高效液相色谱-二极管阵列检测器测定独一味胶囊中木犀草素含量的研究

建立了一种高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)的方法检测独一味胶囊中的木犀草素的含量;采用色谱柱为BDS HYPERSIL C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-质量分数为0.1%磷酸水溶液(50∶50,V∶V),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃;检测波长为350 nm;木犀草素质量浓度在0.1~100μmol/L范围内呈良好的线性关系,在1.0,5.0和10μmol/L三个标准溶液浓度下加标实验,该方法的回收率为97.67%~105.77%,相对标准偏差(RSD)均小于3%,测得独一味胶囊中木犀草素的平均含量为27.4μmol/L;该方法方便可行,灵敏度高,稳定性好,可用于独一味胶囊中木犀草素的含量测定及质量控制。

基于玉米醇溶蛋白(zein)-海藻酸钠构建木犀草素输送体系及果蔬保鲜研究

本研究以玉米醇溶蛋白和海藻酸钠为原料,通过反溶剂法制备了负载木犀草素的复合颗粒溶液,并评价其对圣女果的保鲜效果。结果表明,当木犀草素与zein比例为1∶50时,颗粒的得率为78.19%,对木犀草素的包埋率为73.87%。体外抗氧化活性结果表明,与游离木犀草素相比,颗粒包埋可以提高木犀草素的抗氧化活性。对圣女果的保鲜效果结果表明,与游离木犀草素相比,包埋能够减少圣女果的水分含量损失,提高圣女果维生素C的含量,减缓圣女果硬度的损失,说明颗粒包埋有利于提高木犀草素的保鲜效果。本研究为果蔬保鲜提供了一条新途径,为生物活性的研究提供新的理论依据。

基于NF-κB信号通路探究木犀草素对宫颈癌细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:探讨木犀草素对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的调控作用。方法:将HeLa细胞分为对照组、5μmol/L木犀草素组、10μmol/L木犀草素组、20μmol/L木犀草素组和抑制剂组。5、10、20μmol/L木犀草素组HeLa细胞分别经不同浓度(5、10和20μmol/L)木犀草素处理24 h,对照组HeLa细胞不做处理。筛选出10μmol/L为木犀草素最适浓度,然后将细胞分为对照组、10μmol/L木犀草素组和抑制剂组[10μmol/L木犀草素+2.5μmol/L BAY 11-7082(NF-κB信号通路抑制剂)]。采用5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)测定细胞增殖情况,平板克隆测定细胞克隆情况,Hoechst 33258测定细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA和细胞周期素D1(Cyclin D1)mRNA表达,蛋白免疫印迹(Western blotting)法测定Caspase-3、Cyclin D1、NF-κB和p-NF-κB蛋白表达。结果:10、20μmol/L木犀草素组细胞增殖率、克隆形成率、Cyclin D1 mRNA和Cyclin D1蛋白相对表达量低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);10、20μmol/L木犀草素组细胞凋亡数、Caspase-3 mRNA和Caspase-3蛋白相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。因此本实验选择低浓度(10μmol/L)木犀草素加入NF-κB通路抑制剂作为抑制剂组进行后续验证实验。抑制剂组细胞增殖率和克隆形成率低于10μmol/L木犀草素组,差异有统计学意义(P<0.05)。10μmol/L木犀草素组Cyclin D1 mRNA、Cyclin D1蛋白、p-NF-κB蛋白相对表达量低于对照组,Caspase-3 mRNA和Caspase-3蛋白相对表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);抑制剂组Cyclin D1 mRNA、Cyclin D1蛋白、p-NF-κB蛋白相对表达量低于10μmol/L木犀草素组,Caspase-3 mRNA和Caspase-3蛋白相对表达量高于10μmol/L木犀草素组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:木犀草素可能通过抑制NF-κB信号通路诱导HeLa细胞的凋亡并减弱其增殖能力。

