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6,7-二乙酰黄芩素对四氯化碳和D-氨基半乳糖所致的急性肝损伤的保护作用 被引量:6
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作者 刘晓岩 张超逸 +1 位作者 王银叶 车庆明 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期1517-1522,1527,共7页
目的:研究6,7-二乙酰黄芩素对四氯化碳(CCl4)和D-氨基半乳糖(D-GalN)所致急性肝损伤的保护作用。方法:分别用CCl4和D-GalN诱导化学性急性肝损伤模型,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;并用苏木素-伊红(HE... 目的:研究6,7-二乙酰黄芩素对四氯化碳(CCl4)和D-氨基半乳糖(D-GalN)所致急性肝损伤的保护作用。方法:分别用CCl4和D-GalN诱导化学性急性肝损伤模型,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;并用苏木素-伊红(HE)染色处理肝脏组织切片,光镜观察病理学改变;用试剂盒测定肝线粒体中AST,SOD和GSH-PX的活性及脂质过氧化产物MDA含量。结果:在CCl4和D-GalN诱导和的小鼠肝急性损伤模型中,6,7-二乙酰黄芩素给药(50,100 mg.kg-1,ig)明显降低血清ALT,AST水平;明显改善肝脏病理组织状况;6,7-二乙酰黄芩素给药(25,50,100 mg.kg-1,ig)明显降低CCl4诱导的肝急性损伤小鼠的肝线粒体中AST活性和MDA的含量,显著增加SOD和GSH-PX的活性。结论:6,7-二乙酰黄芩对CCl4和D-GalN诱导和的小鼠肝急性损伤均具有保护作用,该作用与其增加线粒体中抗氧化酶的酶的活性、降低脂质过氧化水平有关。 展开更多
关键词 6 7-黄芩 急性肝损伤 抗氧化 脂质过氧化
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国产荧光素钠注射液中杂质的检测及结构鉴定 被引量:8
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作者 王鸿钢 邵太丽 +1 位作者 田彦伟 董金华 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期583-585,共3页
目的对国产荧光素钠注射液中的杂质进行分离及结构鉴定。方法采用RP HPLC法对荧光素钠注射液进行成分分析并用硅胶柱色谱法对主要杂质进行分离,根据质谱和核磁共振谱数据进行结构鉴定。结果和结论荧光素钠注射液中含有6羟基7磺酸基9(邻... 目的对国产荧光素钠注射液中的杂质进行分离及结构鉴定。方法采用RP HPLC法对荧光素钠注射液进行成分分析并用硅胶柱色谱法对主要杂质进行分离,根据质谱和核磁共振谱数据进行结构鉴定。结果和结论荧光素钠注射液中含有6羟基7磺酸基9(邻羧基苯基)3H口占吨3酮、6羟基9(邻乙氧基羰基苯基)3H口占吨3酮和2(2,4二羟基苯甲酰基)苯甲酸等杂质。 展开更多
关键词 荧光 6-羟基-7-磺酸基-9-(邻羧基苯基)-3H-咕吨-3- 6-羟基-9-(邻氧基羰基 苯基)-3H-咕吨-3- 2-(2 4-羟基苯甲基)苯甲酸 反相高效液相色谱法
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6,7-二乙酰黄芩素对大鼠急性肝性脑病的防治作用及机制研究 被引量:4
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作者 黄楠楠 胡鹏 +4 位作者 吴增光 杜乐梅 范栢爽 王丽莉 何新 《药物评价研究》 CAS 2020年第10期1957-1963,共7页
目的研究6,7-二乙酰黄芩素对硫代乙酰胺致大鼠急性肝性脑病模型的防治作用及机制。方法 Wistar雄性大鼠60只,随机分为对照组、模型组、乳果糖(阳性药,6 g/kg)组和6,7-二乙酰黄芩素低、中、高剂量(6.25、12.50、25.00 mg/kg)组,每天ig给... 目的研究6,7-二乙酰黄芩素对硫代乙酰胺致大鼠急性肝性脑病模型的防治作用及机制。方法 Wistar雄性大鼠60只,随机分为对照组、模型组、乳果糖(阳性药,6 g/kg)组和6,7-二乙酰黄芩素低、中、高剂量(6.25、12.50、25.00 mg/kg)组,每天ig给药1次,连续给药7 d。第5天给药结束后,除对照组外,采用硫代乙酰胺(300 mg/kg)连续ip 2 d建立大鼠肝性脑病模型。观察大鼠状态,考察大鼠肝性脑病评分与死亡率;测定各组大鼠血氨、结肠p H值、血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠肝组织病理学变化;采用ELISA试剂盒法检测大鼠脑组织中γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)、血浆中的5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)的含量;采用Western Blotting试验测定脑组织中GABA-α1蛋白的表达。