LncRNA GATA3-AS1通过调控miR-362-3p/FABP5轴抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探究长链非编码RNA GATA3反义RNA 1(lncRNA GATA3-AS1)调控微小RNA-362-3p(miR-362-3p)表达对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测宫颈癌细胞中lncRNA GATA3-AS1、miR-362-3p、FABP5表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA GATA3-AS1和miR-362-3p的靶向关系、miR-362-3p和FABP5的靶向关系;将细胞分为pcDNA-NC组、pcDNA-GATA3-AS1组、si-NC组、si-GATA3-AS1组、si-GATA3-AS1+inhibitor-NC组、si-GATA3-AS1+miR-362-3p inhibitor组、miR-NC组、miR-362-3p mimics组、miR-362-3p mimics+pcDNA-NC组、miR-362-3p mimics+pcDNA FABP5组;Western blot检测蛋白表达;EdU法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移侵袭。结果:在宫颈癌细胞系中,GATA3-AS1、FABP5均为高表达,miR-362-3p均为低表达,选择HeLa细胞进行后续实验;双荧光素酶报告基因实验表明,lncRNA GATA3-AS1和miR-802、miR-362-3p和FABP5具有靶向关系;与pcDNA-NC组比较,pcDNA-GATA3-AS1组Hela细胞EdU阳性率、迁移侵袭及MMP-2、MMP-9表达明显上升(P<0.05);与si-NC组比较,si-GATA3-AS1组HeLa细胞EdU阳性率、迁移侵袭及MMP-2、MMP-9表达明显下降(P<0.05);抑制miR-362-3p表达或过表达FABP5均可以明显逆转沉默GATA3-AS1或过表达miR-362-3p对于HeLa细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:沉默GATA3-AS1可以靶向上调miR-362-3p表达,抑制FABP5表达,抑制宫颈癌HeLa细胞增殖迁移及侵袭。

LncRNA LBX2-AS1调节miR-873-5p/G6PD轴对胃癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)瓢虫同源盒2反义RNA1(LBX2-AS1)调节微小RNA-873-5p(miR-873-5p)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)轴对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:以SGC7901细胞为研究对象,将其随机分为Control组、sh-NC组、sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组、sh-LBX2-AS1+miR-873-5p inhibitor组;qRT-PCR法检测LncRNA LBX2-AS1、miR-873-5p、G6PD的表达;MTT法和平板克隆实验检测SGC7901细胞增殖;划痕实验检测SGC7901细胞迁移;Transwell实验检测SGC7901细胞的侵袭;Western blot检测SGC7901细胞中MMP-2、PCNA、MMP-9、G6PD蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测LncRNA LBX2-AS1与miR-873-5p,miR-873-5p与G6PD之间的相互作用;小鼠荷瘤实验验证敲除LncRNALBX2-AS1对CC肿瘤生长及G6PD表达的影响。结果:sh-LBX2-AS1组SGC7901细胞中A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、LncRNA LBX2-AS1、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达低于sh-NC组、Control组,miR-873-5p表达高于sh-NC组、Control组(P<0.05);与sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组相比,sh-LBX2-AS+miR-873-5p inhibitor组miR-873-5p表达降低,A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.05)。LncRNA LBX2-AS1靶向负调控miR-873-5p,miR-873-5p靶向负调控G6PD。实验组移植瘤质量、体积、Ki-67阳性率、G6PD阳性率低于对照组(P<0.05)。结论:敲除LncRNA LBX2-AS1可能抑制GC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能是调节miR-873-5p/G6PD轴实现的。

血清长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1水平与钙化性主动脉瓣狭窄病人左心室功能的相关性研究