超声波辅助木犀草素处理对β-乳球蛋白结构及致敏性的影响

β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,BLG)可诱发严重的牛乳过敏反应,通过超声波辅助木犀草素(luteolin,LUT)对BLG进行处理,探究其结构和致敏性的变化规律。通过傅里叶变换红外光谱、圆二色光谱、紫外吸收光谱、荧光光谱等技术研究一次或二次超声波辅助LUT处理对BLG结构的影响;采用酶联免疫吸附测试、细胞实验对其致敏性变化进行评价。结果表明:超声波处理前后的BLG与LUT之间的主要作用力为疏水相互作用,超声波辅助LUT处理显著改变了BLG的二级结构和三级结构,降低了BLG的免疫球蛋白E结合能力以及KU812细胞中白细胞介素-6、白细胞介素-4和组胺的释放能力。因此,超声波辅助LUT处理通过改变BLG的构象表位降低其致敏性,二次超声波辅助LUT处理对BLG的降敏效果最好。

木犀草素通过HIF-1α抑制糖酵解调控M1型巨噬细胞极化

目的基于低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)介导糖酵解途径研究木犀草素(luteolin)调控M1型巨噬细胞极化的分子机制。方法RAW264.7细胞随机分为对照组(M0)和脂多糖(LPS)联合干扰素γ(IFN-γ)诱导组(M1);之后将M1组分为Luteolin治疗组、2-DG(糖酵解抑制剂)组、Luteolin+2-DG组、Luteolin+DMOG(HIF-1α激活剂)组。Western blot检测iNOS、Arg-1和HIF-1α蛋白表达;流式细胞仪检测巨噬细胞亚型;ELISA检测细胞IL-6和IL-10浓度;Real-time PCR检测GLUT1、HK2、PFK1、PK和HIF-1αmRNA表达。结果与M1组比较,Luteolin治疗组以及Luteolin和2-DG共培养组糖酵解相关因子HIF-1α、GLUT1、HK2、PFK1和PK表达水平降低;细胞葡萄糖消耗增加、乳酸分泌量减少。M1型巨噬细胞标记物iNOS、CD86和IL-6表达降低,M2型巨噬细胞标记物Arg-1、CD206和IL-10表达增高。而DMOG能够逆转Luteolin上述作用。结论Luteolin通过调控HIF-1α诱导的糖酵解通路抑制M1型巨噬细胞极化。

木犀草素对宫颈癌大鼠外周血T细胞亚群及PD-1/PD-L1通路的影响

目的:探究木犀草素对宫颈癌(CC)大鼠程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)通路蛋白表达及外周血T细胞亚群的影响。方法:取雌性SD大鼠,在左侧腋窝处皮下注射人宫颈癌HeLa细胞悬液构建CC模型,将造模成功的40只大鼠随机分为模型组(CC)、木犀草素低(5 mg/kg)、中(25 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组;另取10只雌性SD大鼠,在左侧腋窝处皮下注射等量生理盐水,作为空白对照组(Control)。各组于造模成功后开始给药,木犀草素低、中、高剂量组经腹腔注射给予相应剂量药物,2次/d,共30 d,Control组和CC组经腹腔注射等量生理盐水。各组大鼠末次给药12 h后,处死大鼠,测量大鼠体质量,剥取瘤体,测量移植瘤体积及瘤重,并计算抑瘤率,取肿瘤组织,ELISA检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)含量及外周血中IL-10和转化生长因子-β(TGF-β)含量;取大鼠外周血,采用流式细胞仪检测T淋巴细胞CD4^(+)T、CD8^(+)T、CD4^(+)CD25^(+)T百分比,计算其比值;Western blot法检测外周血单个核细胞中PD-1、PD-L1蛋白表达。结果:与Control组相比,CC组大鼠瘤体体积及质量、肿瘤组织VEGF含量、外周血T细胞亚群CD4^(+)CD25^(+)T百分比、IL-10和TGF-β含量、外周血单核细胞中PD-1、PD-L1蛋白表达升高(P<0.05),大鼠体质量、外周血T细胞亚群CD4^(+)T及CD8^(+)T比例降低(P<0.05);与CC组相比,木犀草素低、中、高剂量组大鼠瘤体体积及质量、肿瘤组织VEGF含量、外周血T细胞亚群CD4^(+)CD25^(+)T百分比、IL-10和TGF-β含量、外周血单核细胞中PD-1、PD-L1蛋白表达降低(P<0.05),大鼠体质量、抑瘤率、外周血T细胞亚群CD4^(+)T、CD8^(+)T占比均升高(P<0.05),且木犀草素各剂量组上述指标呈剂量依赖性。结论:木犀草素可能通过抑制CC模型大鼠外周血PD-1、PD-L表达,逆转CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞抑制状态,提高机体免疫功能发挥抗肿瘤效应。

