基于文献数据库的6-OHDA帕金森病大鼠模型特点分析及在中药研究中的应用

目的分析6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况,以期为6-OHDA模型在帕金森研究中的应用提供参考。方法查阅近20年来中国知网(CNKI)和PubMed中应用6-OHDA建立PD大鼠模型的相关文献,分析6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别体重、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况。结果6-OHDA诱导的大鼠PD模型多选用雄性SD或Wistar大鼠,造模时注射部位多为单侧黑质、内侧前脑束或纹状体,多在造模4周后检测阿扑吗啡诱导旋转实验、脑组织形态学、分子生物学、生化指标以判断模型成功率及防治PD药物的有效性。结论本文通过对6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别、体重、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况进行分析,为PD模型的造模和应用提供参考。

改良纹状体内两点注射6-OHDA法制备大鼠帕金森病模型

目的:探讨改良的单侧纹状体两点法双靶点注射神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)制备帕金森病(PD)大鼠模型,对提高制模成功率的可行性。方法:利用立体定向技术以两点法双靶点注射6-羟多巴胺(6-OHDA)于雄性Sprague-Dawley大鼠右侧纹状体,分别于注射后2周和4周检测两组大鼠行为学变化;免疫组织化学法观察大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的数量变化;RT-PCR和Western Blot法分别检测TH mRNA和TH蛋白的表达变化。结果:造模2周后模型成功率为82.9%,4周后模型成功率高达88.6%;与对照组比较,模型大鼠6-OHDA注射侧黑质TH阳性细胞数显著减少(P<0.01);TH mRNA和TH蛋白的表达水平均明显降低(P<0.01)。结论:改良的单侧纹状体两点法双靶点注射6-OHDA制备大鼠帕金森病模型简单、易行,成功率高。

红景天苷通过Nrf2/HO-1通路减轻6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的:研究红景天苷(salidroside,Sal)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及可能机制。方法:4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测SH-SY5Y细胞活性,CM-H2DCFDA染色检测活性氧(ROS);Western Blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)与血红素氧合酶-1(HO-1)的蛋白表达;结果:与对照组比较,6-OHDA(150μmol/L)处理SH-SY5Y 24 h后,细胞存活率降低至44.1%±4.6%(P<0.05),ROS水平增加;红景天苷(25,50μmol/L)预处理24 h后,与6-OHDA组比较,细胞存活率分别增加至68.3%±4.1%(P<0.05)和80.0%±6.2%(P<0.01)同时ROS减少。此外,6-OHDA(150μmol/L)可使细胞内Nrf2与HO-1的蛋白表达减少,红景天苷预处理24 h后,Nrf2与HO-1的蛋白表达依次增加。结论:Sal能减少细胞内ROS的水平,对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有浓度依赖性的保护作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。

外源性Nurr1基因过表达增强SK-N-SH细胞对神经毒素6-OHDA敏感性的研究

目的 通过比较自身不表达Nurrl基因的人神经母细胞瘤细胞SK—N—SH和过表达外源性Null基因的SK—N—SH／Nurrl细胞对神经毒素6-羟多巴胺（6-OHDA）损伤的敏感程度，探讨Null基因与6一OHDA引起的多巴胺（DA）能神经元特异性损伤的相关性。方法①绘制SK—N—SH细胞及SK—N—SH／Nurrl细胞的生长曲线，比较外源性Null基因过表达对细胞增殖率的影响。②用不同浓度的6-OHDA（5—100μmol·L^-1）分别作用两株细胞1—24h，倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，MTT测定法比较两株细胞的存活率。③用75μmol·L^-1的6-OHDA作用12h，经Hoechst33342染色，荧光显微镜观察细胞核形态，比较两株细胞的凋亡情况。结果①生长曲线结果显示，SK—N—SH／Null细胞增殖数目低于SK—N—SH细胞一②MTT结果显示，6-OHDA对两株细胞的存活均有抑制作用，但SK—N—SH／Null细胞存活率下降更为明显。③Hoechst33342染色结果显示，用75μmol·L^-1的6-OHDA作用12h后SK—N—SH细胞核没有出现明显的凋亡形态改变，而部分SK—N—SH／Null细胞的细胞核出现了染色质凝聚、碎裂等凋亡形态改变，比例约为22％-24％。结论外源性Null基因过表达抑制SK—N—SH细胞增殖，增强SK—N—SH细胞对6-OHDA的敏感性并有可能促进6-OHDA诱导的细胞凋亡。Null基因可能作为易感因子参与多巴胺能神经元的特异性损伤。