目的 分析血清长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)表达水平与钙化性主动脉瓣狭窄(CAS)病人左心室收缩及舒张功能的相关性。方法 于2020年1月至2021年12月,选取中国中医科学院广安门医院就诊的CAS病人129例作为CAS组[左心室射血分数(LVEF)≥50%],同期该院健康志愿者130例作为对照组。收集病人人口学资料、超声及实验室生化指标,检测血清lncRNA AFAP1-AS1表达。受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清lncRNA AFAP1-AS1诊断CAS效能。结果 对照组血清lncRNA AFAP1-AS1表达水平(1.15±0.18)低于CAS组(1.58±0.30)(P<0.001)。轻度狭窄者血清lncRNA AFAP1-AS1表达水平(1.37±0.26)低于中、重度狭窄者,而中度狭窄者lncRNA AFAP1-AS1表达水平(1.59±0.30)低于重度狭窄者(1.79±0.34)(P<0.001)。ROC结果显示,血清lncRNA AFAP1-AS1诊断CAS、重度狭窄的曲线下面积分别为0.86[95%CI:(0.82,0.91)]、0.88[95%CI:(0.82,0.94)]。CAS组AVA水平低于对照组(P<0.001),左室舒张末期内径(LVEDD)、左室舒张末期容积(LVEDV)、室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)、左房前后径(LAD)、主动脉瓣平均压差(PGmean)、主动脉瓣峰值流速(Vmax)水平高于对照组(均P<0.001)。相关性分析显示,血清lncRNA AFAP1-AS1与LVEDD、Vmax、二尖瓣口舒张早期血流速度峰值(E峰)、二尖瓣口舒张晚期血流速度峰值(A峰)、LVEDV、PGmean、LVESD呈正相关(r=0.60、0.66、0.72、0.68、0.56、0.57、0.50,均P<0.001),与LVEF、AVA呈负相关(r=-0.78、-0.62,均P<0.001)。结论 CAS病人血清lncRNA AFAP1-AS1表达水平升高,与CAS病情严重程度以及左心室舒张、收缩功能有关,并可作为无创血清标志物辅助临床诊断CAS。

血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p水平对急性心肌梗死后心律失常的预测价值

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)赖氨酰氧化酶样1-反义RNA1(LOXL1-AS1)、微小RNA(miR)-3614-5p在急性心肌梗死患者血清中的表达水平,以及对心律失常的预测价值。方法选择2021年1月—2023年1月西安交通大学第一附属医院心内科住院治疗急性心肌梗死患者148例作为研究对象(急性心肌梗死组),根据患者是否发生心律失常,分为非心律失常亚组(n=96)和心律失常亚组(n=52),另选取同期与急性心肌梗死患者一般资料相匹配的健康体检者148例为健康对照组。比较各组血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p水平;多因素Logistic回归分析急性心肌梗死后心律失常的影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)并计算曲线下面积(AUC)分析血清lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p水平对急性心肌梗死后心律失常的预测价值。结果与健康对照组比较,急性心肌梗死组lncRNA LOXL1-AS1水平升高,miR-3614-5p水平降低(t/P=16.248/<0.001、8.397/<0.001);心律失常亚组病变血管支数、lncRNA LOXL1-AS1水平高于非心律失常亚组,左心室射血分数(LVEF)、miR-3614-5p水平低于非心律失常亚组[χ^(2)(t)/P=14.315/<0.001、7.312/<0.001、3.706/<0.001、7.656/<0.001];Target Scan Human网站预测结果显示,lncRNA LOXL1-AS1与miR-3614-5p有结合位点,可能存在靶向关系;多因素Logistic回归分析结果显示,lncRNA LOXL1-AS1高、病变血管支数多是急性心肌梗死后心律失常的危险因素,miR-3614-5p、LVEF高是保护因素[OR(95%CI)=3.542(1.589~7.896)、1.527(1.081~2.156)、0.721(0.601~0.865)、0.789(0.664~0.938)];lncRNA LOXL1-AS1、miR-3614-5p及二者联合预测急性心肌梗死后心律失常的AUC为0.820、0.890、0.932,二者联合优于各自单独预测(Z/P=3.470/0.001、2.293/0.022)。结论急性心肌梗死后心律失常患者血清lncRNA LOXL1-AS1水平显著升高,miR-3614-5p水平显著降低,两者联合对急性心肌梗死后心律失常有较好的预测价值。