木犀草素联合芦丁抗6-羟多巴胺诱导的帕金森病大鼠震颤及神经保护作用

目的探讨木犀草素和芦丁组合物(mixture of luteolinand rutin,MLR)对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(parkinson's disease,PD)模型大鼠减轻震颤和保护神经元的作用及机制。方法运用6-OHDA两点注射法,损毁大鼠左侧中脑多巴胺能神经元,复制PD模型。2周后,将造模成功大鼠随机分为模型组、美多芭给药组(50 mg·kg-1)、MLR给药组(125、250、375 mg·kg-1),另取手术并注射生理盐水、经检测无旋转运动的大鼠为假手术组。在给药后第3周记录大鼠后肢肌电(EMG),观察肌肉震颤。行为学检查完毕后采用免疫组化法检测大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运体(DAT)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数。结果 EMG检测结果显示,MLR各给药组可明显降低大鼠的震颤频率和幅度,中、高剂量组的作用优于美多芭组。免疫组化结果显示,MLR高剂量组TH免疫阳性神经元的数目约为模型组的499.14%,MLR高剂量组GFAP免疫阳性星形胶质细胞的数目比模型组降低了43.68%。结论MLR可剂量依赖性抑制PD模型大鼠震颤,减轻神经元受损程度,抑制星形胶质细胞激活和促炎因子释放,从而延缓DA能神经元进行性退变。

木犀草素对大鼠股骨骨折愈合及Wnt/β-catenin信号通路影响

目的 探究木犀草素对大鼠股骨骨折愈合的影响以及对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、木犀草素低剂量组(50 mg/kg)、木犀草素高剂量组(100 mg/kg)、木犀草素高剂量+Wnt通路抑制剂(IWR-1)组(100 mg/kg+5 mg),每组18只。除正常对照组外,其余4组建立大鼠左股骨骨折模型。造模成功24 h后各治疗组进行相应的药物干预,正常对照组和模型组大鼠灌胃等体积0.9%氯化钠溶液,每日1次,持续干预14 d。干预周期结束后,检测大鼠血清炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和骨形成因子[骨碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)]水平;对大鼠进行左侧股骨骨折愈合影像学检查和骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC)测定;苏木素-伊红染色观察大鼠左侧股骨组织病理形态;蛋白免疫印迹法检测大鼠左侧股骨组织Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠左侧股骨骨组织之间可见大面积骨损伤,断端形成大量骨小梁,以及大量纤维组织生成和炎症细胞浸润,血清IL-6、IL-1β、TNF-α及左侧股骨组织Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平显著升高,血清BALP、OC及左侧股骨BMD、BMC水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,木犀草素低、高剂量组和木犀草素高剂量+IWR-1组大鼠骨折线逐渐消失,左侧股骨组织骨损伤面积逐渐减少,骨小梁、纤维组织生成逐渐减少,血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低,血清BALP、OC,左侧股骨BMD、BMC及Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05);且木犀草素高剂量组大鼠上述指标变化优于木犀草素低剂量组(P<0.05)。与木犀草素高剂量组比较,木犀草素高剂量+IWR-1组大鼠骨折愈合情况较差,左侧股骨组织骨损伤面积较大,断端新生较多骨小梁,纤维组织增生,有较多炎症细胞浸润,血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平升高,血清BALP、OC,左侧股骨BMD、BMC及Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 木犀草素可以通过激活Wnt/β-catenin信号通路,刺激骨形成因子的表达,减轻炎症反应,促进大鼠股骨骨折愈合。