补肾止颤方对6-OHDA诱导的帕金森病模型大鼠神经保护作用的研究

目的探讨补肾止颤方对帕金森病(Parkinsons disease,PD)模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法将100只Sprague-Dawley大鼠随机分为5组:正常组、模型组、补肾止颤方低剂量组、中剂量组、高剂量组,补肾止颤方按照不同剂量溶于生理盐水中,每天中午灌胃1次,正常组和模型组予以相同体积的生理盐水灌胃。分别在处理10天和20天后检测各组大鼠的行为学,免疫组织化学法检测脑内多巴胺能神经元标志物酶酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)和多巴胺递质转运子(Dopamine transmitter transporter,DAT),酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测脑内多巴胺及其代谢产物的变化。结果和模型组比不同剂量的补肾止颤方均能够改善PD大鼠的行为学,提高TH、DAT、3,4二羟基苯乙酸(3,4 dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC)、5羟色胺(Serotonin,5-HT)、高香草酸(High vanilla acid,HVA)的表达(P <0.05或P <0.01),同时下调单胺氧化酶B(Monoamine oxidase B,MAO-B)的表达(P <0.01)。结论补肾止颤方能够改善6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)损伤早期大鼠的行为学改变,增加帕金森病大鼠多巴胺能神经元的数量,并能维持多巴胺能神经元功能,降低神经损伤,有较好的神经保护作用。

神经节苷脂对6-OHDA损毁交感神经末梢的对抗作用

单次6-OHDA (15mg/kg.i.p.)注射后24h,可使雌性成年小鼠颌下腺内儿茶酚胺荧光神经末梢几乎完全消失;同时用 HPLC 测得腺体内去甲肾上腺素(NA)和多巴胺(DA)的含量下降至正常值的3—4%以下。随着受损交感神经末梢再生过程,NA 和 DA 水平有缓慢的恢复。在损毁2周时 NA 和 DA 含量分别达到正常水平的50%和28%,且在4周时完全恢复。在注射6-OHDA 的同时,和在损伤后12h 内给动物注射4次神经节苷脂(每次50mg/kg.i.p.)并在其后的一周內每天注射一次,可使颌下腺内 NA 含量维持在正常水平;在损毁后4h 及损毁前4d 开始施用神经节苷脂,也可不同程度地对抗交感神经末梢损伤,但作用强度不如前者。实验结果提示:(1)神经节苷脂通过减弱6-OHDA 及其代谢产物的损伤效应能够保护交感神经末梢膜,它可能还有促损伤末梢再生性长芽的作用;(2)损伤后神经节苷脂处理得越早,其效果越好。

二苯乙烯苷通过抑制ROS减轻6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡

目的:探讨2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-gluco-side,TSG)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的PC12细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测PC12细胞活性;流式细胞仪(FCM)检测PC12细胞凋亡百分率;活性氧(reactive oxy-gen species,ROS)检测试剂盒测定细胞内ROS水平。结果:与6-OHDA处理组(52.6±1.3)%比较,10,20,50μmol/L TSG预处理后,6-OHDA对PC12细胞的毒性明显减轻,使细胞活力分别上升为(66.6±3.2)%(P<0.01),(73.0±1.6)%(P<0.01),(83.9±1.5)%(P<0.01)。流式细胞仪检测显示正常组,6-OHDA组,TSG(10,20,50μmol/L)预处理组,细胞凋亡百分率分别为2.4%,49.9%,25.6%,14.1%,8.5%。TSG(10,20,50μmol/L)预处理后,对比6-OHDA处理组(261.4±8.4)%,PC12细胞内产生的ROS水平分别降低为(255.6±6.8)%,(229.0±9.1)%(P<0.05),(149.2±9.4)%(P<0.01)。结论:TSG对6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与TSG抑制ROS有关。

