N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶新型底物的合成及在肾小管疾病诊断中的应用

目的优化N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的新型底物6-甲基-2-吡啶基-1-硫-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)的合成方法,探讨其在肾小管疾病诊断中的应用价值。方法采用活泼中间物(1-氯-1-脱氧乙酰糖)与6-甲基-2-巯基吡啶成苷合成底物;以MPT-NAG为底物,采用全自动生化仪测定糖尿病肾病、肾病综合征、肾移植患者和正常对照者尿液样本中NAG的活性。结果底物MPT-NAG的结构经元素分析和1HNMR谱鉴定,高效液相色谱(HPLC)检测纯度达99.8%。NAG活性测定结果表明,糖尿病肾病、肾病综合征和肾移植患者的尿NAG活性增高,与正常对照者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论经优化制备工艺合成获得NAG新型底物MPT-NAG,所用原料成本低、操作简便且产物得率较高,在肾小管疾病的诊断中具有临床应用价值。

MPT-NAG测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的应用价值

目的应用新型底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰--βD-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)建立检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的紫外动力学新方法,用于尿液中NAG活性测定。方法基于NAG催化水解对硝基苯-N-乙酶-β-D-氨基葡萄糖苷生成有色的对硝基酚这一反应,对缓冲液离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究。用该法测定了多种病尿样中NAG活活性。结果该法最低检出限为1.5 U/L,线性范围可达250 U/L(r=0.998 9),批内CV为<3%,批间CV<5%,回收率为101.3%。结论本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,且操作简便快速,适用于全自动生物化学分析仪操作。

液体型MPT-NAG匀相速率法试剂测定NAG活性

目的建立以6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)为底物的液体型匀相速率法试剂测定NAG活性。方法在含表面活性剂的柠檬酸缓冲液中,NAG催化MPT-NAG分解产生6-甲基-2巯基吡啶(MPT),用全自动生化分析仪监测340 nm处吸光度的变化速率,与标准液比较后计算出样本中NAG活性。结果该法线性范围为0 U/L^380 U/L,平均回收率为98.8%;批内、批间相对标准差(RSD)分别为1.2%~3.3%和2.4%~3.9%;与参考方法相比的回归方程及相关系数分别为y=1.01x+0.24,r=0.9986。结论用液体型MPTNAG匀相速率法试剂测定NAG活性,具有快速、稳定、简便等优点,适合临床应用。