GCNT3通过PI3K/Akt/mTOR和RhoA/ROCK/Cofilin途径促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭(英文)

β-1,3-半乳糖-O-糖基-糖蛋白β-1,6-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(β-1,3-galactosyl-O-glycosyl-glycoproteinβ-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase,GCNT3)是黏液蛋白质生物合成中不可缺少的一类N-乙酰葡萄糖转移酶。越来越多的证据表明,GCNT3的异常表达与肿瘤的侵袭以及病人的生存率有关,然而相关的研究仍较少报道。本研究旨在揭示GCNT3在调控肝细胞癌进程中的潜在机制。本研究首先利用高通量基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)和癌症基因组图谱(Cancer Genome Atlas databases,TCGA)数据库分析肝癌和正常组织中GCNT3的mRNA表达水平,结果表明,肝癌组织中GCNT3的mRNA表达水平高于正常组织(P≤0.001)。同时利用免疫组化、Western印迹进一步分析了肝癌组织、癌旁组织、正常组织中GCNT3蛋白的表达,发现有30%肝癌组织GCNT3表达水平高于癌旁组织和正常组织。随后,在肝癌细胞系HCCLM3和Huh7细胞中,采用CCK-8、平板克隆、划痕实验、Transwell实验分析GCNT3对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,结果显示,敲低GCNT3可抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而过表达GCNT3发挥相反作用。细胞周期和Western印迹结果显示,GCNT3调控G_(0/)G_1期关键蛋白质的表达来促进肝癌细胞周期G_1/S的转换。进一步探究发现,GCNT3可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进细胞增殖;以及GCNT3上调RhoA/ROCK/Cofilin通路关键蛋白质的表达来促进F-肌动蛋白(F-actin)的形成,从而参与细胞的迁移和侵袭。总之,本研究通过对GCNT3在肝癌细胞中的功能分析,初步证明,GCNT3与肝癌细胞增殖、迁移和侵袭中的功能有关,证实了GCNT3在肝癌临床治疗中的潜在价值,为肝癌治疗和诊断提供了新思路。

MiR-338-3p靶向调控B3GNT3抑制肺腺癌的侵袭和转移

肺腺癌是目前肺癌最常见的组织学亚型,约占肺肿瘤的一半。MicroRNAs(miRNAs)是非常短(20~24个核苷酸)的非编码RNA,miRNA的异常表达与多种人类肿瘤的进展和转移有关。本研究通过GEO数据集GSE19945查询获得肺癌中降低最显著的miRNA即miR-338-3p,并通过Kaplan-Meier Plotter(Kmplot)网站查得低表达水平的miR-338与肺腺癌病人的不良预后有关。利用qRT-PCR检测发现,miR-338-3p在肺腺癌细胞中表达降低(P<0.05)。利用GV369-miR-338过表达慢病毒上调A549细胞中的miR-338,利用qRT-PCR检测过表达效率。Transwell细胞侵袭实验发现,miR-338的上调可抑制肺腺癌细胞的侵袭能力(P=0.0007)。基因预测网站分析获得miR-338-3p的靶基因-B3GNT3(β1,3-N-acetylglucosaminyltransferase-3),生物信息学数据库分析发现,B3GNT3在肺腺癌组织中升高。双荧光素酶分析验证miR-338和B3GNT3可靶向结合(P<0.05)。Western印迹结果证明,过表达miR-338后B3GNT3蛋白的表达下降,且差距具有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验证明,miR-338-3p可通过靶向调控B3GNT3抑制肺腺癌细胞的侵袭和转移(P<0.05)。综上,miR-338-3p在肺腺癌组织和细胞中表达降低,且miR-338-3p可靶向调控B3GNT3抑制肺腺癌的侵袭和转移。

胰腺癌组织中miR-338-3p、B3GNT3表达变化及意义

目的探讨胰腺癌组织中miR-338-3p、β-1,3-N-乙酰氨基葡萄糖氨基转移酶3(B3GNT3)的表达变化及意义。方法选择行腹腔镜切除手术的胰腺癌患者92例,术中取癌组织及其癌旁组织(距肿瘤组织边缘≥5 cm),采用qRT-PCR检测组织中miR-338-3p、B3GNT3 mRNA表达,用Pearson相关分析二者相关性,分析二者与患者临床病理特征的关系;对患者进行随访,统计患者3年生存率,分析miR-338-3p、B3GNT3 mRNA表达与胰腺癌患者生存的关系;Cox回归分析影响胰腺癌患者生存的危险因素。结果与癌旁组织比较,胰腺癌组织中miR-338-3p表达低,B3GNT3 mRNA表达高(P均<0.05)。胰腺癌组织中miR-338-3p表达与B3GNT3 mRNA表达呈负相关(r=-0.571,P<0.05)。新发糖尿病、低中分化、TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移的胰腺癌患者miR-338-3p低于无新发糖尿病、高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生淋巴结转移患者(P均<0.05),低中分化、TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移的胰腺癌患者B3GNT3 mRNA表达高于高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生淋巴结转移患者(P均<0.05)。根据miR-338-3p、B3GNT3 mRNA相对表达量的均值将患者分为miR-338-3p高表达组、miR-338-3p低表达组,B3GNT3高表达组、B3GNT3低表达组。miR-338-3p低表达组3年生存率低于miR-338-3p高表达组,B3GNT3低表达组3年生存率高于B3GNT3高表达组(P均<0.05)。有淋巴结转移、低表达miR-338-3p、高表达B3GNT3是胰腺癌患者术后3年死亡的危险因素(P均<0.05)。结论胰腺癌组织中miR-338-3p低表达、B3GNT3 mRNA高表达,这与胰腺癌恶性生物学行为及预后不良有关。

β3GnT8/β3GalT7催化活性的研究

目的进一步验证β1,3半乳糖基转移酶(β3GalT7)的催化功能。方法将重组表达载体pGEX-6p-1-β3GnT8/GalT7转化BL21大肠杆菌,经IPTG诱导表达后,得到GST-β3GnT8/GalT7融合蛋白,分别进行β3GalT7和β3GnT8反应体系的酶促反应,利用高效液相色谱(HPLC)进行检测。结果HPLC检测结果表明,β3GalT7同时具有β3GalT7和β3GnT8的活性。结论β3GalT7具有双重酶活性,拟初步重命名为β3GnT8/β3GalT7。