卞丝肼对6-OHDA损毁大鼠纹状体AADC活性的影响

目的观察卞丝肼对6-羟多巴胺(6-OHDA)所致帕金森病模型大鼠纹状体芳香L-氨基酸脱羧酶(AADC)活性的影响。方法采用6-OHDA建立帕金森病大鼠模型(黑质纹状体去神经支配),用生理盐水制作假损毁大鼠作为对照;注射卞丝肼60分钟后,处死大鼠,迅速摘除大脑,并取出纹状体,进行匀浆处理。取匀浆上清液加入到培养基中培养后用高效液相色谱柱(HPLC)进行DA含量测试。结果在假损毁大鼠中,10 mg/kg卞丝肼和50 mg/kg卞丝肼可以使纹状体AADC活性明显降低(P<0.01)。在6-OHDA损毁大鼠纹状体中,10 mg/kg卞丝肼和50 mg/kg卞丝肼明显降低AADC活性,分别为对照物组的25%和12%(P<0.01)。然而,10 mg/kg卞丝肼和50 mg/kg卞丝肼组之间无统计学差异。结论卞丝肼降低6-OHDA损毁大鼠黑质纹状体AADC活性,影响L-DOPA代谢。

微量注射6-OHDA损毁大鼠黑质对丘脑底核神经元电活动影响的研究

为了观察黑质内注射 6-OHDA损毁黑质多巴胺 (DA)能神经元后大鼠丘脑底核 (STN)神经元自发放电活动的变化 ,以探讨 STN神经元功能紊乱与帕金森病 (PD)运动障碍的关系 ,选择单侧黑质致密部 (SNC)微量注射 6-OHDA方法建立 PD大鼠模型 ,采用微电极细胞外记录神经元放电 ,观察对照组大鼠和 PD模型大鼠不同时期的 STN神经元放电频率及放电形式的变化。结果显示 ,对照组大鼠 STN神经元放电频率平均为 11.16± 1.5 2 Hz,其放电形式主要表现为规则型 (3 9/4 4) ,其次为混合型 (3 /4 4)和爆发型 (2 /4 4) ;而 PD模型大鼠 (SNC损毁 )不同时期的 STN神经元的放电形式发生明显变化 ,呈爆发型放电的神经元数较对照组大鼠明显增多 (P<0 .0 5和 P<0 .0 1) ;平均放电频率较对照组大鼠明显升高 (P<0 .0 5和 P<0 .0 1)。

基于文献数据库的6-OHDA帕金森病大鼠模型特点分析及在中药研究中的应用

目的分析6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况,以期为6-OHDA模型在帕金森研究中的应用提供参考。方法查阅近20年来中国知网(CNKI)和PubMed中应用6-OHDA建立PD大鼠模型的相关文献,分析6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别体重、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况。结果6-OHDA诱导的大鼠PD模型多选用雄性SD或Wistar大鼠,造模时注射部位多为单侧黑质、内侧前脑束或纹状体,多在造模4周后检测阿扑吗啡诱导旋转实验、脑组织形态学、分子生物学、生化指标以判断模型成功率及防治PD药物的有效性。结论本文通过对6-OHDA诱导的大鼠PD模型的品系选择、性别、体重、造模要素、模型评价方法以及在抗PD中药研究中的应用情况进行分析,为PD模型的造模和应用提供参考。

改良纹状体内两点注射6-OHDA法制备大鼠帕金森病模型

目的:探讨改良的单侧纹状体两点法双靶点注射神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)制备帕金森病(PD)大鼠模型,对提高制模成功率的可行性。方法:利用立体定向技术以两点法双靶点注射6-羟多巴胺(6-OHDA)于雄性Sprague-Dawley大鼠右侧纹状体,分别于注射后2周和4周检测两组大鼠行为学变化;免疫组织化学法观察大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的数量变化;RT-PCR和Western Blot法分别检测TH mRNA和TH蛋白的表达变化。结果:造模2周后模型成功率为82.9%,4周后模型成功率高达88.6%;与对照组比较,模型大鼠6-OHDA注射侧黑质TH阳性细胞数显著减少(P<0.01);TH mRNA和TH蛋白的表达水平均明显降低(P<0.01)。结论:改良的单侧纹状体两点法双靶点注射6-OHDA制备大鼠帕金森病模型简单、易行,成功率高。

神经节苷脂对6-OHDA损毁交感神经末梢的对抗作用

单次6-OHDA (15mg/kg.i.p.)注射后24h,可使雌性成年小鼠颌下腺内儿茶酚胺荧光神经末梢几乎完全消失;同时用 HPLC 测得腺体内去甲肾上腺素(NA)和多巴胺(DA)的含量下降至正常值的3—4%以下。随着受损交感神经末梢再生过程,NA 和 DA 水平有缓慢的恢复。在损毁2周时 NA 和 DA 含量分别达到正常水平的50%和28%,且在4周时完全恢复。在注射6-OHDA 的同时,和在损伤后12h 内给动物注射4次神经节苷脂(每次50mg/kg.i.p.)并在其后的一周內每天注射一次,可使颌下腺内 NA 含量维持在正常水平;在损毁后4h 及损毁前4d 开始施用神经节苷脂,也可不同程度地对抗交感神经末梢损伤,但作用强度不如前者。实验结果提示:(1)神经节苷脂通过减弱6-OHDA 及其代谢产物的损伤效应能够保护交感神经末梢膜,它可能还有促损伤末梢再生性长芽的作用;(2)损伤后神经节苷脂处理得越早,其效果越好。

