胰岛素抵抗的影响

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是MS在肝脏的表现,IR在其发病中起关键作用。法尼酯X受体是调节糖类、脂类代谢和IR的关键因素,6-乙基-鹅去氧胆酸(OCA)作为其选择性激动剂,是NAFLD的潜在治疗药物。多项动物研究结果表明,OCA可改善肝脏脂肪变性,抑制脂质在肝脏堆积,临床试验也证实,其可逆转非酒精性脂肪性肝炎患者的肝脏组织学改变。OCA可能对IR的改善也有一定作用,但长期使用对IS的影响情况还需进一步深入研究。

HPLC-CAD法测定6-乙基鹅去氧胆酸起始物料中有关物质

目的:使用电喷雾检测器建立6-乙基鹅去氧胆酸起始物料的有关物质检测方法。方法:采用Waters XBridge Shield RP18(150 mm×4.6 mm,3.5μm)色谱柱,以0.05%三氟乙酸水溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速为1.4 mL·min-1,柱温为35℃,电喷雾检测器(雾化温度:35℃)。结果:本品主峰与相邻杂质分离良好,在质量浓度0.5~15μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,r=0.999,定量限为13.2 ng,检测限为5.3 ng,杂质重复性考察结果RSD均小于2%(n=6)。结论:方法精密度好、准确度高,可用于本品的有关物质检测。

熊胆粉提取物中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的HPLC-ELSD测定

建立了HPLC-ELSD法测定熊胆粉提取物中的熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸。采用C_(18)色谱托,以0.05%三氟乙酸-乙腈梯度洗脱,蒸发光散射检测器,漂移管温度95℃。熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸分别在2.51～12.54μg和0.40～2.02μg范围内线性关系良好,回收率为98.8%和99 8%,RSD为1.4%和2.1%。

1-乙基-6-氟-7-(1-哌嗪基)-1,4-二氢-4-氧代喹啉-3-羧酸类似物的合成

利用喹诺酮类母环N1位、C3 位羧基、C7位哌嗪基上 4位氮的活性 ,进行酰基化、烷基化及酯化反应 ,合成了7个喹诺酮类似物 ,其结构经元素分析。

牛磺鹅去氧胆酸对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞脂皮素-1基因表达的影响

观察牛磺鹅去氧胆酸(taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)模型成纤维样滑膜(fibroblast-like synoviocytes,FLS)细胞脂皮素-1(lipocortin 1,LC-1)基因表达的影响,并探讨TCDCA对AA大鼠FLS的作用机制。制备AA大鼠模型,采用组织块培养法分离培养AA大鼠FLS,应用荧光定量RT-PCR技术检测TCDCA对AA大鼠FLS细胞LC-1mRNA表达的影响。与模型组相比,TCDCA作用组AA大鼠FLS细胞LC-1mRNA的表达显著高于模型组(P<0.05)。说明TCDCA能显著促进AA大鼠FLS细胞LC-1mRNA的表达。

2-甲基-6-乙基-N-丁氧甲基-N-氯乙酰基苯胺的合成

以2 甲基 6 乙基苯胺、甲醛、氯乙酰氯和正丁醇等为主要原料,以一种经济环保的工艺路线合成了杀菌剂2 甲基 6 乙基 N 丁氧甲基 N 氯乙酰基苯胺。考察了反应条件对反应结果的影响,获得了较佳的反应条件:烯胺化反应中n(甲醛)/n(2 甲基 6 乙基苯胺)=1 5,反应温度70～75℃,反应时间2h;酰化反应中n(氯乙酰氯)/n(2 甲基 6 乙基苯胺)=1 15,反应温度30～35℃,反应时间1 0h;醚化反应中n(丁醇)/n(2 甲基 6 乙基苯胺)=5 5,反应温度50℃,反应时间5h。在较佳反应条件下,产品质量分数和收率分别达到93%和90%。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定鹅去氧胆酸及杂质熊去氧胆酸含量

目的建立测定鹅去氧胆酸原料药含量的高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法。方法采用十八烷基硅烷键合硅胶填充C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-0.10%甲酸溶液(58∶10∶32,V/V/V),流速为1.0 m L/min,等度洗脱,柱温为30℃,380-ELSD检测器,漂移管温度为90℃,N2流速为2.6 L/min。结果鹅去氧胆酸质量浓度在1.0~100.5μg/m L范围内与峰面积线性关系良好,R2=0.9896(n=7);检测限(LOD,S/N=3)、定量限(LOQ,S/N=10)分别为0.45μg/m L,1.52μg/m L;平均回收率为99.22%,RSD为1.29%(n=9);熊去氧胆酸质量浓度在1.0~103.2μg/m L范围内与峰面积线性关系良好,R2=0.9944(n=7);LOD(S/N=3)和LOQ(S/N=10)分别为1.14μg/m L和3.79μg/m L;平均加样回收率为96.72%,RSD为3.97%(n=9)。结论该方法操作方便,重复性好,精密度高,准确性强,可有效控制鹅去氧胆酸原料药的质量。

