基于微粉化的干姜浸提6-姜辣素工艺研究

试验旨在探究不同因素对干姜浸提6-姜辣素的影响,确定干姜浸提6-姜辣素的最佳工艺。试验以6-姜辣素含量为指标,采用单因素试验考察粒径、提取温度、提取时间、提取溶剂、乙醇浓度、液料比和提取次数对6-姜辣素含量的影响。在此基础上,运用正交试验设计选取粒径、液料比、提取时间和提取次数为优化的4个因素,分析确定干姜浸提6-姜辣素的最佳条件。结果显示:干姜浸提6-姜辣素最佳工艺条件为粒径300目、液料比8 mL/g、提取时间40 min、提取次数3次,在此条件下测得3份样品6-姜辣素含量为1.18%~1.19%,干物质得率为7.08%~7.15%。研究表明,此浸提工艺稳定、可行,可为干姜提取物的生产提供参考。

6-姜辣素对人多发性骨髓瘤细胞的抑制作用及分子机制

目的研究6-姜辣素对人多发性骨髓瘤细胞的抑制作用及分子机制。方法体外培养人多发性骨髓瘤RPMI 8226、ARH77细胞,加入不同浓度(50、100、200、300、400μmol/L)的6-姜辣素处理RPMI 8226、ARH77细胞,CCK-8法测定细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡和周期;qRT-PCR和Western blotting法检测基因和蛋白表达水平。结果6-姜辣素以剂量和时间依赖的方式抑制RPMI8226、ARH77细胞的增殖,并诱导其凋亡,差异有统计学意义(P<0.05);进一步机制研究发现6-姜辣素处理RPMI 8226细胞后,将细胞阻滞在G_(0)/G_(1)期,显著增加Bax mRNA水平,降低Bcl-2 mRNA和c-Myc mRNA的水平(P<0.05);同时显著增加Bax、Cleaved-PARP、Cleaved-caspase3、P53、p-AKT蛋白的表达,而降低Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。结论6-姜辣素可抑制MM细胞增殖及诱导其凋亡,并阻滞细胞周期在G_(0)/G_(1)期,其机制可能与抑制AKT信号通路并通过影响Bcl-2家族蛋白表达以及c-Myc表达受抑等密切有关。

三种方法提取生姜有效部位群并测定6-姜辣素含量

目的:比较三种生姜的提取方法,优化生姜药材的提取工艺及工艺参数。方法:建立反相高效液相色谱法测定生姜指标成分6-姜辣素的分析方法,比较水蒸气蒸馏法、超临界CO2萃取法和乙醇渗漉法提取生姜的工艺。结果:该6-姜辣素的含量测定方法稳定可靠;超临界CO2萃取法和乙醇渗漉法提取率较高,超临界CO2萃取物中6-姜辣素的含量显著高于水蒸气蒸馏法和乙醇渗漉法。结论:三种方法中以超临界CO2萃取法为提取生姜的最佳方法。

不同温胆汤制剂中6-姜辣素的含量对比研究

目的对比温胆汤传统汤剂、现代汤剂及颗粒剂中6-姜辣素的含量。方法采用高效液相法测定三种温胆汤制剂中6-姜辣素的含量,比较提取率。采用Kromasil-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-甲醇-水(40∶5∶55)为流动相,流速为1.0 ml·min^(-1),检测波长为280 nm,柱温30℃。结果 6-姜辣素在20.0~100.0μg·ml^(-1)范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9997),精密度和稳定性试验的RSD分别为0.32%和0.83%,在三种不同制剂中的平均回收率分别为98.82%、98.87%和96.97%(n=5),RSD分别为1.38%、1.05%和1.89%。三种不同制剂中6-姜辣素平均含量分别为,传统汤剂62.3 mg·g^(-1)、现代汤剂57.8 mg·g^(-1)、颗粒剂40.5 mg·g^(-1)。结论三种不同温胆汤制剂中6-姜辣素的平均含量在传统汤剂里含量最高,现代汤剂次之,颗粒剂中含量最低。

高效液相色谱法同时测定干姜甘草配伍后6-姜辣素、甘草酸和甘草苷的含量变化

目的比较干姜与甘草合煎后6-姜辣素、甘草酸和甘草苷含量的变化。方法采用HPLC法同时测定干姜、甘草单煎液以及不同配伍比例合煎液中6-姜辣素、甘草酸和甘草苷含量的变化。结果与单煎液比较,干姜与甘草合煎液中6-姜辣素、甘草酸含量均有所下降,其中干姜与甘草1∶2、1∶3的合煎液中6-姜辣素的含量分别降低7.50%、15.63%,甘草酸的含量分别降低19.16%、24.48%。结论干姜与甘草合煎后,两者代表性有效成分6-姜辣素和甘草酸含量根据药材配伍比例不同,有不同程度的降低,甘草苷的含量变化无明显差异。初步揭示了甘草缓和干姜峻烈之性的物质基础所在,但其深层次的作用机制有待于进一步研究。