结果造模48 h后,与模型组比较,6,7-二乙酰黄芩素高剂量组大鼠体质量显著升高(P<0.05),肝性脑病评分显著降低(P<0.05);各剂量组死亡率均降低;中、高剂量组血清ALT、AST、ALP和TBIL水平均显著降低(P<0.05);低、中、高剂量组血氨水平显著降低(P<0.05、0.01);中、高剂量组结肠p H显著降低(P<0.05、0.01);中、高剂量组大鼠肝脏组织病理学损伤明显改善;各剂量组脑组织中GABA水平显著降低(P<0.01);中、高剂量组血浆中5-HT水平显著降低(P<0.01);高剂量组血浆中NE水平显著降低(P<0.01);高剂量组脑组织中Glu含量显著增加(P<0.01);高剂量脑组织中GABA-α1蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 6,7-二乙酰黄芩素对肝脏具有保护作用,对急性肝性脑病具有防治作用,其机制可能与降低血氨、降低结肠p H、调节神经递质水平、抑制相关神经递质受体的表达有关。 展开更多
关键词 肝性脑病 6 7-黄芩 硫代 血氨 神经递质
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人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体外模型中黑素小体转运的观察 被引量:15
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作者 解士海 陈志强 +6 位作者 马鹏程 卜今 周武庆 崔盘根 高建明 李玲珺 范卫新 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期286-288,共3页
目的:建立人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养的体外模型,并且在模型中观察黑素小体的转运。方法:分别培养人表皮黑素细胞和角质形成细胞,用二乙酰羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记黑素细胞内黑素小体,然后将两种细胞共培养,并在... 目的:建立人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养的体外模型,并且在模型中观察黑素小体的转运。方法:分别培养人表皮黑素细胞和角质形成细胞,用二乙酰羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记黑素细胞内黑素小体,然后将两种细胞共培养,并在倒置显微镜和共聚焦显微镜下观察共培养模型中黑素小体由黑素细胞向角质形成细胞的转运。结果:培养至第3天和第7天可在倒置显微镜下观察到黑素细胞与角质形成细胞共同存活,并通过树突发生联系,在共聚焦显微镜下可直接观察到黑素小体由黑素细胞向角质形成细胞的转运。结论:成功建立黑素细胞与角质形成细胞共培养的体外模型,并利用CFDA-SE标记,在共聚焦显微镜下直接观察到黑素向角质形成细胞的转运。 展开更多
关键词 细胞 角质形成细胞 共培养 羧基荧光-琥珀亚胺酯
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mIL-21基因转染的Sp2/0瘤苗细胞的抗肿瘤机制探讨 被引量:5
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作者 褚莉莉 窦骏 +4 位作者 赵枫姝 唐权 张爱凤 王永仿 顾宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期507-510,共4页
目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿... 目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。用RT-PCR检测肿瘤组织中CXC家族趋化因子I-TAC的表达。结果:与对照组相比,瘤苗细胞膜表面MHC-Ⅰ类分子的表达明显上调。瘤苗接种组小鼠NK细胞、CTL的细胞毒活性明显增强。病理分析发现,肿瘤组织中有较多的淋巴细胞浸润并检测到干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC)的表达上调。结论:肿瘤细胞瘤苗Sp2/0-mIL21可增强小鼠的细胞免疫作用,其抗肿瘤机制可能与T细胞的增殖、活化,促进NK细胞的分化成熟,淋巴细胞向肿瘤组织浸润,以及增强NK细胞和CTL的细胞毒活性有关。 展开更多
关键词 白细胞介-21 瘤苗 羧基荧光醋酸盐琥珀亚胺酯(CFSE) 7-氨基放线菌D(7-AAD) 干扰诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC) 抗肿瘤机制
