6-O-羧甲基壳聚糖对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β_1表达的影响

目的:观察不同浓度6-O-羧甲基壳聚糖(6-O-CMC)对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibrob lasts,HSFBs)转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)蛋白及mRNA表达的影响,在分子水平上探讨其抑制增生性瘢痕生长的作用机制。方法:体外培养人HSFBs,选取第3～5代细胞进行下一步实验。实验分组采用含不同浓度6-O-CMC(0,100,200,400μg/ml)的DMEM培养液分别进行培养。培养24h后,显微镜下观察各组HSFBs形态及生长情况。收集细胞培养上清,运用双抗体夹心ELISA法检测各组TGF-β1蛋白表达水平。运用荧光定量RT-PCR技术检测各组TGF-β1 mRNA表达水平。结果:与空白组相比,三个药物剂量组HSFBs TGF-β1蛋白及mRNA的表达均减少(P<0.05),药物浓度越高表达量越低(P<0.05),且TGF-β1蛋白及mRNA表达的变化具有一致性。结论:6-O-CMC有抑制体外培养的人HSFBs TGF-β1表达的作用,初步探讨了6-O-CMC发挥抑制增生性瘢痕生长的作用机制,为羧甲基壳聚糖类药物的开发利用提供理论依据。

6-O-羧甲基壳聚糖的硫酸酯化及其产物的抗凝血活性

以甲壳素为原料,采用低温羧甲基化反应制备C6位取代羧甲基甲壳素(6-O-CMCH),然后脱去C2位乙酰基得到C6位取代羧甲基壳聚糖(6-O-CMCS),最后将6-O-CMCS与氯磺酸-浓硫酸反应,通过控制反应条件,获得了取代位置和取代度部分可控的硫酸酯化6-O-CMCS。利用电位滴定、元素分析、FT-IR、1 H-NMR测试分析各级产物的化学结构,并测定终产物活化部分的凝血活酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)及血浆凝血酶时间(TT)。实验结果表明:硫酸酯化6-O-CMCS与高分子量肝素的结构和抗凝血活性类似,其抗凝血活性机理主要体现在对内源性和共同凝血途径的抑制。

白介素6在甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶治疗大鼠牙周炎中的变化

目的考察炎性因子白介素6(IL-6)在甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶等制剂局部治疗大鼠牙周炎过程中牙周组织和全血的变化情况。方法采用上颌双侧第一磨牙细丝结扎加接种牙龈卟啉单胞菌制备大鼠牙周炎模型。药物治疗:72只牙周炎SD大鼠,每组18只,MODEL组(阳性对照,不涂布任何药物),M/CMCS组(涂布甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶),PERIO组(涂布盐酸米诺环素软膏),MNZ组(涂布甲硝唑凝胶)。造模成功后每天在结扎丝处分组局部涂药2次。在治疗后的第1周,第3周和第5周,4组分别取6只大鼠,麻醉后采集龈沟液和全血样本,上颌骨及牙周组织块,供ELISA免疫组化实验。结果龈沟液和牙周软组织的IL-6浓度,M/CMCS组、PERIO组和MNZ组在第1周、第3周和第5周较MODEL组同期均明显下降(P<0.05);M/CMCS组和PERIO组在3个时间点均分别比MNZ组低(P<0.05),而在第5周时,M/CMCS组比PERIO组低(P<0.05)。牙槽骨的IL-6浓度,与MODEL组比较,M/CMCS组、PERIO组和MNZ组在第1、3、5周各时间点均降低(P<0.05),M/CMCS组与PERIO组的值在第1、3、5周,均分别较MNZ组低(P<0.05)。血清IL-6浓度,M/CMCS组、PERIO组和MNZ组在第1,3,5周时间点分别较MODEL组降低(P<0.05)。同一组内不同组织样本的IL-6浓度,M/CMCS组、PERIO组和MNZ组,龈沟液、牙周软组织和牙槽骨的IL-6浓度在第3、5周时,均分别低于第1周(P<0.05);比较牙周组织与牙槽骨的IL-6浓度,M/CMCS组3个不同时间点差异无统计学意义(P>0.05),PERIO组牙周组织在第3周和第5周时均分别高于牙槽骨(P<0.05),MNZ组第3周时牙周组织的值高于牙槽骨(P<0.05)。MODEL组的牙周组织毁损严重,牙槽骨严重吸收;M/CMCS组牙龈形态较完整,未见明显牙槽骨吸收;PERIO组和MNZ组存在不同程度的牙周损伤和牙槽骨吸收。牙周组织IL-6平均光密度(MOD)值,M/CMCS组、PERIO组和MNZ组在第1、3、5周各相同时间点均比MODEL组明显下降(P<0.05),在第5周时,M/CMCS组低于MNZ组和PERIO组(P<0.05)。结论甲硝唑羧甲基壳聚糖凝胶可以显著减少牙周炎模型大鼠的相关组织IL-6表达,抑制牙槽骨吸收,其效应可能与M/CMCS能够抑制炎性细胞因子IL-6的分泌有关。

聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子的制备及其对培养猪肝细胞的影响

目的:制备聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子并探讨其对培养猪肝细胞形态和功能的影响．方法:以聚乳酸和O-羧甲基壳聚糖为基质材料,采用超声波法制备了聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子,用原子力显微镜对其进行了物理表征,用X射线光电子光谱法对其表面的化学结构进行了表征．用聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子进行原代猪肝细胞培养,并以普通培养作为对照组．观察培养后1 wk内肝细胞的形态和功能变化．结果:聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子制备成功,原子力显微镜下其直径300-500 nm．经过XPS光谱分析显示,C,O,N的比例分别为72．51％,23．69％,3．80％．普通培养的肝细胞,48 h后逐渐失去多边形特征．而与PLA-O- CMC共培养48 h后,肝细胞形成细胞黏附聚集的球形体,大部分肝细胞重建细胞极性,呈现较典型、均匀的多边形形态特征．培养后 24 h,3 d和5 d时,纳米细胞培养组ALB含量高于普通培养组(3．53±0．052,3．48±0．075,3．57 ±0．137g/L vs 3．10±0．179,3．17±0．186,3．10 ±0．219 g／L,均P<0．05);3,5,7 d时,纳米细胞培养组ALT水平明显低于普通组(15．33± 13．05,8．84±8．87,7．00±5．22 nkat／L vs 24．17 ±20.35,16．17±27．49,15．50±11．95 nkat／L, 均P<0．05),而BUN含量虽然有所升高,但是不显著(P>0．05)．结论:聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子是肝细胞培养的良好材料．

载肝细胞生长因子聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子制备、表征及其对培养大鼠肝细胞活力的影响

背景:肝细胞生长因子半衰期短,且不具有靶向性。成熟肝细胞体外大量培养及活力维持难度较大,严重制约肝细胞移植及生物人工肝的临床应用。目的:制备并表征载肝细胞生长因子的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子,探讨其体外降解、释药行为及对培养大鼠肝细胞活力的影响。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-07/2008-01在南通大学肝胆外科研究所及南通大学江苏省神经再生重点实验室设计完成。材料:SD大鼠10只,肝细胞生长因子由英国PeproTech公司提供,聚乳酸由美国Sigma公司提供,O-羧甲基壳聚糖由上海伟康生物技术有限公司提供。方法:以聚乳酸和O-羧甲基壳聚糖为基质材料,采用超声波法制备聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子,用低温磁力搅拌法制备载肝细胞生长因子的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子。用该载药纳米粒子进行原代大鼠肝细胞培养,并以不加肝细胞生长因子的普通培养作为对照,采用CCK-8体外细胞增殖检测试剂盒检测培养肝细胞活力。主要观察指标:观察该载药纳米粒子的结构、粒径及表面形貌,测定其粒径分布和表面电位,动态监测降解过程中粒子表面形貌的变化、降解过程中质量的损失情况和降解介质的pH值变化情况。并进一步检测培养1周内肝细胞的活力。结果:载肝细胞生长因子的PLA-O-CMC纳米粒子呈球形,其平均粒径为140nm,粒径分布指数为0.108,载药率为0.12665%,包封率为76.32%,粒子表面电位为32.8eV。该载药纳米粒子前24h释药动力学方程为Q=148.4266+189.0493t1/2(R=0.97589),符合Huguchi方程;前30d内释放动力学方程Q=1086.28966+58.23938t(R=0.99716),符合零级释放方程。载药纳米粒子组肝细胞活力明显高于普通培养组(P<0.05)。结论:实验成功制备并表征了载肝细胞生长因子的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子,并证实其能够有效维持培养大鼠肝细胞的活力。

聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子对大鼠腹腔内猪肝细胞异种移植免疫排斥反应的影响

背景:课题组前期实验用I型胶原包埋聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子黏附培养的猪肝细胞治疗急性肝衰竭大鼠取得了良好的疗效。目的:进一步观察聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子在猪肝细胞腹腔内移植治疗急性肝衰竭大鼠过程中对免疫排斥反应的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-05/2006-05在南通大学肝胆外科研究所和神经再生实验室完成。材料:原位胶原酶循环肝灌注法分离猪肝细胞;SD大鼠64只D-氨基半乳糖腹腔内注射制作急性肝衰竭模型。方法:64只模型大鼠随机分为4组:模型组不干预;纳米胶原肝细胞组将Ⅰ型胶原凝胶包埋的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子黏附培养24h的猪肝细胞植入大鼠腹腔内,并用大网膜适当包裹;胶原肝细胞组将Ⅰ型胶原凝胶固定培养24h的猪肝细胞植入大鼠腹腔内;单纯肝细胞组将振荡培养24h的猪肝细胞悬液直视下注入大鼠的小网膜囊内。移植在造模48h后进行,移植细胞量均为5.0×107个肝细胞。主要观察指标:移植后1,2,3,5,7d取大鼠血清检测白细胞介素2、干扰素γ、IgG、IgM浓度,以模型组数据为移植前指标;移植后1,3,7d取腹腔移植物光镜下观察移植肝细胞的病理变化。结果:移植后7d内各组血清白细胞介素2、干扰素γ水平差异无显著性。各组血清IgG水平在移植后逐渐升高,第3天达到最高峰,随后逐渐下降;移植后2,3d,纳米胶原肝细胞组血清IgG质量浓度低于其他2组(P<0.05),至移植后7d,纳米胶原肝细胞组血清IgG水平高于单纯肝细胞组(P<0.05)。各组血清IgM质量浓度在移植后第1,2天明显低于移植前(P<0.05),移植后第3～7天逐渐升高,其中纳米胶原肝细胞组IgM质量浓度高于其他2组(P<0.05)。移植后第3天胶原肝细胞组移植肝细胞数量明显减少,单纯肝细胞组则几乎找不到存活的肝细胞,而纳米胶原肝细胞组移植后第7天仍能找到存活肝细胞。结论:聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子在猪肝细胞腹腔内移植治疗大鼠急性肝衰竭过程中对体液免疫排斥反应具有一定的抑制作用。

6-O-羧甲基氨基葡萄糖的制备及其结构分析

采用酶降解和酸降解相结合的工艺,将大分子量的6-O-羧甲基甲壳素降解成单分子的6-O-羧甲基氨基葡萄糖,经906型弱碱性阴离子交换树脂柱吸附层析分离,制得羧甲基化氨基糖。对该单糖进行了HPLC、高效薄层、比旋光度、熔点和红外光谱等方面的分析研究。结果表明,该单糖在C6连有羧基,C2连有氨基,具有特定的比旋光度和熔点特征,与报道的结果相一致。

聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子培养的猪肝细胞移植对大鼠急性肝衰竭的治疗作用

目的：探讨胶原凝胶包埋的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子培养的猪肝细胞腹腔内移植对急性肝衰竭（ALF）大鼠的治疗效果。方法：D-氨基半乳糖腹腔内注射制作大鼠ALF模型。48h后分别将培养24h的猪肝细胞悬液（含5.0×10^7个肝细胞，I组）、I型胶原凝胶固定培养24h的猪肝细胞（含5.0×10^7个肝细胞，Ⅱ组）、I型胶原凝胶包埋的PL-A-O-CMC纳米粒子培养24h的猪肝细胞（含5.0×10^7个肝细胞，Ⅲ组）移植到ALF大鼠腹腔内，并以RPMIl640腹腔内注射作为对照（IV组）。观察移植后大鼠14d存活率，血清白蛋白（ALB）、谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TB）、血氨（NH3）的变化和移植肝细胞的病理变化。结果：移植后14d ALF大鼠的存活率：I组为56.25％，Ⅱ组为62.5％，Ⅲ组为75％，Ⅳ组为18.75％，各移植组高于对照组（P＜O.05）。移植后1～5d，I、Ⅱ、Ⅲ组各项肝功能指标改善明显优于Ⅳ组，Ⅲ组肝功能恢复好于同时间其它移植组，肝功能恢复从快到慢依次为Ⅲ、Ⅱ、I、Ⅳ组。Ⅲ组移植肝细胞存活时间最长，炎症浸润最轻。结论：应用胶原凝胶包埋的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子培养的猪肝细胞腹腔内移植治疗ALF大鼠能显著改善肝功能、提高生存率，聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子用于异种肝细胞移植具有良好的生物相容性，并能延长移植肝细胞的存活时间。关键词肝细胞移植；急性肝衰竭；聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖；

N-月桂基-O-羧甲基壳聚糖合成的研究

以甲壳素为原料,首先合成O-羧甲基壳聚糖,然后通过混合冻干得到N-月桂基-O-羧甲基壳聚糖,最后得到两亲性壳聚糖包封的紫杉醇聚胶束溶液.