6-姜辣素对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探究6-姜辣素对人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法不同浓度6-姜辣素处理人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,使用CCK-8法检测6-姜辣素对乳腺癌细胞增殖能力的影响;应用流式细胞仪检测6-姜辣素对乳腺癌凋亡的影响;6-姜辣素处理人乳腺癌细胞,应用Western印迹法检测促凋亡蛋白(Bad)、免抗人单克隆抗体(Bax)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白水平。结果6-姜辣素抑制乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖能力,并呈浓度依赖性和时间依赖性;流式细胞仪检测细胞凋亡率,提示6-姜辣素促进乳腺癌细胞凋亡发生;6-姜辣素处理乳腺癌细胞,促进Bad和Bax表达,而抑制Bcl-2表达;同时,6-姜辣素促进p-AMPK的表达,抑制p-mTOR的表达。结论6-姜辣素通过激活AMPK/mTOR信号通路,抑制乳腺癌细胞增殖并促进其凋亡,发挥抗肿瘤功能。

高效液相色谱法测定参姜搽剂中6-姜辣素的含量

目的建立高效液相色谱法测定参姜搽剂中6-姜辣素的含量。方法色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈-甲醇-水(40∶5∶55)为流动相;检测波长为280 nm;流速为1 ml/min;柱温为35℃。结果 6-姜辣素在5.08～30.48μg/ml范围内,线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为97.08%,RSD为0.76%。结论此方法简便,准确,灵敏。

高效液相色谱法测定科安乳膏中6-姜辣素含量

目的采用高效液相色谱法建立科安乳膏中6-姜辣素含量的测定方法。方法色谱柱为C18（250mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-水（70：30），检测波长为280nm，流速为1．0mL／min，柱温为30℃，进样量为20μL。结果6－姜辣素浓度在1．02-20．4μg／mL范围内与峰面积的线性关系良好（r=0．9999）；平均加样回收率为98．83％，RSD为1．08％（n=6）。结论所建立的高效液相色谱法简便、准确、可靠，可用于科安乳膏的含量测定．

干姜煮散颗粒与传统饮片在不同煎煮时间点干膏收率与6-姜辣素含量的对比研究

为探讨干姜煮散颗粒与传统饮片在不同煎煮时间点的煎出效果,测定了干姜煮散颗粒和传统饮片在不同煎煮时间点水煎液的干膏收率,同时采用HPLC法测定了不同时间点两者水煎液中6-姜辣素的含量.实验结果表明,在相同的煎煮条件中,不同煎煮时间点干姜煮散颗粒的水煎液中的干膏收率和6-姜辣素的含量均显著高于干姜传统饮片水煎液(P<0.05).验证了"中药煮散"省材省时之优点,为中药传统饮片应用形式的创新提供了一种新思路.

HPLC法测定正柴胡饮胶囊中6-姜辣素的含量

目的:对正柴胡饮胶囊中生姜的有效成分6-姜辣素进行含量测定,以便更好地控制产品质量。方法:Dikma Kro-masil C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(55:45);流速:1.0ml/min;柱温:30℃。结果:样品中6-姜辣素含量在0.1968～1.9680μg,进样量与峰面积积分值线性关系良好,r=0.9999,平均回收率98.8%,RSD=1.48%。结论:所建立的方法简便、快速,结果准确、重复性好,可用于提高产品的质量控制水平。

6-姜辣素改善果糖所致中年大鼠骨骼肌异位脂质沉积的研究

目的 探究6-姜辣素改善果糖所致中年大鼠骨骼肌异位脂质沉积的作用及机制。方法 动物实验:将24只15月龄雄性SD大鼠采用随机数字表法分为3组:对照组(CON,正常饮水),模型组(FRU,10%果糖水),6-姜辣素组(GIN,10%果糖水,0.2 mg/kg 6-姜辣素),每组8只,6-姜辣素通过灌胃给药,每日1次,持续49 d。采用酶法检测血浆葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)及骨骼肌组织TG水平;油红O染色(ORO)检测骨骼肌组织脂质沉积;ELISA检测血浆胰岛素(Insulin);Western blot检测骨骼肌AMPK、p-AMPK、ACC、p-ACC、CPT1A、PPARα及PGC1α蛋白表达。细胞实验:将分化成熟的大鼠骨骼肌细胞分为3组:对照组(CON),模型组(FRU,25 mmol/L果糖),6-姜辣素组(GIN,25 mmol/L果糖,10μmol/L 6-姜辣素),作用24 h。酶法检测细胞内TG水平;ORO检测骨骼肌细胞脂质沉积;Western blot检测骨骼肌细胞AMPK、p-AMPK、ACC、p-ACC及CPT1A蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组血浆GLU、TG及Insulin水平明显升高(P<0.05),大鼠骨骼肌组织及骨骼肌细胞内TG含量明显升高(P<0.05),ORO示大鼠骨骼肌组织及骨骼肌细胞内脂质沉积明显,Western blot示p-AMPK/AMPK及p-ACC/ACC降低,CPT1A、PPARα及PGC1α蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,姜辣素组血浆GLU、TG及Insulin水平明显降低(P<0.05),大鼠骨骼肌组织及骨骼肌细胞内TG含量显著降低(P<0.05),ORO示大鼠骨骼肌及骨骼肌细胞内脂质沉积减轻,Western blot示p-AMPK/AMPK及p-ACC/ACC明显升高,CPT1A、PPARα及PGC1α蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 6-姜辣素可改善果糖所致中年大鼠骨骼肌异位脂质沉积,可能与骨骼肌AMPK/ACC/CPT1A通路的激活有关。