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白消一号方作用于黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型中黑素小体转运的观察 被引量:3
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作者 李杰 顾军 毕新岭 《中国中西医结合皮肤性病学杂志》 CAS 2010年第3期140-142,共3页
目的体外建立黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的培养模型,观察白消一号方对此模型中黑素小体转运的影响,探讨其治疗白癜风的药理作用。方法体外培养黑素瘤细胞和角质形成细胞,用二乙酰羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记黑素瘤细... 目的体外建立黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的培养模型,观察白消一号方对此模型中黑素小体转运的影响,探讨其治疗白癜风的药理作用。方法体外培养黑素瘤细胞和角质形成细胞,用二乙酰羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记黑素瘤细胞内的黑素小体,然后将标记的黑素瘤细胞与角质形成细胞共同培养。大鼠中药灌胃后取血清加入此模型中,在倒置显微镜下观察混合细胞模型生长及共聚焦显微镜下观察共培养模型中黑素小体由黑素瘤细胞向角质形成细胞的转运情况。结果含药血清可使黑素小体由黑素瘤细胞向角质形成细胞的转运增加。结论在共聚焦显微镜下观察到白消一号方可以促进黑素小体转运,此途径可能为白消一号方治疗白癜风的作用机制之一。 展开更多
关键词 白消一号方 瘤细胞 角质形成细胞 共培养模型 羧基荧光-琥珀亚胺酯 白癜风
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TGF-β1诱导的新生儿脐带血CD4^+CD25^+调节性T细胞增殖动力学研究 被引量:3
7
作者 唐洁 李柏青 《蚌埠医学院学报》 CAS 2008年第6期736-739,共4页
目的:探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的新生儿脐带血CD4+CD25+调节性T细胞增殖活性。方法:新生儿脐带血单个核细胞经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl es... 目的:探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的新生儿脐带血CD4+CD25+调节性T细胞增殖活性。方法:新生儿脐带血单个核细胞经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)标记后,加入TGF-β1,同时用CD3mAb激活和IL-2培养扩增。培养第4、6、8天收集细胞,用流式细胞术检测活化增殖后的CD4+CD25+、CD8+T细胞增殖动力学变化。结果:培养后第6、8天,实验组CD4+CD25+T细胞增殖指数分别为11.52、23.04,高于对照组CD4+CD25+T细胞(6.68,10.46)及实验组CD8+T细胞(4.23,5.43)。培养后第8天,实验组CD4+CD25+T细胞第8代到第10代所占的比例为52.74%,在各代中以第8代所占比例最高,而对照组CD4+CD25+T细胞第8代到第10代所占的比例为36.26%;实验组CD8+T细胞第8代到第10代所占的比例为13.54%,在各代中所占比例最高的为第2代,而对照组CD8+T细胞第8代到第10代所占的比例为29.44%。结论:TGF-β1诱导的新生儿脐带血CD4+CD25+调节性T细胞增殖活性明显强于CD8+T细胞。 展开更多
关键词 免疫 细胞 CD4^+CD25^+调节性T细胞 转化生长因子-Β1 羧基荧光酸琥珀亚胺酯 增殖
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氧化苦参碱抑制二硝基氟苯所致小鼠接触性皮炎及淋巴细胞增殖(英文) 被引量:6
8
作者 陈明亮 伍斌 +4 位作者 谢红付 张江林 杜乾君 李建国 李罗丝 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第24期3685-3689,3693,共6页
目的探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法建立DNFB所致小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射,检测小鼠耳廓肿胀度变化;利用羧基... 目的探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法建立DNFB所致小鼠ACD模型,以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射,检测小鼠耳廓肿胀度变化;利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果OMT对DNFB所致小鼠ACD呈剂量依赖性抑制作用,且与同等剂量HCT作用效果相似,但副作用明显减小;体外实验证明,在500、125和31μg/mL组OMT对小鼠淋巴细胞增殖呈剂量依赖性抑制。结论OMT对DNFB所致小鼠ACD有显著的抑制作用,而且抑制小鼠淋巴细胞增殖;OMT是一种免疫抑制剂。 展开更多
