肝素修饰酶6-O-磺基转移酶的高产量表达

在化学酶法合成肝素过程中,肝素修饰酶6-O-磺基转移酶(6-OST)在肝素分子中N-乙酰基葡糖胺的C6羟基上进行硫酸化,以达到与肝素相似的硫酸化水平。构建的重组蛋白MBP-6-OST-3的纯化结果表明有较多杂蛋白条带,且蛋白浓度较低。利用定点突变原理设计引物,通过PCR扩增得到突变质粒pMAL-c2X-6-OST-3-linker-His。将突变质粒转化至大肠杆菌Rosetta-gamiB(DE3),实现了MBP-6-OST-3-His蛋白的表达。利用镍柱亲和层析系统将MBP-6-OST-3-His蛋白纯化,并通过SDS-PAGE电泳分析蛋白表达情况。该研究获得了具有高表达、高纯度的MBP-6-OST-3-His蛋白,这为获得高纯度的6-OST-3提供了可靠的方法以及为其应用于化学酶法合成肝素的研究提供了理论基础。

miR-23a和HS6ST3在妊娠期糖尿病巨大儿中的表达意义及与脂肪细胞因子的关系研究

目的 探究微小RNA-23a(miR-23a)和硫酸乙酰肝素6-O-磺基转移酶3(HS6ST3)在妊娠期糖尿病巨大儿中的表达意义及与脂肪细胞因子中的脂联素(APN)和补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白-3(CTRP3)水平的关系。方法 将足月分娩的100例妊娠结局为巨大儿的妊娠期糖尿病产妇纳入试验组,另选取同期妊娠结局为巨大儿的无妊娠期糖尿病产妇100例纳入对照组。待两组产妇分娩后,于胎盘母体面脐带的对侧取约1 cm3组织块,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)扩增技术检测miR-23a和HS6ST3基因表达情况,采用酶联免疫吸附法检测脂肪细胞因子APN和CTRP3水平。对比两组巨大儿胎盘组织中miR-23a、HS6ST3以及脂肪细胞因子(APN、CTRP3)的表达水平;分析miR-23a、HS6ST3与脂肪细胞因子的相关性。结果 试验组巨大儿胎盘组织中miR-23a(1.35±0.22)、HS6ST3(3.85±0.78)均显著高于对照组的(0.85±0.21)、(0.89±0.26),存在统计学差异(P<0.05)。试验组巨大儿胎盘组织中APN(17.35±4.41)μg/ml和CTRP3(109.55±10.77)ng/ml均显著高于对照组的(12.87±3.61)μg/ml、(80.45±10.44)ng/ml,存在统计学差异(P<0.05)。Pearson相关分析显示,巨大儿胎盘组织中miR-23a、HS6ST3均与APN、CTRP3呈正相关(P<0.001)。结论 妊娠期糖尿病巨大儿的胎盘组织中miR-23a、HS6ST3表达水平均明显升高,且脂肪细胞因子(APN、CTRP3)水平也异常升高,且miR-23a、HS6ST3基因与脂肪细胞因子之间呈正相关。