6-O-羧甲基-D-吡喃半乳糖的合成及应用

以D-半乳糖(Ⅰ)为起始原料,经羟基保护、亲核取代、皂化和脱保护反应得到目标产物6-O-羧甲基-D-吡喃半乳糖(Ⅴ),并用IR,1H NMR和13C NMR表征了每一步合成产物的结构。以D-半乳糖、丙二醇、甘油和山梨醇为对照,以烟丝含水率为指标对化合物Ⅴ的物理保润性能进行评价。结果表明:①合成化合物Ⅴ为目标产物,反应最终总产率为50.8%;②Ⅴ的保湿性能优于D-半乳糖、丙二醇、甘油和山梨醇。

N-琥珀酰-O-羧甲基壳聚糖对喜树碱的增溶及控制释放

研究N-琥珀酰-O-羧甲基壳聚糖（NSOCMCS）在稀溶液中形成的聚集体对疏水的抗癌药物喜树碱（CPT）的增溶及控制释放作用.透射电镜（TEM）分析结果表明,NSOCMCS聚集体负载CPT后尺寸明显增大;荧光光谱分析结果表明,CPT在NSOCMCS溶液中的溶解度比其在水中的溶解度增大2～3倍;体外释放实验结果表明,NSOCMCS对于CPT具有一定的缓释作用.因此,NSOCMCS是一种具有应用潜力的疏水抗肿瘤药物释放载体材料.

6-O-羧甲基氨基葡萄糖铁配合物的制备及其与DNA相互作用研究

利用D-氨基葡萄糖与氯乙酸反应合成了6-O-羧甲基D-氨基葡萄糖(CMG),结合中性辅助配体2,2′-联吡啶,合成了一种新型铁金属配合物;采用红外光谱对配体及配合物的结构进行表征;采用紫外可见吸收光谱法、荧光光谱法和黏度法研究了新型配合物与鲱鱼精DNA的相互作用。结果表明新型配合物可以与鲱鱼精DNA以嵌插方式结合,从而使DNA双螺旋结构破坏。

新型壳聚糖基自组装纳米胶束紫杉醇药物释放载体

以N-胆甾醇琥珀酰基-O-羧甲基壳聚糖(CCMC,胆甾醇基取代度6.9%)为原料,在水溶液中通过探头超声处理制备其自组装凝胶纳米胶束,采用稳态荧光探针法考察临界胶束浓度,并通过透射电镜和动态激光散射仪检测胶束的形态大小.以紫杉醇为模型药物,采用透析法制备载药CCMC纳米胶束,并通过高效液相色谱法(HPLC)考察其在纳米胶束中的包载及释放情况.结果显示,CCMC为两亲性高分子,在水溶液中能形成粒径为198.4 nm的规则球状胶束,临界胶束浓度为0.018 mg/mL.紫杉醇顺利包载于CCMC-纳米胶束内,载药量高达34.9%;随着载药量的增加,胶束粒径呈增大的趋势.体外释放实验结果显示,CCMC纳米胶束能延缓紫杉醇的释放,释药速度和释放介质pH值密切相关.

聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子培养的猪肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝再生的影响

我们将聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖（PLA-O-CMC）纳米粒子培养的猪肝细胞移植到急性肝衰竭（ALF）大鼠腹腔内，观察移植后血浆中肝细胞生长因子（HGF）、血管内皮生长因子（VEGF）的变化及受体肝脏病理改变，探讨其对ALF大鼠肝再生的影响。

聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子对大鼠腹腔内异种移植猪肝细胞bcl-2、bax、Fas和p53表达的影响

我们采用免疫组织化学方法观察聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖（PLA-O-CMC）纳米粒子对腹腔内异种移植猪肝细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax、Fas和p53表达的影响。