木犀草素对LPS诱导的RAW264.7细胞COX-2及mPGES-1表达的影响

目的:探讨木犀草素对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞COX-2及mPGES-1表达的影响。方法:酶免疫测定法(EIA)检测木犀草素对PGE2生成的影响,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2及mPGES-1 mRNA的表达。免疫印迹法(Western blotting)检测COX-2及mPGES-1蛋白的表达。结果:木犀草素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE2的生成,同时下调LPS诱导的RAW264.7细胞COX-2及mPGES-1 mRNA和蛋白的表达。结论:木犀草素可以抑制PGE合成途径中两个诱导酶COX-2和mPGES-1的表达。

木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶对小鼠巨噬细胞RAW264.7的抗炎作用研究

目的:研究木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶的抗炎作用及机制。方法:以正常小鼠巨噬细胞RAW264.7为对照,以脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞为炎症模型,采用MTT法检测不同浓度(10、20、40、80μmol/L)的木犀草素、4,4′-联吡啶和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶作用细胞2 h后的细胞活性;荧光定量聚合酶链式反应法测定40μmol/L浓度时细胞中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧合酶2(COX-2)m RNA的表达,酶联免疫吸附法测定40μmol/L浓度时细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)蛋白表达,Western blot法测定40μmol/L浓度时细胞中核转录因子p65(NF-κB p65)蛋白表达。结果:与正常细胞比较,LPS诱导后RAW264.7细胞活性明显降低(P<0.01),i NOS和COX-2 m RNA表达水平及TNF-α、IL-6、NF-κB p65蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。木犀草素和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶均能增强LPS诱导后RAW264.7细胞活性(P<0.05或P<0.01),且呈浓度依赖性;4,4′-联吡啶对LPS诱导后RAW264.7细胞活性无明显影响;40μmol/L浓度下,木犀草素和木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶可使LPS诱导后细胞中i NOS和COX-2 m RNA表达水平及TNF-α、IL-6、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),其中木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶降低效果强于木犀草素(P<0.05或P<0.01)。结论:木犀草素·4,4′-联吡啶药物共晶可能通过下调NF-κB信号来抑制炎症相关因子产生,其抗炎作用优于木犀草素。

木犀草素调控CTBP1-AS2/miR-493-5p对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨木犀草素对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(hRECs)损伤的影响,分析其保护机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)C-末端结合蛋白-1反义RNA2(CTBP1-AS2)和miR-493-5p表达有关。方法用30 mmol/L葡萄糖处理hRECs 48 h建立细胞损伤模型。将hRECs分为正常糖(NG)组、高糖组(HG)、甘露醇组(MA)、HG+木犀草素低剂量组、HG+木犀草素中剂量组、HG+木犀草素高剂量组。为探讨木犀草素是否调控CTBP1-AS2/miR-493-5p影响高糖诱导的hRECs损伤,将hRECs分为HG+pcDNA组、HG+pcDNA-CTBP1-AS2组、HG+木犀草素+si-CTBP1-AS2组。实时定量PCR检测hRECs中CTBP1-AS2和miR-493-5p表达水平;流式细胞术检测hRECs凋亡率;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。荧光素酶报告实验确定CTBP1-AS2和miR-493-5p靶向关系。结果与NG组比较,HG组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著升高,SOD活性、CTBP1-AS2表达量显著降低(均P<0.05)。与HG组比较,HG+木犀草素低剂量组、HG+木犀草素中剂量组、HG+木犀草素高剂量组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著降低,SOD活性、CTBP1-AS2表达量显著升高(均P<0.05)。与HG+pcDNA组比较,HG+pcDNA-CTBP1-AS2组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著降低,SOD活性显著升高(均P<0.05)。miR-493-5p是CTBP1-AS2的靶基因。与HG+木犀草素高剂量组比较,HG+木犀草素+si-CTBP1-AS2组细胞凋亡率、MDA含量、miR-493-5p表达量显著升高,SOD活性显著降低(均P<0.05)。结论木犀草素可减轻高糖诱导的hRECs凋亡和氧化应激损伤,其机制可能是通过上调CTBP1-AS2/miR-493-5p途径实现的。