HPLC-ELSD法同时测定痔速宁片中鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸的含量

目的 采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测法测定痔速宁片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量。方法 采用Thermo U-3000液相色谱系统;ChromeleonTM 7工作站;ELSD 2000ES检测器,检测器条件：漂移管温度：105℃,撞击管关闭,增益为1,气体流速：2.0 L/min。采用Thermo（4.6×150 mm,C185μm 120 A）色谱柱;流动相：乙腈-0.1%冰醋酸（50∶50）;流速：0.9 mL/min;柱温：20℃。结果 表明猪去氧胆酸在（21.530～262.884）μg/mL（r=0.9997）,鹅去氧胆酸在（11.148～133.776）μg/mL（r=0.9995）的范围内呈良好的线性关系;猪去氧胆酸平均加样回收率为101.8%（n=9）,RSD=2.8%;鹅去氧胆酸平均加样回收率为98.0%（n=9）,RSD=2.3%。结论 本方法操作简便、准确、灵敏度高,可用于痔速宁片的质量控制。

高效液相色谱-蒸发光散射检测器法同时测定胆汁槟榔维B_1胶囊中鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸含量

目的建立测定胆汁槟榔维B1胶囊中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）法。方法 Thermo U-3000液相色谱系统,Chromeleon TM 7工作站;ELSD 2000ES检测器,漂移管温度为105℃,撞击管关闭,增益为1;气体流速为2.0 L/min。采用Thermo C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%冰醋酸（53∶47）,流速为1.0 m L/min,柱温25℃。结果猪去氧胆酸质量浓度在21.53～258.36μg/m L（r=0.999 7）,鹅去氧胆酸在11.148～133.776μg/m L（r=0.999 5）范围内与峰面积呈良好的线性关系;猪去氧胆酸平均加样回收率为101.07%,RSD=2.49%（n=9）;鹅去氧胆酸平均加样回收率为97.10%,RSD=2.54%（n=9）。结论该法操作简便、准确、稳定、灵敏度高,可用于胆汁槟榔维B1胶囊的质量控制。

HPLC-ELSD法测定猪胆粉中的甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸的含量

目的:建立HPLC-ELSD法测定猪胆粉中甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸的含量测定方法。方法:猪胆粉甲醇提取液采用Welch Ultimate Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸溶液(40∶60)为流动相,流速为1.0 ml·min^(-1),检测器为奥泰ELSD 2000ES,漂移管温度为105℃,氮气流速为每分钟2.5 L。结果:甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸分别在0.306~4.590μg(r=0.999 5)、0.280~4.194μg(r=0.999 4)范围内呈现良好的线性关系,其平均回收率分别为99.23%,100.37%,RSD分别为2.0%,1.8%(n=9)。结论:该方法结果准确,灵敏度高,重复性好,可用于猪胆粉的质量控制。

LXR激动剂3β-羟基-5α、6α仪环氧胆酸甲酯对血管内皮细胞ABCA1、LXRα表达的影响

目的初步研究LXRα激动剂3β-羟基-5α、6α环氧胆酸甲酯(Methyl 3β—hydroxy-5α、6α-epoxycholanate MHEC）对体外培养的人ECV-304血管内皮细胞ABCA1mRNA、LXRαmRNA表达的影响，探寻血管内皮细胞中LXR途径激活的机制及意义，并为国产LXR激动剂MHEC作为临床药物应用的可能性提供实验依据。方法以ECV-304血管内皮细胞株为研究对象，应用RT-PCR方法栓测LXR激动剂MHEC作用前后细胞ABCAlmtLNA、LXRαmRNA表达的变化，应用免疫组化S-P法检测MHEC对ECV-304细胞ABCA1蛋白表达的影响。结果MHEC能够显著上调血管内皮细胞中ABCA1、LXRα基因的表达，并呈时间和剂量依赖性。实验证实血管内皮细胞中存在LXRα基因的自身激活机制。结论MHEC是一种强力有效的LXR激动剂，能以剂量和时间依赖的方式上调血管内皮细胞中ABCA1和LXRα基因的表达。

一种新型两亲性聚乙二醇单甲醚-鹅去氧胆酸聚合物的合成与表征

[目的]合成聚乙二醇单甲醚-鹅去氧胆酸聚合物,表征其理化性质。[方法]以聚乙二醇单甲醚和鹅去氧胆酸为原料,先对鹅去氧胆酸进行乙酸化,然后再与聚乙二醇单甲醚进行酯化生成两亲性聚合物聚乙二醇单甲醚-鹅去氧胆酸(mPEG-CDCA)。利用核磁、红外、荧光探针法等手段分析聚合物的结构及理化性质。[结果]mPEG-CDCA被成功合成,且荧光分光光度法测定结果表明其临界胶束浓度(CMC)为17.3×10^(-3)mg/L。[结论]合成的两亲性聚合物有较低的CMC,意味着该聚合物容易形成胶束,在抗肿瘤药物的新剂型中具有良好的研究前景。

