LC-MS/MS法测定6-甲基巯嘌呤含量的不确定度评定

目的:评定LC-MS/MS测定6-甲基巯嘌呤(6-MMP)含量的不确定度。方法:分析LC-MS/MS法测定6-MMP含量的不确定度来源,计算并进行合成和扩展。结果:6-MMP在低含量(2 995 pmol)和高含量(140 900 pmol)的扩展不确定度分别为275.6 pmol和11 396 pmol(P=95%,k=2)。结论:LC-MS/MS法测定人血浆中6-MMP含量的不确定度在低浓度时主要由回收率、基质效应和生物样品配制引入,在高浓度时主要由回收率和生物样品配制引入。

HPLC法测定红细胞中6-硫鸟嘌呤核苷酸和6-甲基巯嘌呤的浓度及其在炎症性肠病患者治疗药物监测中的应用

目的:建立高效液相色谱法(HPLC-UV)测定人红细胞中硫唑嘌呤代谢物6-硫鸟嘌呤核苷酸(6-TGN)和6-甲基巯嘌呤(6-MMP)的浓度,用于炎症性肠病患者治疗药物监测。方法:300μL红细胞裂解液加入二硫苏糖醇溶液(0.5 mol·L^(-1))60μL,40μL高氯酸(70%)沉淀蛋白后,酸性条件下6-TGN水解生成6-硫鸟嘌呤(6-TG),6-MMP水解反应生成4-氨基-5-(甲硫基)羰基咪唑。Diamonsil C8(2)色谱柱(200 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为甲醇/20 mmol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(含0.1%磷酸),梯度洗脱,流速0.95 mL·min^(-1),柱温30℃,6-TG、6-MMP检测波长分别为340 nm和303 nm。结果:6-TG在0.12~12μmol·L^(-1)、6-MMP在0.3~30μmol·L^(-1)浓度范围内线性关系良好,批内、批间精密度及准确度满足要求,成功用于炎症性肠病患者的治疗药物监测。结论:本文考察了影响6-TGN和6-MMP水解反应的重要因素,开发出稳健、快速、操作简便的HPLC-UV法,可用于常规监测炎症性肠病患者红细胞中6-TGN及6-MMP浓度,为硫嘌呤类药物个体化治疗提供依据。

高效液相色谱法测定人红细胞中6-甲基巯基嘌呤核糖核苷酸的浓度

目的：建立测定人红细胞6-甲基巯基嘌呤核糖核苷酸（6-MMPR）浓度的高效液相色谱法。方法：红细胞首先经70％高氯酸沉淀蛋白，并在酸性条件下100℃加热45min，6-MMPR水解生成6-甲基巯嘌呤（6MMP）后进样分析。以6-MMP定量分析6MMPR浓度。色谱柱为HypersilGOLDC1H柱（4．6mm×250mm，5gm），检测波长290nm，柱温35℃；流动相为0．02mol·L“磷酸钾缓冲液（pH3．3）乙腈（95：5）；流速0．9mL.min-1.结果：红细胞中6-MMP在80．91～3236．36pmol.（8×10-8）-1。红细胞浓度范围内线性关系良好（r2=0．9985），最低定量浓度为80．91pmol·（8×10^8）-1。红细胞。日内及日间RSD分别小于2．09％，5．61％，方法回收率为100．27％～110．79％，平均提取回收率大于70％。结论：该法操作简便快速、灵敏、专属性强，可应用于患者服用硫唑嘌呤后红细胞6一MMPR浓度的测定。