黄酮化合物对巨噬细胞中白细胞介素介导的TLR4/MyD88/NF-κB信号转导通路的调节作用

目的利用巨噬细胞,评价黄酮类化合物(华良姜素和木犀草素)对促炎、抗炎白细胞介素(IL)因子表达以及Toll样受体4/髓样分化因子/核因子-κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号转导的调节作用。方法采用脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,黄酮设低、中、高浓度组分别与LPS共处理,建立细胞炎症和抗炎模型。利用酶联免疫吸附法测定培养液中一氧化氮(NO)和IL表达。沉默IL-6,用反转录聚合酶链反应法检测IL-10/IL-17 mRNA沉默IL-10,检测IL-6/IL-12 mRNA变化。蛋白免疫印迹法检测Toll样受体4(TLR4)、磷酸化p65(p-p65)、髓样分化因子(MyD88)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白。结果华良姜素、木犀草素抑制NO半数抑制浓度(IC 50)分别为0.60和8.93μmol·L^(-1)。LPS诱导可降低抗炎因子IL-4、IL-10表达,并且提高促炎因子IL-6、IL-12、IL-16、IL-17和IL-23表达(P<0.01)。与LPS组比较,黄酮分别处理可剂量依赖地中和促炎因子上调和抗炎因子的下调作用(P<0.05或P<0.01)。沉默IL-10上调IL-6/IL-12 mRNA在空白对照组、LPS诱导和LPS+黄酮组细胞中表达;沉默IL-6下调IL-10/IL-17 mRNA表达(P<0.05或0.01)。与空白对照组比较,LPS诱导激活细胞表达TLR4、p-p65、MyD88、p-IκBα蛋白,而经黄酮处理后蛋白表达均被抑制(P<0.05或0.01)。结论2种黄酮类化合物均具有抗炎活性,可中和巨噬细胞的促炎、抗炎IL因子。IL-10反向调节IL-6/IL-12,IL-6正向调节IL-10/IL-17。巨噬细胞的双重IL中和作用通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路来实现。

木犀草素通过TLR4/PI3K/AKT通路对子痫前期大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响

目的:探究木犀草素通过Toll样受体4(TLR4)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对子痫前期(PE)大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素(40 mg/kg)组、TLR4过表达载体组、TLR4空载组、木犀草素(40 mg/kg)+TLR4过表达载体组,每组12只,除对照组外,其余各组大鼠皮下注射L-精氨酸甲酯(LNAME)制备PE模型,以药物分组处理后,测定各组大鼠妊娠晚期平均动脉压及24 h尿蛋白含量,检测各组大鼠平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31(血管标志物)阳性细胞比例、胎盘细胞凋亡比例,血清炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17水平及胎盘组织凋亡相关蛋白、TLR4/PI3K/AKT通路蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、BCL2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白水平显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组、木犀草素+TLR4过表达载体组分别相比,木犀草素组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著降低(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P<0.05),TLR4过表达载体组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与模型组相比,TLR4空载组大鼠各指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:木犀草素可通过下调TLR4/PI3K/AKT通路表达,降低PE大鼠平均动脉压,缓解妊娠后期高血压与蛋白尿症状,抑制炎症,增强胎盘血管生成,减轻胎盘组织损伤及细胞凋亡,提高妊娠大鼠子代存活率。

3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素对碱性脂肪酶活性影响机制的研究

目的探讨黄酮类化合物3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素对碱性脂肪酶活性的影响。方法采用3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素作为抑制剂,以改进后的铜皂法测定脂肪酶活性,测定3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素的浓度与脂肪酶活性的关系,得出该化合物对脂肪酶活性影响,并测定其IC50值。结果该化合物对碱性脂肪酶活性的抑制作用为非竞争性抑制,其IC50为3.17×10-7mol/L。米氏常数K m=100 mmol/L,抑制常数K i=2.7×10-7mol/L。结论 3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素对碱性脂肪酶的抑制机制是其与酶的活性部位以外的基团作用而导致酶活性降低,呈非竞争性抑制。