关键词 硝基氟苯变应性接触性皮炎 氧化苦参碱 羧基荧光 淋巴细胞 增殖
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利用荧光染料CFSE分选衰老细胞的探究 被引量:1
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作者 胡钦朝 姜徕博 +3 位作者 彭建敏 吴桐 程斌 夏娟 《口腔生物医学》 2020年第2期81-85,共5页
目的:探究利用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)进行衰老细胞分选的可行性。方法:利用CDK4/6抑制剂LY2835219诱导人口腔鳞癌细胞Cal27衰老,在LY2835219撤药后立即进行CFSE染色,避光培养,并在撤药后第0、2、4、6、8天进行衰老相关β... 目的:探究利用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)进行衰老细胞分选的可行性。方法:利用CDK4/6抑制剂LY2835219诱导人口腔鳞癌细胞Cal27衰老,在LY2835219撤药后立即进行CFSE染色,避光培养,并在撤药后第0、2、4、6、8天进行衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色。通过流式细胞仪分选CFSE荧光强度高的细胞,进行SA-β-gal染色。结果:CFSE荧光标记的细胞与SA-β-gal染色阳性的细胞相一致。撤药后第4、6天利用CFSE荧光进行流式分选,CFSE-high组的细胞SA-β-gal阳性率显著高于未分选组(P<0.05)。结论:利用CFSE分选衰老细胞具有可行性,可获得活的衰老细胞。 展开更多
关键词 衰老细胞 羧基荧光醋酸盐琥珀亚胺酯 衰老相关β-半乳糖苷酶
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应用流式细胞术鉴定死活结核分枝杆菌的实验研究 被引量:3
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作者 王伟亮 谢贝 +5 位作者 孟繁荣 王楠 杨瑜 刘志辉 谭守勇 张言斌 《中山大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期372-378,共7页
【目的】探讨碘化丙锭(PI)和6-羧基荧光素二乙酸酯(6-cFDA)鉴别死、活结核分枝杆菌的性能,为应用流式细胞术定量检测与分析结核分枝杆菌药物敏感性和异质性耐药方法的创建提供基础性实验依据。【方法】应用PI和6-cFDA分别对10株1麦氏浊... 【目的】探讨碘化丙锭(PI)和6-羧基荧光素二乙酸酯(6-cFDA)鉴别死、活结核分枝杆菌的性能,为应用流式细胞术定量检测与分析结核分枝杆菌药物敏感性和异质性耐药方法的创建提供基础性实验依据。【方法】应用PI和6-cFDA分别对10株1麦氏浊度结核分枝杆菌纯培养活菌悬液和其相应的1麦氏浊度85℃加热30 min的死菌悬液进行染色,应用流式细胞术检测其平均荧光强度(MFI),依据受试者工作特征曲线(ROC)确定区分死菌与活菌的MFI界值,然后对另外10株活菌悬液和10株死菌悬液进行相同实验,利用前述MFI界值进行细菌死活判定。【结果】①在确定MFI界值实验中:10份死菌悬液样本PI染色的MFI值呈非正态分布,其中位值为2 459,10份活菌悬液样本PI染色的MFI值呈正态分布,其均值为426±180,PI染色鉴定死菌的MFI界值为1 329;10份死、活菌悬液样本6-cFDA染色的MFI值均呈正态分布,其均值分别为49±4和7 144±4 512,6-cFDA染色鉴定活菌的MFI界值为1 021。②应用PI染色鉴定死菌的MFI界值和6-cFDA染色鉴定活菌的MFI界值检测另外10株活菌悬液和10株死菌悬液,其准确度分别为95%和100%,灵敏度分别为1.00和1.00,特异度分别为0.90和1.00,Yonde指数分别为0.90和1.00,阳性预测值分别为0.91和1.00,阴性预测值分别为1.00和1.00。【结论】PI染色能够良好鉴定结核分枝杆菌死菌、6-cFDA染色能够良好鉴定结核分枝杆菌活菌,基于PI、6-cFDA染色鉴定结核分枝杆菌活性将具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 流式细胞术 结核分枝杆菌 碘化丙锭 6-羧基二乙酰荧光素
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黑松菌根共生体中真菌液泡形态构架及其活力 被引量:9