长链非编码RNA烟酰胺核苷酸转氢酶-反义RNA1在肺癌发生发展中的作用研究进展

肺癌是世界上致死率最高的恶性肿瘤,其主要治疗手段为外科手术、化学治疗、放射治疗、靶向治疗等。烟酰胺核苷酸转氢酶-反义RNA1(NNT-AS1)作为新发现的长链非编码RNA(lncRNA)分子,通过miR-3666/E2F2、miR-22-3p/YAP1、miR-22/FOXM1、miR-1236-3p/ATG7、miR-129-5p、丝裂原活化蛋白激酶/Slug等信号通路,与肺癌细胞的凋亡、增殖、迁移、侵袭有关,还参与介导肺癌细胞的顺铂耐药性,与肺癌的不良生存结局和较差的临床病理特征显著相关,可以为肺癌提供新的治疗靶点及预后标志物。本文就lncRNA NNT-AS1在肺癌发生发展中的作用研究进展进行综述。

子宫内膜癌组织中LncRNA GATA3-AS1、miR-362-3p表达与病理参数和预后的关系

目的探讨子宫内膜癌组织中长链非编码核糖核酸GATA结合蛋白3反义RNA1(LncRNA GATA3-AS1)、微小核糖核酸-362-3p(miR-362-3p)表达与病理参数和预后的关系。方法回顾性选取2018年1月—2021年12月安徽医科大学附属巢湖医院妇产科收治的子宫内膜癌患者101例为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测LncRNA GATA3-AS1、miR-362-3p mRNA表达水平;Pearson相关分析子宫内膜癌组织中LncRNA GATA3-AS1与miR-362-3p的相关性;Kaplan-Meier法分析LncRNA GATA3-AS1、miR-362-3p表达对子宫内膜癌患者生存预后的影响;多因素Cox回归分析子宫内膜癌患者预后的影响因素。结果子宫内膜癌患者癌组织中LncRNA GATA3-AS1表达高于癌旁组织,miR-362-3p表达低于癌旁组织(t/P=17.642/<0.001、18.153/<0.001);子宫内膜癌组织中LncRNA GATA3-AS1表达与miR-362-3p表达呈负相关(r=-0.691,P<0.001);FIGO分期ⅢA期、肌层浸润深度>1/2、有淋巴结转移的子宫内膜癌组织中LncRNA GATA3-AS1表达高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、肌层浸润深度≤1/2、无淋巴结转移,而miR-362-3p表达低于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、肌层浸润深度≤1/2、无淋巴结转移(LncRNA GATA3-AS1:t/P=16.168/<0.001、9.423/<0.001、20.066/<0.001;miR-362-3p:t/P=12.563/<0.001、8.139/<0.001、5.923/<0.001)。LncRNA GATA3-AS1高表达组3年总生存(OS)率为63.46%(33/52),低于低表达组的80.85%(38/47)(Log-rankχ^(2)=4.431,P=0.032);miR-362-3p低表达组3年OS率为62.00%(31/50),低于高表达组的81.63%(40/49)(Log-rankχ^(2)=5.240,P=0.022)。FIGO分期ⅢA期、肌层浸润深度>1/2、淋巴结转移、LncRNA GATA3-AS1高是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素[HR(95%CI)=1.637(1.135~2.362)、1.667(1.085~2.561)、1.881(1.169~3.029)、1.675(1.164~2.412)],miR-362-3p高是独立保护因素[HR(95%CI)=0.649(0.495~0.851)]。结论子宫内膜癌组织中LncRNA GATA3-AS1表达上调,miR-362-3p表达下调,且与恶性病理参数以及不良预后有关。LncRNA GATA3-AS1可能通过负性调控miR-362-3p参与子宫内膜癌进展。