依达拉奉对6-OHDA诱导的帕金森病大鼠黑质纹状体MDA、NO含量的影响

目的探讨依达拉奉对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导的帕金森病大鼠模型的黑质纹状体系统丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量的影响。方法将实验动物分为神经生化学和组织学两组,各组分为:(1)正常对照组(n=6);(2)生理盐水(NS)对照组(n=6);(3)依达拉奉组(n=24),依达拉奉又分为0.3mg/kg 14d组(n=6),1mg/kg 14d组(n=6),3mg/kg 14d组(n=6)及3mg/kg 28d组(n=6)4个亚组。采用6-OHDA立体定位下注入SD大鼠左侧前脑内侧束制备PD模型,观察依达拉奉对PD模型大鼠的行为学改变、黑质纹状体尼氏体和MDA、NO含量的影响。结果依达拉奉呈剂量依赖性减少阿朴吗啡(APO)诱发的6-OHDA大鼠PD模型旋转次数(P<0.01),并能改善大鼠自发行为学变化;依达拉奉(3mg/kg 14d、28d)阻止了6-OHDA导致的大鼠黑质纹状体尼氏体细胞数量的减少(P<0.05);阻止了6-OHDA导致的大鼠黑质纹状体MDA、NO的增加(P<0.05)。结论依达拉奉对6-OHDA诱导的PD动物模型具有神经保护作用,能改善6-OHDA损伤大鼠的早期行为学改变,减少6-OHDA导致的大鼠黑质纹状体MDA、NO的含量增加。

侧脑室注射6-OHDA对寒冷应激诱导的大鼠血浆ACTH含量的改变

目的 观察侧脑室注射 6 OHDA对 4℃寒冷应激诱导的血浆ACTH含量的改变。方法 成年Wistar雄性大鼠 3 0只 ,随机分成 5组 (n =6) ,分别为空白对照组、寒冷应激组、6 羟基多巴胺 (6 OHDA)非应激组、6 OHDA +寒冷应激组、配药液 +寒冷应激组。所有动物处理后立即取静脉血用放射免疫法测定其血浆ACTH含量。结果 4℃寒冷应激 4h后血浆ACTH含量明显升高 ,与正常对照组相比有明显差异 (P <0 .0 1) :6 OHDA侧脑室注射后再寒冷应激 ,血浆ACTH含量不再明显升高。

6-OHDA损伤神经细胞CXCR4/CXCL12表达变化的实验研究

目的研究6-OHDA损伤PC12细胞CXCR4/12表达的变化。方法以梯度浓度的6-OHDA处理PC12细胞,光镜观察各组PC12细胞的形态学变化;MTT法检测6-OHDA对PC12细胞的损伤;间接免疫荧光染色法检测6-OHDA不同浓度下PC12细胞CXCR4/CXCL12表达的变化。结果随6-OHDA浓度的增加,PC12细胞的存活率呈梯度降低;光镜下观察发现PC12细胞数减少,轴突变短甚至消失;间接免疫荧光染色则显示CXCL12及其受体CXCR4在神经细胞的表达增加。结论 6-OHDA浓度的增加可导致PC12细胞凋亡,同时伴有CXCL12及其受体CXCR4表达增加。

不同中医治法对6-OHDA帕金森病大鼠神经行为学的影响

目的:研究不同中医治法对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠神经行为学的影响。方法:采用经典的6-羟基多巴胺损毁注射法制作PD模型,将成功模型大鼠随机分为5组,其中4组分别应用活血化瘀法(代表方桃红四物汤)、涤痰熄风法(代表方涤痰汤)、滋阴熄风法(代表方天麻钩藤饮)和复合治法(代表方自拟复方地黄方)等不同治法方药进行治疗,另1组作为模型组应用生理盐水治疗。治疗结束后使用阿扑吗啡(APO)诱导旋转行为,并进行各组治疗前后和各药物治疗组间的旋转圈数比较。结果:模型组治疗前后旋转圈数比较差异无统计学意义(P>0.05);其余各治疗组旋转圈数前后比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。天麻钩藤饮组与桃红四物汤组、涤痰汤组比较,旋转圈数差异有统计学意义(P<0.05);复方地黄汤组与桃红四物汤组、涤痰汤组比较,旋转圈数差异有统计学意义(P<0.01)。天麻钩藤饮组与复方地黄汤组比较,旋转圈数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:各种中医治法均有明显的抗PD大鼠的旋转行为的作用,但以天麻钩藤饮为代表方的滋阴熄风法和以自拟复方地黄方为代表方的复合治法效果较好。根据以方测证的原理,该类帕金森病的大鼠模型的中医证候属性与阴虚类证最为接近,兼有痰、瘀的因素,应用复合治法的方药治疗帕金森病是值得探索的研究方向。