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作者 郑玲 吴小芹 《植物生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期932-937,共6页
为探讨菌根共生体中菌根菌液泡结构及其活力变化对宿主生长的影响,对3种外生菌根菌黄色须腹菌(Rhizopogen luteous,简称Rl)、彩色豆马勃(Pisolithus tinctorius,简称Pt2)、美味牛肝菌(Boletus edulis,简称Be)离体菌丝及与黑松(Pinus thu... 为探讨菌根共生体中菌根菌液泡结构及其活力变化对宿主生长的影响,对3种外生菌根菌黄色须腹菌(Rhizopogen luteous,简称Rl)、彩色豆马勃(Pisolithus tinctorius,简称Pt2)、美味牛肝菌(Boletus edulis,简称Be)离体菌丝及与黑松(Pinus thunbergii)形成菌根共生体的冰冻切片进行6-羧基二乙酸荧光素(6-CFDA)染色,观察了真菌液泡形态构架及其活力的变化。结果表明,在Pt2与Rl离体菌丝中既可见单个分散的大液泡,又可见相邻液泡间由细管状连接而成的管状液泡系统,Be离体菌丝的液泡则呈细小颗粒状,密集分布于菌丝体的各个部分;Be离体菌丝的活性强于Pt2和Rl。上述3种菌根菌与黑松形成菌根共生体后,Pt2与Rl对黑松的促生效果好于Be,菌根共生体中菌套和哈氏网菌丝的活性明显强于Be,且仍可见数个液泡连接成管状系统;而在Be菌根中菌丝液泡系统不形成管状,活性较低。结果暗示,菌根共生体中真菌的管状液泡系统及其活力与对黑松的促生作用似存在一定的相关性。该研究对于进一步了解菌根的促生作用机理及菌根真菌与宿主植物的协同进化具有一定的意义。 展开更多
关键词 黑松 外生菌根 管状液泡 菌丝活力 6-羧基荧光
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CFSE标记法分析番鸭呼肠孤病毒感染对番鸭回肠淋巴细胞归巢的影响 被引量:3
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作者 李明慧 廖吕燕 +6 位作者 刘珍妮 严萍 朱正 吴春琳 李健 黄一帆 吴异健 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期159-169,共11页
旨在建立一种可靠的体外活番鸭淋巴细胞的荧光标记方法,并用于分析番鸭呼肠孤病毒感染对雏番鸭回肠淋巴细胞归巢的影响。选择活细胞荧光染剂5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE,CFSE)对分离的番鸭淋巴细胞进行标记和利用流式细... 旨在建立一种可靠的体外活番鸭淋巴细胞的荧光标记方法,并用于分析番鸭呼肠孤病毒感染对雏番鸭回肠淋巴细胞归巢的影响。选择活细胞荧光染剂5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE,CFSE)对分离的番鸭淋巴细胞进行标记和利用流式细胞术对体外标记的淋巴细胞体内示踪检测分析,并利用该方法对MDRV感染雏番鸭回肠组织的淋巴细胞数量进行流式细胞术和石蜡切片免疫荧光检测分析;结果最终确定CFSE体外标记番鸭淋巴细胞的条件为以PBS为孵育液,终浓度10μmol·L^-1,37℃30 min;试验结果表明番鸭外周血内的CFSE+淋巴细胞率基本稳定在2%~5%,CFSE^+淋巴细胞峰值出现顺序依次为脾、空肠、回肠、盲肠、十二指肠、法氏囊和胸腺;此外,感染MDRV后1~10 d MDRV组中CFSE+淋巴细胞率极显著(P<0.01)高于MOCK组,该结果与α4+淋巴细胞率和石蜡切片免疫荧光检测结果一致。结果表明本试验CFSE标记的淋巴细胞可用于体内淋巴细胞示踪,初步应用结果提示MDRV感染促进番鸭淋巴细胞向回肠归巢,为进一步阐明MDRV感染的肠道组织致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 5(6)-羧基荧光琥珀亚胺酯 番鸭 淋巴细胞 流式细胞术 归巢
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流式细胞术检测NK细胞的细胞毒作用的两种方法比较 被引量:5
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作者 蔡思齐 邓志辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期325-330,共6页