以4,4'-联吡啶为配体的木犀草素药物共晶的合成及表征

利用溶液挥发法首次合成1个全新的木犀草素-4,4'-联吡啶药物共晶,并通过红外光谱、核磁共振、X射线粉末衍射及差示扫描热量分析等对其表征。选择不同物质量比的木犀草素与4,4'-联吡啶及不同反应溶剂为主要影响因素,探索并确定相应合成条件:木犀草素和4,4'-联吡啶以13的物质量比混合后溶于7.0 m L丙酮溶剂,25℃下搅拌3 h后,于室温下挥发,5 d后得到黄褐色粉末状晶体。结果表明,在极性相对较小的溶剂体系中,反应物分子间形成数目合适且方向饱和的氢键连接,可有效促进药物共晶生成。

木犀草素对实验性肺纤维化大鼠组织中TGF-β1mRNA表达的影响

目的研究木犀草素对肺纤维化大鼠肺组织中转化生长因子β(TGFβ1)mRNA的表达的影响。方法大鼠气管内灌注博来霉素致大鼠肺纤维化病变,同时ig给予40mg·kg-1的木犀草素连续14d,观察肺重量指数和羟脯氨酸含量的变化;用RTPCR测定肺组织中TGFβ1mRNA表达水平。结果木犀草素可降低重量指数和羟脯氨酸含量,延缓肺纤维化进程,并抑制TGFβ1mRNA的表达。结论木犀草素抗肺纤维化作用与其抑制肺组织中TGFβ1mRNA表达有关。

木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对缺血缺氧培养乳鼠心肌细胞的保护作用

目的观察木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对缺血缺氧培养乳鼠心肌细胞的保护作用及其可能机制。方法采用原代培养的乳鼠心肌细胞造成缺血缺氧损伤模型,观察木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对损伤后心肌细胞存活率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的影响,推断细胞内活性氧的生成量;观察培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,以判断细胞损伤情况;并进行hochest33258染色,判断细胞凋亡程度。结果木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(100,50μg/mL)组可显著升高缺血缺氧损伤时细胞存活率、提高细胞SOD活性,降低MDA含量、降低LDH的漏出量,细胞凋亡率降低。结论木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对缺血缺氧培养的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与清除氧自由基,稳定细胞膜,抑制细胞凋亡有关。

不同季节的葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量测定

[目的]同时测定葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量。[方法]采用高效液相色谱法(HPLC)测定葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量,色谱柱kromasilC18,以甲醇-0.2%磷酸溶液(45:55)为流动相,流速为1.0mL/min,柱温35℃,检测波长为350nm。[结果]木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷在0.072～0.36μg的范围内与峰面积积分值成良好的线性关系(r=0.9999),精密度相对平均标准差(RSD)=2.06%,平均加样回收率为99.3%,RSD为2.8%;大波斯菊苷在0.05～0.40μg的范围内与峰面积积分值成良好的线性关系(r=0.9997),精密度RSD=1.73%,平均加样回收率为100.2%,RSD%为2.7%。葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量在7、8月份含量最高,大波斯菊苷在6月份含量最高。[结论]该方法简单、灵敏、稳定、可靠,可用于葎草中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和大波斯菊苷的含量测定。葎草适宜的采收季节应在6～8月份。

反相高效液相色谱法测定湿生扁蕾中木犀草素和1,7-二羟基-3,8-二甲氧酮的含量

目的建立湿生扁蕾药材中木犀草素和1,7-二羟基-3,8-二甲氧基酮的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),色谱柱为ZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相为甲醇(A)-0.4%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,0～15min,A∶B=50∶50,15～60min,A∶B=55∶45;检测波长260nm;流速1mL/min;柱温30℃。结果1,7-二羟基-3,8-二甲氧酮和木犀草素分别在0.084～0.84μg和0.184～1.84μg范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9994和0.9997;平均回收率分别为96.82%和97.19%,RSD均小于3%。结论该方法简便准确,重现行好,可作为湿生扁蕾药材的质量控制方法。