微量注射6-OHDA损毁大鼠黑质对丘脑底核神经元电活动影响的研究

为了观察黑质内注射 6-OHDA损毁黑质多巴胺 (DA)能神经元后大鼠丘脑底核 (STN)神经元自发放电活动的变化 ,以探讨 STN神经元功能紊乱与帕金森病 (PD)运动障碍的关系 ,选择单侧黑质致密部 (SNC)微量注射 6-OHDA方法建立 PD大鼠模型 ,采用微电极细胞外记录神经元放电 ,观察对照组大鼠和 PD模型大鼠不同时期的 STN神经元放电频率及放电形式的变化。结果显示 ,对照组大鼠 STN神经元放电频率平均为 11.16± 1.5 2 Hz,其放电形式主要表现为规则型 (3 9/4 4) ,其次为混合型 (3 /4 4)和爆发型 (2 /4 4) ;而 PD模型大鼠 (SNC损毁 )不同时期的 STN神经元的放电形式发生明显变化 ,呈爆发型放电的神经元数较对照组大鼠明显增多 (P<0 .0 5和 P<0 .0 1) ;平均放电频率较对照组大鼠明显升高 (P<0 .0 5和 P<0 .0 1)。

6-OHDA对PC12细胞的凋亡及内质网应激的影响

目的使用6-OHDA(6羟基多巴胺)作用于PC12细胞建立帕金森病细胞模型,探讨模型细胞的凋亡与HtrA2及Bip/Grp78表达的关系;方法将不同浓度(10-200μM)6-OHDA加入传代培养的PC12细胞中,作用24 h后采用CCK8法检测细胞活力,筛选细胞存活率为50%左右的6-OHDA浓度为造模浓度,并观察24 h内细胞活力的变化,使用Annexin V-PE/7AAD试剂盒检测细胞凋亡,并使用蛋白免疫印迹法检测HtrA2、Bip/Grp78的表达;结果在6-OHDA诱导下,PC12细胞活力呈剂量依赖性和时间剂量依赖性下降,其浓度为60μM时,细胞存活率为43.89%±0.90%,模型细胞的凋亡率、HtrA2和Bip/Grp78的表达较对照组明显增加(P<0.05);结论选择60μM 6-OHDA为PC12细胞帕金森病细胞模型的造模浓度,6-OHDA刺激PC12细胞的内质网应激,诱导PC12细胞的凋亡,HtrA2参与内质网应激且促进细胞凋亡。

6-OHDA所致PD大鼠模型黑质多巴胺能神经元与胶质细胞的变化

目的 应用6-羟多巴(6.OHDA)建立帕金森病(PD)大鼠模型。方法将6-OHDA立体注入大鼠前脑内侧束,应用免疫组织化学法检测6-OHDA注射后第3、7及14天后多巴胺能神经元、小胶质细胞与星形胶质细胞数量及形态的变化。用显微镜专业摄像头采集图像,计算机图像分析软件测量平均灰度值。结果 损伤侧与对侧相比,TH阳性多巴胺能神经元数量减少,损伤侧平均灰度值增加;小胶质细胞与星形胶质细胞显著增生,二者损伤侧的平均灰度值下降,经配对t检验,各组内比较差异均具有显著性意义(P<0.01);增生活化的小胶质细胞与星形胶质细胞形态发生明显的改变。结论 6-OHDA能成功建立PD大鼠模型。

山梗菜碱有效改善6-OHDA诱导偏侧鼠帕金森病的研究

目的研究山梗菜碱对6-OHDA诱导鼠帕金森病的治疗作用。方法6-OHDA诱导制作的偏侧鼠帕金森病模型检测山梗菜碱对帕金森病的治疗作用,TH免疫检测多巴胺能神经细胞,偏侧旋转试验行行为学检测。结果通过TH免疫组化显示:山梗菜碱可以达到保护黑质多巴胺能神经元的作用(P<0.05);行为学试验显示:山梗菜碱可以有效改善运动障碍(P<0.05)。结论首次研究显示山梗菜碱有效改善6-OHDA诱导的偏侧鼠帕金森病运动障碍,对帕金森病具有潜在的治疗价值。