长链非编码RNA GATA3-反义RNA 1调控结直肠癌细胞SW620增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)GATA3-反义RNA 1(lncRNA GATA3-AS1)是否通过靶向微小RNA-574-3p(miR-574-3p)调控结直肠癌细胞SW620的增殖、迁移和侵袭。方法采用逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测43例结直肠癌组织及其对应癌旁组织中lncRNA GATA3-AS1和miR-574-3p表达情况。根据转染物的不同,将SW620细胞分为si-NC组、si-GATA3-AS1组、miR-NC组、miR-574-3p组、si-GATA3-AS1+anti-miR-NC组、si-GATA3-AS1+anti-miR-574-3p组。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖活性,采用克隆形成实验检测细胞克隆形成数,采用细胞划痕实验检测划痕愈合率,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测迁移侵袭相关蛋白E-cadherin和N-cadherin表达。采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA GATA3-AS1与miR-574-3p的靶向关系。结果结直肠癌组织中lncRNA GATA3-AS1表达量高于癌旁组织,miR-574-3p表达量低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。si-GATA3-AS1组SW620细胞的增殖活性、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数和N-cadherin蛋白表达量均低于si-NC组,E-cadherin蛋白表达量高于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-574-3p组SW620细胞的增殖活性、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数和N-cadherin蛋白表达量均低于miR-NC组,E-cadherin蛋白表达量高于miR-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA GATA3-AS1靶向调控miR-574-3p的表达。si-GATA3-AS1+anti-miR-574-3p组SW620细胞的增殖活性、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数和N-cadherin蛋白表达量均高于si-GATA3-AS1+anti-miR-NC组,E-cadherin蛋白表达量低于si-GATA3-AS1+anti-miR-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA GATA3-AS1在结直肠癌中表达上调,可通过靶向调控miR-574-3p促进结直肠癌细胞SW620的增殖、迁移和侵袭。

类风湿关节炎患者血清lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA水平与疾病活动度指标、免疫功能及疾病严重程度的关系

目的分析类风湿关节炎患者血清中长链非编码RNA GATA结合蛋白6反义RNA1(lncRNA GATA6-AS1)和GATA结合蛋白6(GATA6)信使RNA(mRNA)水平与疾病活动度指标、免疫功能及疾病严重程度的关系。方法选取2021年4月至2023年3月我院收治的74例类风湿关节炎缓解期患者作为缓解期组,81例类风湿关节炎活动期患者作为活动期组,另选取同期体检健康者80例为对照组。收集受试者一般资料和疾病活动度指标[类风湿因子(RF)、血细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、肿瘤坏死因子(TNF)-α、28处关节疾病活动度(DAS28)评分];荧光定量PCR法检测血清中lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA水平;并检测受试者免疫功能指标[免疫球蛋白(Ig)A、IgM、IgG、CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞,计算CD4^(+)/CD8^(+)比值]。分析类风湿关节炎患者血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA、疾病活动度指标、免疫功能指标的相关性,影响类风湿关节炎患者活动期发生的危险因素,血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA对类风湿关节炎患者活动期发生的预测价值。结果对照组、缓解期组、活动期组RF、ESR、CRP、抗CCP抗体、TNF-α、DAS28评分、血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA、IgA、IgM、IgG、外周血CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值水平依次升高(P<0.05);风湿关节炎患者血清lncRNA GATA6-AS1与GATA6 mRNA呈正相关(P<0.05);血清lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA水平均与RF、ESR、CRP、抗CCP抗体、TNF-α、DAS28评分、IgA、IgM、IgG、CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞和CD4^(+)/CD8^(+)比值呈正相关(P<0.05);RF、ESR、CRP、抗CCP抗体、TNF-α、DAS28评分、lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA均是影响类风湿关节炎患者活动期发生的独立危险因素(P<0.05);血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA、二者联合预测类风湿关节炎患者活动期发生的曲线下面积(AUC)分别为0.843、0.861、0.928;二者联合预测的AUC高于血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA水平各自单独预测的AUC(P<0.05)。结论类风湿关节炎患者血清中lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA呈现高水平,且活动期患者二者水平更高,二者与疾病活动度指标、免疫功能以及疾病严重程度密切相关,可以很好地预测类风湿关节炎患者活动期的发生。