目的:比较并优化流式细胞术检测人NK细胞体外细胞毒功能的方法。方法:采用Calcein-AM释放法或CFSE/7-AAD法分别对靶细胞进行标记,按10∶1和20∶1效靶比与7例NK细胞在37℃5%CO2培养箱共培养4 h,流式细胞术测定两种不同标记方法的靶细胞... 目的:比较并优化流式细胞术检测人NK细胞体外细胞毒功能的方法。方法:采用Calcein-AM释放法或CFSE/7-AAD法分别对靶细胞进行标记,按10∶1和20∶1效靶比与7例NK细胞在37℃5%CO2培养箱共培养4 h,流式细胞术测定两种不同标记方法的靶细胞死亡率。结果:各实验组中CFSE/7-AAD法检出的靶细胞死亡率均高于Calcein-AM释放法,在低效靶比、弱细胞毒作用条件下,差异具有统计学意义。细胞毒作用较弱时,Calcein-AM释放法平均荧强度变化不显著、结果误差较大;而CFSE/7-AAD法则能更加敏感地检出靶细胞的死亡率。结论:CFSE/7-AAD法能够特异、灵敏地检出NK细胞的细胞毒活性,所获得的结果更为可靠。 展开更多
关键词 流式细胞术 细胞毒作用 NK细胞 钙黄绿甲酯 羧基荧光醋酸盐琥珀亚胺酯 7-氨基-放线菌D
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新生大鼠心祖细胞原代分离培养及鉴定
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作者 侯宾 张永春 +2 位作者 蔡新华 朱占占 田香勤 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期216-220,共5页
目的原代分离培养及鉴定新生大鼠心祖细胞(CPCs)。方法利用差速贴壁原代分离培养CPCs,形态观察和二乙酸羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)示踪法检测细胞增殖。使用Fluo-3/AM钙离子检测法,检测集落增殖细胞中钙离子浓度变化。免疫荧光... 目的原代分离培养及鉴定新生大鼠心祖细胞(CPCs)。方法利用差速贴壁原代分离培养CPCs,形态观察和二乙酸羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)示踪法检测细胞增殖。使用Fluo-3/AM钙离子检测法,检测集落增殖细胞中钙离子浓度变化。免疫荧光技术检测集落增殖细胞的干细胞标记物及心肌细胞标记物的表达。结果差速贴壁法获得细胞培养1周左右即观察到集落增殖的细胞,圆/椭圆形或不规则多边形细胞呈铺路石样排列。随培养时间延长,细胞集落增大。培养3周左右,细胞集落中细胞形态发生改变(分化),逐渐出现突起或呈梭形等,集落中出现波动/跳动的心肌细胞。用CFDA SE示踪显示,细胞呈集落增殖特点;Fluo-3/AM钙离子检测显示,集落增殖细胞中分化细胞的钙离子浓度增高。免疫荧光检测显示,不同的集落增殖细胞具异质性,存在c-kit^+/CD34^-、Nanog^+/CD34^-和c-kit^-/Nanog^-细胞集落;增殖的细胞集落存在c-kit和Gata4阳性共表达,随细胞分化出现心肌肌钙蛋白T(c Tn T)细胞集落。结论差速贴壁法原代分离培养的心祖细胞具有集落增殖和分化为心肌细胞的能力,是研究心祖细胞表面标记物、增殖和调控机制的理想材料。 展开更多
关键词 心祖细胞 集落增殖 羧基荧光-琥珀亚胺酯 原代培养 免疫荧光 大鼠
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骨髓间充质干细胞在小肠移植大鼠体内的定植研究
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作者 李富新 赵智成 +1 位作者 刘彤 王鹏志 《中华胃肠外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1158-1162,共5页
目的观察骨髓间充质干细胞(MSC)在异位小肠移植大鼠体内的定植情况。方法骨髓细胞取白1月龄的雄性Lewis大鼠,通过密度梯度离心法结合贴壁法分离和培养骨髓MSC;通过流式细胞术对MSC表面抗原(CD29、CD90、CD34和CD45)进行鉴定;应... 目的观察骨髓间充质干细胞(MSC)在异位小肠移植大鼠体内的定植情况。方法骨髓细胞取白1月龄的雄性Lewis大鼠,通过密度梯度离心法结合贴壁法分离和培养骨髓MSC;通过流式细胞术对MSC表面抗原(CD29、CD90、CD34和CD45)进行鉴定;应用终浓度为5Ixmol/L的5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)对生长良好的第3代MSC进行标记。以成年雄性近交系F344大鼠作为供体、成年雄性Lewis大鼠作为受体,建立大鼠异位小肠移植模型。术后经阴茎背静脉将CFSE标记的MSC注入受体体内,术后第7天收集冰冻病理标本,在荧光显微镜下观察MSC的定位情况。结果成功分离培养卅骨骼MSC,其表面抗原CD29、CD90、CD34和CD45的平均阳性表达率分别为96.48%、99.77%、2.41%和1.39%。CFSE能有效标记MSC,术后7d在移植小肠的间质、脾脏和胸腺可观察到大量绿色荧光,自体小肠组织仅见微量荧光,而心、肝和肺组织基本未见绿色荧光。结论骨骼MSC能成功定植于大鼠小肠移植术后的移植小肠中。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 小肠移植 5(6)-羧基荧光琥珀亚胺酯 大鼠
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