7-溴-6-氯-4(3H)-喹诺啉酮和5-溴-6-氯-4(3H)-喹诺啉酮的合成

以间溴苯胺(Ⅰ)为起始原料,与水合三氯乙醛反应合成了间溴肟基乙酰苯胺(Ⅱ),反应收率90.5%。在浓硫酸的作用下,Ⅱ关环得到了4溴-靛红和6溴-靛红(Ⅲ),混合物收率97.6%。6溴-靛红的氯代反应中以冰醋酸作溶剂,代替毒性较大的硝基苯,制备了6溴--5氯-靛红(Ⅳ),收率86.8%。利用双氧水将Ⅳ氧化得到了2-氨基-4溴--5氯-苯甲酸(Ⅴ)。Ⅴ在三氯氧磷的存在下与甲酰胺反应,制备了7-溴-6氯--4(3H)-喹诺啉酮,总收率12.14%。同法合成了5-溴-6氯--4(3H)-喹诺啉酮,总收率13.47%。

溴代靛红异构体含量的同时测定

采用紫外二阶导数分光光度法测定常山酮合成工艺中同分异构体6-溴靛红和4-溴靛红的含量。4-溴靛红测定的线性范围2～80mg/L，相对标准偏差0．178％，回收率99．9％～100．1％；6-溴靛红测定的线性范围2～60mg/L，相对标准偏差0．091％，回收率98．7％～100.1％。该法简便、快捷、准确、灵敏。

抗球虫药常山酮中间体7-溴-6-氯-4(3H)-喹唑啉酮的合成

7-溴-6-氯-4(3H)-喹唑啉酮是合成抗球虫药物常山酮的重要中间体。作者以硝基苯为起始原料,经溴化、还原、缩合、环化等7步反应,合成了题示物,总收率60%。在n(硝基苯)∶n(硫酸)∶n(溴酸钠)=1∶10∶1,硫酸质量分数为64%,反应温度为25℃,反应时间为1.5 h时,产率为95%。作者通过改变起始原料,降低了合成成本,使反应条件温和,为常山酮及其衍生物的合成提供了新的思路。

6BIO通过JAK1-STAT3信号转导通路抑制小鼠B16恶性黑色素瘤细胞的增殖

目的研究（2’Z，3’E）-6-溴靛玉红-3’-肟衍生物（6BIO）对小鼠B16恶性黑色素瘤细胞增殖能力的影响。方法免疫组化法检测6BIO处理不同时间（24、36、48h）后B16细胞增殖指数Ki67的表达；Western blot法检测6BIO处理不同时间（1、6、12、24h）后B16细胞中磷酸化JAK激酶1蛋白（p-JAK1）和磷酸化信号转录子和转录激活子3蛋白（p-STAT3）的表达。结果6BIO处理不同时间后B16细胞增殖指数Ki67的表达均呈时间依赖性降低（P〈0．01）。6BIO能够时间依赖性抑制B16细胞中p-JAK1和p—STAT3蛋白的表达（P〈0．01）。结论6BIO能够通过抑制JAK1-STAT3信号转导通路抑制小鼠B16恶性黑色素瘤细胞的增殖。

海洋疣荔枝螺体外抗肿瘤活性

荔枝螺是福建海域常见食用螺类,古方记载和民间长期食用证实具有良好药用价值,但国内外对其生物活性物质的研究还较少.本研究以福建海域疣荔枝螺(Thais clavigera)为研究材料,从疣荔枝螺消化腺部位获得抗癌组分E-EA-2,通过液相色谱、气质联用色谱分析发现其主要成分为6-溴靛红(6-bromoisatine),分子结构式C_8H_4BrNO_2.E-EA-2能有效抑制人乳腺癌MCF-7、人肝癌QGY-7703细胞增殖,药物浓度高于40μg/cm^3时,癌细胞存活率显著降低.E-EA-2能诱导肝癌细胞QGY-7703发生PARP蛋白剪切,加入泛caspase抑制剂使细胞存活率显著提高.同时,E-EA-2使MCF-7细胞核产生固缩,线粒体膜电位显著下降,凋亡细胞数量显著增加.E-EA-2对肝癌细胞QGY-7703的IC50为46μg/cm^3,对乳腺癌细胞MCF-7的IC50为28μg/cm^3,对癌细胞的增殖抑制作用主要是以促凋亡方式实现的.

利用斑马鱼模型研究靛玉红及其衍生物抑制血管生成作用的构效关系

目的利用斑马鱼模型考察中药单体靛玉红(Ind)及其衍生物的抑制血管生成活性及其量效关系,并为斑马鱼模型在新药构效关系研究中的应用提供实验依据。方法选用TG(VEGFR2:GFP)系血管荧光转基因斑马鱼作为筛选模型,分别用Ind及其衍生物靛玉红-3’-单肟(IMO)、6-溴-靛玉红-3’-单肟(BIO)处理斑马鱼胚胎,以节间血管数作为指标,考察药物对斑马鱼胚胎抑制血管生成的影响。结果在相同的剂量下,Ind、IMO与BIO抑制斑马鱼节间血管(ISV)生成的作用依次增强,三者都显示明显的量效关系。Ind、IMO与BIO的半数有效剂量(EC50),分别为89.10,5.188和2.686μmol.L 1。结论在靛玉红母体结构改造中,随着C-3’位肟化以及C-6位溴原子的引入,溶解性明显改善,其抑制血管生成活性也逐渐增强。

壳聚糖/海藻酸钠水凝胶顺序释放BMP/WNT信号通路激活剂促成骨细胞分化的体外实验研究

目的:通过组织工程策略构建顺序释放骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)和WNT信号通路激活剂的双层复合材料,并研究其在体外对成骨细胞分化的作用。方法:用CCK-8法、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色法和茜素红染色法分别检测BMP信号通路激活剂他克莫司(tacrolimus,FK506)和WNT信号通路激活剂6-溴靛玉红-3-肟(6-bromoindirubin-3-oxim,BIO)对前成骨细胞系MC3T3-E1增殖活性和成骨向分化的影响,筛选出最合适的药物浓度;制备壳聚糖/海藻酸钠支架材料,采用称量法测定材料的降解曲线,制备内层壳聚糖载BIO、外层海藻酸钠载FK506的支架材料,采用紫外分光光度计测定药物的释放;制备内外单载不同药物的支架材料,用ALP染色法和茜素红染色法检测载药复合材料对前成骨细胞系MC3T3-E1成骨向分化的作用,应用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测载药支架材料对前成骨细胞系MC3T3-E1成骨相关基因表达的影响。结果:在适宜范围内,FK506处理的细胞早期ALP活性较BIO处理的细胞更强,且FK506促进ALP活性最适合的质量浓度为2.0μg/mL;茜素红染色结果表明,BIO在0.1μmol/L时,细胞表现出更强的钙结节形成能力。支架材料缓慢稳定降解至第35天,期间FK506和BIO顺序释放,药物在14 d内基本释放完毕。应用载药材料浸提液ALP染色的支架材料和茜素红染色结果显示,内载BIO外载FK506的实验组相比较于其他组表现出更强的成骨向分化能力;RT-qPCR结果显示,内载BIO外载FK506的支架材料能够显著促进成骨相关基因Runx2和OCN的表达。结论:以壳聚糖/海藻酸钠为支架材料,内层壳聚糖载WNT信号通路激活剂BIO,外层海藻酸钠载BMP信号通路激活剂FK506,两者顺序释放,即先激活BMP信号通路,后激活WNT信号通路,能够在体外促进MC3T3-E1细胞的成骨向分化,为临床治疗骨缺损,促进骨再生提供新思路。