血清IGF-1、lncRNA TCL6在重度子痫前期孕妇中的表达及其对不良妊娠结局的预测价值

目的探讨血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、长链非编码RNA T细胞白血病/淋巴瘤基因6(lncRNA TCL6)在重度子痫前期(SPE)孕妇中的表达及对不良妊娠结局的预测价值。方法选取2021年1月至2023年1月该院收治的124例SPE患者为SPE组,另选取同期100例健康孕妇为对照组,根据是否发生不良妊娠结局将SPE患者分为结局不良亚组47例和结局良好亚组77例。采用酶联免疫吸附试验与实时荧光定量聚合酶链反应分别检测血清IGF-1和lncRNA TCL6水平。采用多因素Logistic回归分析SPE孕妇不良妊娠结局的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IGF-1、lncRNA TCL6水平对SPE孕妇不良妊娠结局的预测价值。结果与对照组比较,SPE组血清IGF-1水平降低,lncRNA TCL6水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与结局良好亚组比较,结局不良亚组血清IGF-1水平降低,24 h尿蛋白定量及lncRNA TCL6水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,24 h尿蛋白定量升高(OR=1.155,95%CI:1.031~1.294)和lncRNA TCL6(OR=1.206,95%CI:1.110~1.310)水平升高为SPE孕妇不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.05),IGF-1(OR=0.922,95%CI:0.883~0.964)水平升高为SPE孕妇不良妊娠结局独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清IGF-1、lncRNA TCL6水平联合检测预测SPE孕妇不良妊娠结局的曲线下面积为0.888(95%CI:0.819~0.937),大于血清IGF-1、lncRNA TCL6水平单独预测的AUC[0.813(95%CI:0.733~0.878)、0.803(95%CI:0.722~0.869)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清IGF-1和lncRNA TCL6在SPE孕妇不良妊娠结局预测中具有潜在价值,二者联合检测对SPE孕妇不良妊娠结局的预测价值较高。

长链非编码RNA OTUD6B-AS1对肺腺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探讨lncRNA OTUD6B-AS1对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法体外培养肺腺癌A549细胞系,瞬时转染OTUD6B-AS1和空载质粒构建过表达和对照细胞模型,分为OTUD6B-AS1过表达组和空载质粒组(NC组)。通过qRT-PCR实验验证OTUD6B-AS1的转染效率;采用CCK-8实验检测OTUD6B-AS1对肺腺癌细胞增殖活性的影响,采用Transwell法检测OTUD6B-AS1对肺腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果qRT-PCR检测显示,与NC组相比,过表达组的OTUD6B-AS1表达量显著增高(P<0.05);CCK-8细胞活性检测结果显示,OTUD6B-AS1过表达组的肺腺癌A549细胞增殖活性较NC组显著降低(P<0.05);Transwell侵袭实验结果表明,OTUD6B-AS1过表达组细胞迁移和侵袭能力均显著低于NC组(P<0.05)。结论在肺腺癌细胞A549中lncRNA OTUD6B-AS1的过表达可以抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭的能力。