6-OHDA诱导过表达Nurr1基因的SK-N-SH细胞凋亡的机制研究

为了探讨过表达外源性Nurr1基因的SKNSH/Nurr1细胞经6-羟多巴胺(6OHDA)诱导凋亡的机制,本实验比较了自身不表达Nurr1基因的SKNSH细胞和过表达外源性Nurr1基因的SKNSH/Nurr1细胞经6OHDA作用后的生化改变。经75μmol/L6OHDA作用6～24h,rhodamine123染色后,激光扫描共聚焦显微镜检测两株细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化,用Westernblot方法检测两株细胞凋亡因子caspase3活性前体蛋白的表达水平。结果表明,经6OHDA作用,两株细胞△Ψm均先上升后下降,但在12～24h,SKNSH细胞△Ψm下降显著低于SKNSH/Nurr1细胞(P<0.001);75μmol/L6OHDA作用6～24h,SKNSH/Nurr1细胞caspase3活性前体蛋白表达水平显著下降(P<0.001),而SKNSH细胞caspase3前体蛋白表达变化不明显。以上结果提示,6OHDA诱导SKNSH/Nurr1细胞凋亡可能与激活caspase3有关,而6OHDA诱导SKNSH细胞毒性损伤与线粒体膜电位显著下降有关。

神经毒素6-OHDA干预后星形胶质细胞铁转运蛋白表达的变化（英文）

背景:前期的研究已经证实,在神经元和小胶质细胞中,神经毒素6-OHDA能够增加铁转入蛋白DMT1的表达,减少铁转出蛋白FPN1的表达,可能导致帕金森病黑质铁的沉积。然而,6-OHDA能否在星形胶质细胞中发挥不同的作用尚不明确。目的:观察6-OHDA作用于C6神经胶质瘤细胞(大鼠星形胶质细胞株)后,铁转运蛋白DMT1和FPN1表达变化。方法:培养大鼠星形胶质细胞C6细胞,加入10μmol/L 6-OHDA培养24 h,Western blots法检测6-OHDA干预后DMT1和FPN1蛋白表达。结果与结论:用10μmol/L 6-OHDA作用于大鼠C6星形胶质细胞24 h后,Western blots检测结果显示DMT1蛋白表达升高了2.5倍(P<0.01),FPN1蛋白表达升高了1倍(P<0.05)。提示,6-OHDA通过同时增加铁转运蛋白DMT1和FPN1表达促进铁运速率,星形胶质细胞对6-OHDA的反应与神经元和小胶质细胞不同。

Synphilin-1 siRNA对6-OHDA诱导的帕金森病大鼠黑质神经保护作用的研究

目的:观察synphilin-1 siRNA对6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)大鼠黑质多巴胺能神经元保护作用,从而探讨synphilin-1siRNA在帕金森病治疗中潜在的应用价值。方法:40只Wistar大鼠随机分成4组,假手术组、模型组s、iRNA组s、iRNA对照组,每组10只。模型组立体定向将6-OHDA注入左侧黑质制作PD模型,siRNA组s、iRNA对照组立体定向将synphilin-1siRNA、阴性对照synphilin-1 siRNA分别注入到各组大鼠的左侧黑质,然后用与第一组相同的方法注入6-OHDA,假手术组注入生理盐水作为对照组,术后2周用阿朴吗啡(APO)(0.5 mg/kg)诱发旋转,进行大鼠行为学检测。术后4周取大鼠的术侧中脑黑质利用免疫组化检测synphilin-1,酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性细胞(ir)的表达。结果:与假手术组比较,模型组synphilin-1-ir阳性细胞表达显著增加,而TH-ir阳性细胞显著减少;与模型组比较,siRNA组synphilin-1-ir阳性细胞表达显著减少,而TH-ir阳性细胞显著增加。结论:Synphilin-1在6-OHDA诱导的PD大鼠黑质神经元损伤机制中起一定作用,synphilin-1 siRNA具有神经保护作用,能为帕金森病的治疗提供新的思路和方法。