基于网络药理学研究6-姜辣素改善L6成肌细胞糖脂代谢紊乱的作用机制

运用网络药理学研究6-姜辣素改善糖脂代谢紊乱的作用机制,并通过高果糖高油酸培养的L6大鼠成肌细胞模型进行验证。借助TCMSP数据库、SwissTargetPrediction数据库、GeneCards数据库,对6-姜辣素作用糖脂代谢紊乱的靶点进行预测,运用软件Cytoscape 3.7.1构建化合物靶点-疾病网络关系,采用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析,利用R包进行GO功能富集和KEGG通路富集分析;运用KEGG Mapper对富集基因进行基因映射。结合GO富集分析、KEGG通路分析和基因映射结果,该研究选择PI3K-AKT信号通路、mTOR、NF-κB-p65、ERK分子进一步进行体外实验验证。通过高果糖高油酸构建L6大鼠成肌细胞糖脂代谢紊乱模型,对细胞进行甘油三酯(TG)测定和油红染色,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测6-姜辣素对PI3K-AKT信号通路、mTOR、NF-κB-p65、ERK分子的基因、蛋白表达的影响。网络药理学分析共得到6-姜辣素治疗糖脂代谢紊乱靶点113个,GO富集分析发现与蛋白质激酶活性关系密切,KEGG富集共筛选出20条相关信号通路,包括PI3K-AKT信号通路、乙型肝炎、丙型肝炎、人类巨细胞病毒感染、自噬等。体外实验表明6-姜辣素能减少高果糖高油酸诱导的L6细胞脂质积累,减少炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α的表达,上调AKT的基因和蛋白磷酸化水平,下调mTOR、NF-κB-p65、ERK的磷酸化水平。这些结果提示6-姜辣素能够改善高果糖高油酸诱导的L6大鼠成肌细胞糖脂代谢紊乱,其机制可能与激活PI3K-AKT-mTOR轴改善胰岛素敏感性和抑制NF-κB-p65、ERK的磷酸化降低炎症反应有关,这为后续的基础研究提供理论基础。

6-姜辣素对黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的探究6-姜辣素对黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法使用不同浓度6-姜辣素处理黑色素瘤细胞,采用MTT法检测黑色素瘤增殖能力的变化;流式细胞仪检测6-姜辣素对黑色素瘤细胞凋亡的影响;应用Western blotting检测黑色素瘤细胞半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)/活化型半胱天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-Caspase-3)、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)/活化型多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved-PARP)、免疫球蛋白结合蛋白(BIP)、肌醇激酶1(IRE1)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达水平变化;敲减IRE1阻断内质网应激信号通路,检测6-姜辣素对黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果6-姜辣素抑制黑色素瘤细胞增殖呈浓度依赖性,对M14和A375细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为46.070和33.152μmol/L;6-姜辣素处理后,黑色素瘤细胞Cleaved-Caspase-3和Cleaved-PARP蛋白表达上调(P <0.05),细胞凋亡率升高(P <0.05);6-姜辣素激活内质网应激,BIP、IRE1和JNK蛋白表达上调(P <0.05);6-姜辣素处理IRE1基因敲减细胞,与对照组相比对细胞增殖抑制减弱、凋亡蛋白Cleaved-Caspase-3表达下调(P <0.05)。结论 6-姜辣素可通过激活内质网应激,抑制黑色素瘤细胞增殖并促进其凋亡,从而发挥抗肿瘤功能。