HPLC-ELSD法同时测定护肝片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量

目的建立高效液相-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法同时测定护肝片中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量的方法。方法采用Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.2%冰醋酸溶液（80∶20）,流速为1.0 m L·min-1,色谱柱温为30℃;蒸发光检测器载气为氮气,流速为2.0 L·min-1,漂移管温度为60℃。结果猪去氧胆酸在0.521~10.42μg范围内呈现良好的线性关系（r=0.998 9）,平均加样回收率为97.41%,RSD为1.30%（n=6）;鹅去氧胆酸在0.266~5.32μg范围内呈现良好的线性关系（r=0.999 4）,平均加样回收率为96.09%,RSD为2.11%（n=6）。结论该方法准确、简便、灵敏度高,可用于护肝片中猪胆粉的质量控制。

RP-HPLC法测定熊去氧胆酸中的有关物质

目的:建立HPLC外标法同时测定熊去氧胆酸中4种特殊杂质及其他有关物质含量。方法:采用Luna C_(18)柱(150mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.001mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液(45∶55,用磷酸调pH至2.2±0.1)为流动相,流速为1.0mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长206nm。结果:熊去氧胆酸、胆酸、胆石酸、鹅去氧胆酸、7-酮基胆石酸分别在0.1～2.0,0.04～1.2,0.5～10,0.08～1.6,0.072～0.72mg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r≥0.9998);方法的精密度和重复性良好(RSD<2%)。结论:该方法准确、简便、快速,适用于熊去氧胆酸的质量控制。

Xanthomonas maltophilia转化制备熊去氧胆酸及中间产物

以野生型嗜麦芽黄单胞菌(Xanthomonas maltophilia)为出发菌株,鹅去氧胆酸/β-环糊精包合物为反应底物,利用嗜麦芽黄单胞菌在液体发酵过程中产生的7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶,全细胞酶法催化制备熊去氧胆酸及中间产物。对嗜麦芽黄单胞菌形态鉴定,酶活测定并优化,制定产物检测方法。表明嗜麦芽黄单胞菌为杆状、单鞭毛、革兰氏阴性菌。菌株破碎后,SDS-PAGE分析表明在26-33 kDa之间存在蛋白条带,测定7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶酶活分别为79 U/mL、35 U/mL;优化显示,温度为35°C、pH值为9.0、添加30%甲醇时酶的活性提升;转化后UDCA得率为17.2 mg/L,7K-LCA得率为18.2 mg/L。作为一种野生型的底盘转化菌种,该研究为全细胞催化制备熊去氧胆酸及其中间产物提供了新的途径。

2-乙基-3-羟基-6-苯硫基-4(1H)-吡啶酮对自由基的清除和抑制作用

研究2-乙基-3-羟基-6-苯硫基-4(1H)-吡啶酮(HPP)对羟自由基和超氧阴离子自由基的影响.用荧光分光光度计测定Fenton反应产生的羟自由基的清除率和生成抑制率,用比色法测定黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系和大鼠腹腔多型核白细胞呼吸爆发产生的超氧阴离子自由基的清除率.HPP对Fenton反应产生的自由基有显著的清除和抑制作用,且活性比羟自由基的特异性清除剂甘露醇强,对化学反应和大鼠腹腔多型核白细胞呼吸爆发产生的超氧阴离子自由基也有明显的清除作用,且活性较维生素E稍强.可见HPP是一种良好的氧自由基清除剂.

鹅去氧胆酸关键中间体的合成工艺研究

鹅去氧胆酸是临床上治疗肝胆类疾病的重要药物。对合成鹅去氧胆酸的关键中间体3α-羟基-6-烯胆烷酸甲酯的合成工艺进行改进,以猪去氧胆酸为原料,经甲酯化后,首先采用大位阻硅醚选择性保护3-OH,再通过Fe(NO_(3))_(3)/4-OH-TEMPO/NaCl/O_(2)体系氧化6-OH,最后经脱硅醚保护、腙化和脱腙反应合成目标产物,总收率为55.21%。相比传统方法,该工艺路线提高了氧化反应的选择性,具有操作简便、成本低且总收率高等特点。

3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-醇的合成

以奥贝胆酸为原料,与二甲羟胺盐酸盐缩合反应后,经硼氢化锂还原得到3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-醇(3)。目标化合物经核磁确证。该方法工艺操作简便,反应条件温和,转化率高。

2,4-二氯-3-乙基-6-硝基苯酚的合成

以间乙基苯酚为原料,在催化剂作用下,用硫酰氯氯化得到4-氯-3-乙基苯酚,再经氯磺酸磺化、盐酸和双氧水氧氯化、稀硝酸硝化制得2,4-二氯-3-乙基-6-硝基苯酚。总收率达到76%以上,产品纯度达到99%以上。该工艺路线已成功实现工业化。