长链非编码RNA脑源性神经营养因子-反义物和信号素3B-反义物1在胃癌病人中的表达及联合超声检查在胃癌诊断中的应用

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)脑源性神经营养因子-反义物(BDNF-AS)和信号素3B-反义物1(SEMA3B-AS1)在胃癌病人中的表达及联合超声检查在胃癌诊断中的应用价值。方法2021年1月~2023年2月收治的118例胃癌病人为胃癌组,同期113例胃部良性病变者为良性病变组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清BDNF-AS和SEMA3B-AS1表达水平,并以平均值分为BDNF-AS高表达组(55例)和BDNF-AS低表达组(63例)、SEMA3B-AS1高表达组(57例)和SEMA3B-AS1低表达组(61例);Kappa检验分析超声诊断与临床病理诊断的一致性;受试者工作特征曲线(ROC)分析血清BDNF-AS和SEMA3B-AS1联合超声对胃癌的诊断价值。结果与良性病变组比较,胃癌组血清BDNF-AS和SEMA3B-AS1水平均明显下降(t=10.205,t=9.590,P<0.05);BDNF-AS和SEMA3B-AS1在肿瘤直径≥3 cm、浸润深度较深、分化程度较低、发生淋巴结转移的胃癌病人中表达水平明显较低(P<0.05);Kappa检验结果显示,超声诊断与临床病理诊断的一致性较高(Kappa值=0.723,P<0.05);ROC结果显示,血清BDNF-AS、SEMA3B-AS1水平和超声诊断胃癌的AUC分别为0.848、0.835、0.861,三者联合诊断的AUC(0.949)显著大于血清BDNF-AS单独诊断的AUC(Z=4.713,P=0.000)、血清SEMA3B-AS1水平单独诊断的AUC(Z=4.112,P=0.0015)和超声诊断的AUC(Z=3.350,P=0.0008),联合诊断的敏感度、特异度优于三者单独诊断。结论血清BDNF-AS和SEMA3B-AS1联合超声检查在胃癌的诊断上具有较高的应用价值。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-16-5p/CREB1轴减轻缺氧/复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧6 h),然后将H/R组细胞分别进行转染,分为oe-NC组、oe-FGD5-AS1组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic-NC组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测细胞中FGD5-AS1、miR-16-5p、CREB1的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;CCK-8法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶活性实验分别验证miR-16-5p和FGD5-AS1、CREB1的靶向关系。结果:与对照组比较,H/R组细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-16-5p mRNA水平、细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组和oe-NC组比较,转染过表达FGD5-AS1基因的H9c2细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达增高,凋亡率及miR-16-5p、cleaved Caspase-3、Bax水平下降(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了FGD5-AS1、CREB1均与miR-16-5p有结合位点。结论:过表达FGD5-AS1可能通过靶向下调miR-16-5p表达,上调CREB1表达,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。

血清miRNA-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1水平与脑胶质瘤患者术后复发的关系

目的检测脑胶质瘤患者的血清微小RNA(miRNA)-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1(A1BG-AS1)水平,并分析其与患者术后复发的关系。方法选取94例接受手术治疗的脑胶质瘤患者和84例健康体检者,分别作为研究组和对照组。术后所有脑胶质瘤患者均随访2年,依据是否复发分为复发组(n=71)和非复发组(n=23)。采用聚合酶链反应(PCR)检测血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平,比较研究组和对照组、复发组和非复发组的血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平。采用Spearman相关分析法分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1单独及联合检测对脑胶质瘤患者术后复发的评估价值。结果研究组患者血清miRNA-199a-5p水平明显低于对照组,血清A1BG-AS1水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。复发组患者血清miRNA-199a-5p水平低于非复发组,血清A1BG-AS1水平高于非复发组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。血清miRNA-199a-5p水平与脑胶质瘤患者术后复发呈负相关(r=-0.382,P﹤0.05),血清A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发呈正相关(r=0.423,P﹤0.05)。ROC曲线显示,血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1联合检测评估脑胶质瘤患者术后复发的AUC和灵敏度均高于二者单独检测。结论脑胶质瘤患者血清miRNA-199a-5p水平降低,血清A1BG-AS1水平升高,且其表达水平与脑胶质瘤患者术后复发有关,联合检测对术后复发具有较好的评估价值。

LncRNA DGUOK-AS1调控miR-204-5p对肝癌细胞MHCC97-H增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)脱氧鸟苷激酶反义RNA(DGUOK-AS)1调控miR-204-5p对肝癌细胞MHCC97-H增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析肝癌组织中DGUOK-AS1和miR-204-5p表达量。双荧光素酶报告实验确定DGUOK-AS1与miR-204-5p靶向关系,RT-qPCR检测干扰DGUOK-AS1表达后MHCC97-H细胞miR-204-5p表达量。集落形成实验分析DGUOK-AS1和miR-204-5p表达对MHCC97-H细胞增殖的影响。流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡。Transwell实验分析细胞迁移和侵袭。结果 与癌旁组织比较,肝癌组织中DGUOK-AS1表达量明显上调,而miR-204-5p表达量明显下调(P<0.05)。miR-204-5p是DGUOK-AS1的靶基因。干扰DGUOK-AS1表达后miR-204-5p表达量显著升高(P<0.05)。干扰DGUOK-AS1表达后MHCC97-H细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S期细胞比例显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与干扰DGUOK-AS1表达比较,同时干扰DGUOK-AS1和miR-204-5p表达后MHCC97-H细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、S期细胞比例显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论 干扰DGUOK-AS1通过靶向miR-204-5p可抑制肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。