羧甲基壳聚糖对LPS干预人牙周膜成纤维细胞表达IL-6的影响

目的:脂多糖(LPS)干预下,不同浓度羧甲基壳聚糖(CMC)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)表达白细胞介素-6(IL-6)的影响。方法:取冻存的HPDLFs进行复苏培养,以浓度为10 mg/L的LPS进行诱导,用不同浓度的羧甲基壳聚糖进行干预,采用免疫组织化学方法检测IL-6在HPDLFs中的表达变化。结果:不同浓度羧甲基壳聚糖能够下调同一浓度LPS诱导的HPDLFs表达的IL-6,随羧甲基壳聚糖浓度的增加,IL-6的表达量呈逐渐减弱趋势(P<0.05)。结论:羧甲基壳聚糖可能对LPS诱导的HPDLFs炎症损伤过程中表达IL-6有重要的抑制作用,为牙周病治疗提供新的实验资料。

PLA-O-CMC纳米粒子培养的猪肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝再生作用的初步研究

目的:探讨胶原凝胶包埋聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖(PLA-O-CMC)纳米粒子粘附培养猪肝细胞移植对急性肝衰竭(ALF)大鼠肝的再生作用。方法:D-氨基半乳糖腹腔内注射制作大鼠ALF模型;48h后分别将5mlⅠ型胶原凝胶包埋的PLA-O-CMC纳米粒子粘附培养24h猪的肝细胞、5mlⅠ型胶原凝胶固定培养24h的猪肝细胞、5ml培养24h的猪肝细胞悬液(均含5.0×107个)移植到各组ALF大鼠腹腔内,并以5mlRPMI1640腹腔内注射作为阴性对照。观察大鼠14天存活率和受体肝脏的病理变化。结果:移植后14天ALF大鼠的存活率:单纯肝细胞移植组(Ⅰ组)为56.25%,胶原肝细胞移植组(Ⅱ组)为62.5%,纳米胶原肝细胞移植组(Ⅲ组)为75%,阴性对照组(Ⅳ组)为18.75%,各移植组14天存活率高于对照组(P<0.05),各移植组间无统计学意义(P>0.05)。ALF大鼠肝脏再生于ALF后5～7天最为显著;各组肝脏病理变化以Ⅲ组恢复最好,双核细胞最多,肝再生最快。结论:应用PLA-O-CMC纳米粒子和Ⅰ型胶原联合培养猪肝细胞移植于ALF大鼠腹腔内能促进肝脏的再生。

N-半乳糖-O-组胺酰化羧甲基壳聚糖纳米胶束的制备与性能

将半乳糖配基和组胺接枝到O-羧甲基壳聚糖合成了N-半乳糖-O-组胺酰化羧甲基壳聚糖,采用探针式超声法将其制备成pH敏感型纳米胶束,并采用透析法研究了该纳米胶束载药后的释放性能.结果表明,该纳米胶束在pH 7.4（正常组织pH值）时呈球形,平均粒径介于106.1~173.6 nm之间,而载药纳米胶束在pH 6.5（癌组织pH值）时强烈释放药物.该纳米胶束有望作为pH敏感型纳米药物载体.

6-O-季铵化壳聚糖修饰超氧化物歧化酶的制备及性质研究

目的用6-O-季铵化壳聚糖对超氧化物歧化酶(SOD)进行化学修饰,并初步分析修饰酶的理化性质。方法将2,3-环氧丙基三甲基氯化铵(GTMAC)接枝到壳聚糖的C6-OH上得到水溶性明显改善的O-(羟基)丙基-3-三甲基氯化铵壳聚糖(OHTCC)衍生物;通过碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)活化法将O-(羟基)丙基-3-三甲基氯化铵壳聚糖连接到超氧化物歧化酶的羧基上,采用DEAE Sepharose Fast Flow弱阴离子交换柱色谱分离纯化得到结合物;十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法、高效液相色谱法及圆二色谱分析结合物的性质,邻苯三酚法测定酶活性。结果超氧化物歧化酶成功地被O-(羟基)丙基-3-三甲基氯化铵壳聚糖修饰,修饰率为90%,分离纯化得到的产物为连续分布的均一组分,修饰酶的活性保持率达到81.1%。结论 O-(羟基)丙基-3-三甲基氯化铵壳聚糖修饰超氧化物歧化酶的效率较高,且修饰酶的活性保持率较高。

一种新型高效保湿剂的吸湿保湿动力学研究

通过分子设计,合成了一种新型高效的保湿剂,N-羧丁酰基-O-羧甲基壳聚糖(CB-CMCS),其吸湿保湿效果优于透明质酸.重点研究了该保湿剂和透明质酸的吸湿保湿动力学特性,结果表明采用二级吸附动力学方程能够很好的描述两种保湿剂的吸湿行为,相关系数均达0.999以上,由此说明它们的吸湿过程主要受化学作用的控制.