6-姜酮酚抑制肝内胆管癌细胞的增殖、迁移、侵袭作用及其机制探讨

目的研究6-姜酮酚(6-Paradol)对人肝内胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用及机制。方法人肝内胆管癌细胞系HCCC 9810和HUCCT1以不同浓度的6-Paradol及等体积的DMSO(对照组)处理后,采用CCK-8、平板克隆、划痕愈合及Transwell实验检测其增殖、迁移及侵袭能力。应用生物信息学软件Swiss Target Prediction预测6-Paradol作用的蛋白靶点,采用Western blot检测胆管癌细胞中STAT3、p-STAT3、SRC、p-mTOR、p21、Bcl-2以及p53的蛋白表达水平;采用药物亲和反应实验(DARTS)探究6-Paradol与STAT3的相互作用;胆管癌HCCC 9810和HUCCT1细胞分别转染STAT3过表达质粒或sh-p21质粒后,qRT-PCR检测各组细胞中STAT3和p21的mRNA水平,Western blot检测STAT3和p21的蛋白表达量;CCK-8、划痕愈合及Transwell实验检测各组细胞增殖及迁移侵袭能力。计量资料两组间比较采用t检验;多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与对照组相比,6-Paradol处理组中各组细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显减弱(P值均<0.05)。6-Paradol处理组细胞中STAT3、p-STAT3的表达水平较对照组显著下调(P值均<0.05),p21的表达水平显著增加(P值均<0.05),而Bcl-2、SRC和p-mTOR的表达水平无明显变化(P值均>0.05)。6-Paradol处理组中STAT3被蛋白酶水解的比例分别减少了48.66%、45.33%(t值分别为16.64、8.76,P值均<0.05);分别转染STAT3过表达质粒及沉默p21质粒后,胆管癌细胞中STAT3 mRNA水平均显著增加(t_(HCCC 9810)=2.82,t_(HUCCT1)=5.60,P值均<0.05),p21 mRNA水平均显著降低(t_(HCCC 9810)=6.84,t_(HUCCT1)=3.91,P值均<0.05)。CCK-8结果提示6-Paradol作用48 h及72 h后HCCC 9810细胞和HUCCT1细胞中STAT3过表达组的增殖率较单独给药组显著提高,p21沉默组增殖率较单独给药组也明显提高(P值均<0.05)。划痕愈合实验结果提示在过表达STAT3或沉默p21的HCCC 9810及HUCCT1细胞中,与单独给药组相比划痕愈合率明显提升(P值均<0.05)。Transwell实验结果表明,在过表达STAT3或者沉默p21表达的HCCC 9810及HUCCT1细胞中,与单独给药组相比迁移率均明显提升(P值均<0.05);在过表达STAT3或沉默p21表达的HCCC 9810及HUCCT1细胞中,与单独给药组相比侵袭率均显著提升(P值均<0.05)。结论6-Paradol通过靶向作用于STAT3-p21通路抑制胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

6-姜酮酚对结直肠癌细胞增殖、凋亡和糖酵解的影响及机制研究

目的研究6-姜酮酚对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡、糖酵解的影响及其可能的作用机制。方法采用CCK8法观察6-姜酮酚对人结肠癌细胞HCT116和人正常结肠上皮细胞NCM460细胞增殖的影响,采用平板克隆形成实验观察6-姜酮酚对HCT116细胞克隆形成的影响,流式细胞术检测HCT116凋亡细胞比率,试剂盒检测HCT116细胞葡萄糖消耗和乳酸分泌的含量,Western blot检测己糖激酶2以及STAT3和p-STAT3的表达水平。结果6-姜酮酚可以显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖能力,呈现剂量和时间依赖性;然而6-姜酮酚并没有引起NCM460细胞增殖的显著改变。6-姜酮酚能显著降低HCT116细胞的克隆形成能力,且可明显诱导HCT116细胞的凋亡。同时6-姜酮酚可降低HCT116细胞的葡萄糖消耗能力,并显著减少HCT116细胞乳酸分泌量。此外6-姜酮酚显著下调HCT116细胞中己糖激酶2的表达,也能下调p-STAT3水平。结论6-姜酮酚能够有效抑制结肠癌HCT116细胞的增殖,诱导细胞凋亡,抑制糖酵解水平,其机制可能与下调STAT3信号通路及其下游己糖激酶2的表达有关。