长链非编码RNA alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1靶向微小RNA-106b-5p调控氧化型低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1(A2M-AS1)靶向微小RNA(miR)-106b-5p对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响。方法用ox-LDL诱导人脑微血管内皮细胞设为ox-LDL组,正常培养细胞为对照(Ctrl)组;A2M-AS1过表达(pcDNA-A2M-AS1组)、空载体(pcDNA组)、miR-106b-5p抑制剂(anti-miR-106b-5p组)、阴性对照(anti-miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与对照mimic NC(miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与miR-106b-5p模拟物(miR-106b-5p mimics组)转染细胞后加ox-LDL处理,n=9;Real-time PCR检测A2M-AS1与miR-106b-5p表达;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测A2M-AS1与miR-106b-5p靶向关系;Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果与Ctrl组比较,ox-LDL组A2M-AS1表达水平、SOD和CAT活性、Bcl-2蛋白水平降低,miR-106b-5p表达水平、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.05);过表达A2M-AS1或干扰miR-106b-5p降低ox-LDL诱导细胞后MDA水平、凋亡率与Bax蛋白水平,升高SOD、CAT活性和Bcl-2蛋白水平(P<0.05);A2M-AS1靶向miR-106b-5p;上调miR-106b-5p逆转过表达lncRNA A2M-AS1对ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的作用。结论A2M-AS1通过靶向miR-106b-5p减轻ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤。

LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2对肺间质细胞增殖、迁移及侵袭的作用

目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。

长链非编码RNA SBF2-AS1通过miR-372-3p/CDK6轴调控肝癌细胞侵袭及增殖

目的探讨长链非编码RNA SET结合因子2反义RNA1(lnc RNA SBF2-AS1)调控mi R-372-3p/细胞分裂蛋白激酶6(CDK6)轴对肝癌细胞侵袭及增殖的影响。方法以Bel7402和SK-hep1细胞为研究对象,上调或下调SBF2-AS1、miR-372-3p及CDK6表达水平,实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞中miR-372-3p及CDK6表达水平。双荧光素酶报告基因实验分别验证SBF2-AS1和miR-372-3p、miR-372-3p和CDK6靶向关系。CCK-8、集落形成实验、Transwell、细胞周期实验及流式细胞术分析细胞增殖、集落形成、迁移/侵袭能力、细胞周期活动及凋亡。结果SBF2-AS1在肝癌细胞中高表达(P<0.05)。敲降SBF2-AS1后,Bel7402和SK-hep1细胞侵袭、增殖能力降低(P<0.05)。敲降miR-372-3p后,Bel7402细胞侵袭、增殖能力升高,同时敲降SBF2-AS1后,可反转上述效应(P<0.05)。miR-372-3p靶向CDK6并抑制后者的表达,过表达SFB2-AS1,可反转上述效应(P<0.05)。过表达CDK6,可以逆转过表达miR-372-3p对Bel7402细胞侵袭及增殖的抑制。结论lncRNA SBF2-AS1通过miR-372-3p正向调控CDK6的表达,改变肝癌细胞的周期活动,影响肝癌细胞的增殖、侵袭能力。

GAS6-AS1调节miR-370-3p/SPATA2轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT的影响