超滤-纳滤联用用于干姜中指标性成分6-姜辣素的浓缩

目的:探索超滤-纳滤联用技术在干姜中指标性成分6-姜辣素浓缩中的应用。方法:以总蛋白和6-姜辣素透过率为指标,考察超滤过程。在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken响应面法,以6-姜辣素的截留率为指标,考察滤膜截留相对分子质量(Mr)、6-姜辣素浓度和p H对纳滤过程的影响。结果:采用截留Mr为10 k Da的滤膜,对总蛋白的去除率为98.89%,6-姜辣素的透过率达到98.55%。纳滤过程最佳工艺参数为:截留Mr为350 Da、6-姜辣素质量浓度为150μg·ml-1、超滤液p H为7.0,对6-姜辣素的实际截留率为95.59%。结论:超滤-纳滤联用技术可有效完成对姜辣素类成分的浓缩,相比传统热浓缩优势明显。

HPLC测定铜陵鲜姜冻干粉6-姜辣素含量

目的:优化铜陵鲜姜渣回流提取工艺,制备铜陵鲜姜冻干粉并测定6-姜辣素含量。方法:根据2015版《中国药典》中生姜提取方法,将铜陵鲜姜分为鲜姜渣和鲜姜汁两部分,采用回流提取法提取铜陵鲜姜渣中6-姜辣素,通过正交试验优化生姜渣提取工艺;采用真空冷冻干燥法制备铜陵鲜姜冻干粉,结合高效液相色谱法测定6-姜辣素含量。结果:最佳工艺为:以80%浓度甲醇为溶剂,料液比1∶50(m/V),在80℃水浴中回流提取两次,30min/次;在-45℃条件下真空干燥48h可得铜陵鲜姜冻干粉,高效液相色谱法测定出铜陵鲜姜冻干粉中6-姜辣素平均含量分别为1.53%。结论:建立了测定铜陵鲜姜冻干粉的HPLC测定方法,该法提取效率高、稳定性好,可为铜陵鲜姜的制剂开发提供理论指导。

干姜中6-姜辣素提取效率的比较研究

目的:比较传统煎煮法与乙醇回流法提取干姜中6-姜辣素的效率,以优选最佳提取工艺。方法:以6-姜辣素的转移率及浸膏量为评价指标,选择溶剂倍数、提取时间、提取次数及乙醇浓度为正交试验的影响因素,优选乙醇回流最佳工艺;选择溶媒倍数、煎煮时间和煎煮次数为正交试验的影响因素,优选煎煮法最佳工艺。最后选择最佳煎煮工艺和乙醇回流工艺平行进行3次试验以比较6-姜辣素最佳提取工艺。结果:水煎煮法的最佳提取工艺为10倍量水,每次提取1.5h,提取2次。乙醇回流法的最佳提取工艺为10倍量75%的乙醇,每次提取1h,提取2次。水煎煮法较乙醇回流法的6-姜辣素转移率高,得膏率低。结论:本研究选择煎煮法作为干姜中6-姜辣素的最佳提取工艺。

生姜6-姜辣素的提取及姜汁去屑洗发水的研制

优选生姜6-姜辣素的提取方法,研究生姜提取液在去屑洗发水中的应用。采用HPLC法,以6-姜辣素为考察指标,分别对榨汁法、加热回流提取法、微波提取法、超声提取法和超声-微波协同萃取法的生姜提取液进行含量测定;通过抑菌实验,考察不同添加量的生姜提取液对洗发香波性能影响,确定生姜提取液的最佳添加量,最小抑菌浓度。结果显示,榨汁法为生姜的最佳提取方法,姜汁的最佳添加量是15%,最小抑菌浓度是:糠秕马拉色菌MIC为18.75 mg/mL,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌MIC均为9.375 mg/mL。

香姜中6-姜辣素的提取工艺研究

以6-姜辣素转移率为指标,采用单因素和正交试验方法,找出香姜中6-姜辣素的最佳提取工艺。最佳工艺为12倍量80%乙醇超声提取1次,每次0.5 h。优化后的提取工艺稳定,大黄素的转移率达90%以上。

响应面分析法优化生姜中6-姜辣素醇提工艺

[目的]优化生姜中提取姜辣素的醇提工艺。[方法]以生姜为材料,在单因素试验的基础上,选取料液比、提取温度、提取次数、提取时间为自变量,6-姜辣素的收率为响应值,采用中心组合设计的方法,利用响应面分析方法,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型。[结果]生姜中6-姜辣素醇提工艺的最佳条件为:80%乙醇为提取溶剂,料液比1∶12 g/ml,提取时间90 min,提取次数2次,提取温度70℃,在此条件下,姜辣素的提取率达92.55%。[结论]与传统工艺比较,响应面分析法优化得到的6-姜辣素醇提工艺具有提取率高、能耗少的特点。

高效液相色谱法测定生姜中的有效成分6-姜辣素

建立高效液相色谱法测定生姜中6-姜辣素的方法。采用甲醇提取生姜中6-姜辣素,以甲醇:乙腈:水=5:40:55为流动相,流速0.8 mL/min,用高效液相色谱仪(紫外检测器)280 nm测定含量。本方法检出限0.5 ng,RSD小于2%,回收率为98.6%～101.1%。