目的:探讨长链非编码RNA GAS6反义RNA1(long non-coding RNA GAS6 antisense RNA1, lncRNA GAS6-AS1)调节miR-370-3p/精子发生相关蛋白2 (spermatogenesis-associated protein 2, SPATA2)轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western blot分别检测癌旁组织、卵巢癌组织、人正常卵巢上皮细胞IOSE80及卵巢癌细胞系HO-8910、SKOV3、A2780中GAS6-AS1、miR-370-3p及SPATA2蛋白表达。将SKOV3细胞分为:对照组(NC组)、 si-NC组、si-GAS6-AS1组、mimic NC组、miR-370-3p mimic组、si-GAS6-AS1+inhibitor NC组、si-GAS6-AS1+miR-370-3p inhibitor组,qRT-PCR检测细胞中GAS6-AS1、miR-370-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot检测SPATA2、细胞周期素D1(CyclinD1)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)表达;双荧光素酶报告基因实验检测GAS6-AS1与miR-370-3p、 miR-370-3p与SPATA2的关系。结果:在卵巢癌组织和细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白高表达,miR-370-3p低表达,且在SKOV3细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白表达量最高,miR-370-3p表达水平最低,因此,选择SKOV3细胞为后续研究对象。与NC组、si-NC组比较,si-GAS6-AS1组GAS6-AS1、OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与NC组、mimic NC组比较,miR-370-3p mimic组OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);miR-370-3p inhibitor减弱了沉默GAS6-AS1对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的抑制及对细胞凋亡的促进作用。GAS6-AS1与miR-370-3p、miR-370-3p与SPATA2存在靶向调控关系。结论:沉默GAS6-AS1通过上调miR-370-3p来抑制SPATA2表达,从而抑制SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,并促进细胞凋亡。

术前lncRNA TPT1-AS1和整合素β3水平与结直肠癌根治性切除术后复发转移的相关性

目的探讨术前血清长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1-反义RNA1(lncRNA TPT1-AS1)、整合素β3(ITGB3)水平与结直肠癌病人根治性切除术后复发转移的相关性。方法选择2019年3月至2020年3月在海南省第二人民医院进行结直肠癌根治性切除术的90例病人为结直肠癌组,选择同期在海南省第二人民医院进行健康体检的人员90例作为对照组,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA TPT1-AS1表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清ITGB3水平,搜集病人资料,Pearson法分析lncRNA TPT1-AS1与ITGB3水平相关性,Cox回归模型分析影响结直肠癌根治性切除术后复发转移的危险因素。结果与对照组比较,结直肠癌组病人术前血清lncRNA TPT1-AS1表达水平(2.62±0.35比1.05±0.12)、ITGB3水平[(236.24±30.62)ng/L比(185.47±25.38)ng/L]显著升高(P<0.05);结直肠癌病人血清lncRNA TPT1-AS1和ITGB3水平呈正相关性(r=0.65,P<0.05);不同分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移及血管侵犯的病人血清lncRNA TPT1-AS1、ITGB3水平比较差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA TPT1-AS1、ITGB3高表达组结直肠癌根治术后复发转移率显著高于低表达组(P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、血管侵犯、lncRNA TPT1-AS1、ITGB3是影响结直肠癌病人术后复发转移的危险因素(P<0.05)。结论结直肠癌病人根治性切除术前血清lncRNA TPT1-AS1、ITGB3水平升高,与术后复发转移相关,可能成为结直肠癌预后判断的血清标志物。

长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1-反义RNA1在神经胶质瘤细胞中的表达及对其增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤蛋白翻译调节因子1-反义RNA1(TPT1-AS1)对神经胶质瘤细胞U251增殖、侵袭的影响。方法将U251分为空白对照组、阴性转染组、TPT1-AS1过表达组,空白对照组不做处理,另两组进行相应质粒的转染,转染48 h后比较各组U251细胞中TPT1-AS1表达水平;MTT法测定各组U251细胞的存活率;流式细胞仪测定各组U251细胞的凋亡能力;Transwell小室实验检测各组U251细胞侵袭能力;划痕实验检测各组U251细胞迁移能力;Western blot检测各组U251细胞凋亡[半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bax、Bcl-2]及侵袭[基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9]相关蛋白表达情况。结果阴性对照组与空白对照组比较,TPT1-AS1表达、细胞存活率、细胞凋亡率、侵袭细胞数、划痕愈合率及Caspase-3、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达,差异无统计学意义(P>0.05)。TPT1-AS1过表达组TPT1-AS1表达水平、细胞凋亡能力、Caspase-3、Bax蛋白表达均高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);TPT1-AS1过表达组Bcl-2蛋白表达、细胞存活率、侵袭、迁移能力、侵袭相关蛋白表达均低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TPT1-AS1在U251中呈现低表达,高表达的TPT1-AS1可抑制神经胶质瘤细胞的增殖及侵袭能力。