侧脑室注射6-OHDA对寒冷应激诱导的大鼠血浆ACTH含量的改变

目的 观察侧脑室注射 6 OHDA对 4℃寒冷应激诱导的血浆ACTH含量的改变。方法 成年Wistar雄性大鼠 3 0只 ,随机分成 5组 (n =6) ,分别为空白对照组、寒冷应激组、6 羟基多巴胺 (6 OHDA)非应激组、6 OHDA +寒冷应激组、配药液 +寒冷应激组。所有动物处理后立即取静脉血用放射免疫法测定其血浆ACTH含量。结果 4℃寒冷应激 4h后血浆ACTH含量明显升高 ,与正常对照组相比有明显差异 (P <0 .0 1) :6 OHDA侧脑室注射后再寒冷应激 ,血浆ACTH含量不再明显升高。

6-OHDA所致PD大鼠模型黑质多巴胺能神经元与胶质细胞的变化

目的 应用6-羟多巴(6.OHDA)建立帕金森病(PD)大鼠模型。方法将6-OHDA立体注入大鼠前脑内侧束,应用免疫组织化学法检测6-OHDA注射后第3、7及14天后多巴胺能神经元、小胶质细胞与星形胶质细胞数量及形态的变化。用显微镜专业摄像头采集图像,计算机图像分析软件测量平均灰度值。结果 损伤侧与对侧相比,TH阳性多巴胺能神经元数量减少,损伤侧平均灰度值增加;小胶质细胞与星形胶质细胞显著增生,二者损伤侧的平均灰度值下降,经配对t检验,各组内比较差异均具有显著性意义(P<0.01);增生活化的小胶质细胞与星形胶质细胞形态发生明显的改变。结论 6-OHDA能成功建立PD大鼠模型。

Synphilin-1 siRNA对6-OHDA诱导的帕金森病大鼠黑质神经保护作用的研究

目的:观察synphilin-1 siRNA对6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)大鼠黑质多巴胺能神经元保护作用,从而探讨synphilin-1siRNA在帕金森病治疗中潜在的应用价值。方法:40只Wistar大鼠随机分成4组,假手术组、模型组s、iRNA组s、iRNA对照组,每组10只。模型组立体定向将6-OHDA注入左侧黑质制作PD模型,siRNA组s、iRNA对照组立体定向将synphilin-1siRNA、阴性对照synphilin-1 siRNA分别注入到各组大鼠的左侧黑质,然后用与第一组相同的方法注入6-OHDA,假手术组注入生理盐水作为对照组,术后2周用阿朴吗啡(APO)(0.5 mg/kg)诱发旋转,进行大鼠行为学检测。术后4周取大鼠的术侧中脑黑质利用免疫组化检测synphilin-1,酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性细胞(ir)的表达。结果:与假手术组比较,模型组synphilin-1-ir阳性细胞表达显著增加,而TH-ir阳性细胞显著减少;与模型组比较,siRNA组synphilin-1-ir阳性细胞表达显著减少,而TH-ir阳性细胞显著增加。结论:Synphilin-1在6-OHDA诱导的PD大鼠黑质神经元损伤机制中起一定作用,synphilin-1 siRNA具有神经保护作用,能为帕金森病的治疗提供新的思路和方法。

6-OHDA诱导PD大鼠黑质神经细胞凋亡的观察

目的 探讨帕金森病发病过程中黑质神经元的缺失形式。方法 将 6 -OHDA立体定向微量注射于右侧内侧前脑束 (MFB)制备PD大鼠模型 ,观察大鼠的行为改变 ,并运用特殊染色 ,DNA原位末端标记技术检测黑质内多巴胺 (DA)神经元凋亡的发生及其变化规律。结果 成功复制出符合临床特点的PD大鼠模型 ,且旋转行为与黑质区神经元数目呈反变关系 ,损伤侧黑质DA神经元存在着细胞凋亡 ,以术后两周最明显。结论 6-OHDA诱导的PD大鼠SNc中存在以凋亡为主的死亡方式 。

Neurotropin拮抗6-OHDA诱导大鼠早期黑质多巴胺能神经元的凋亡

【目的】探讨神经托平(neurotropin)对6-OHDA诱导的SD(Sprague-Dawley)大鼠黑质多巴胺能神经元极早期凋亡的拮抗作用。【方法】实验组SD大鼠,按完全随机设计分3组,每组16只,分别用神经托平15、30、45U·kg-1·d-1腹腔内注射,对照组(32只)用等体积的生理盐水腹腔内注射。2周后用6-OHDA立体定向注射于大鼠纹状体区。在6h、12h、24h、48h、72h、96h、1周及2周时采用原位末端标记法(TUNEL)检测黑质细胞的凋亡,用流式细胞仪检测凋亡率,用免疫组化法检测纹状体区多巴胺能神经纤维的含量的变化。【结果】对照组在6-OHDA作用后的6h即可检测到黑质细胞凋亡,在48h达到高峰,凋亡率6.4%±0.2%;神经托平30、45U·kg-1·d-1预处理后则可降低细胞凋亡(P<0.05),其中45U·kg-1·d-1预处理组在48h仅为2.3%±0.1%,与实验组比有统计学意义,同时纹状体区多巴胺能神经纤维含量的减少较对照组亦有统计学意义(P<0.05);而15U·kg-1·d-1组则无明显效果。【结论】大剂量神经托平可拮抗神经毒性物质对黑质神经元的凋亡作用,避免了投射至纹状体区多巴胺能神经递质的减少,为今后探讨帕金森病的防治提供了重要的理论依据。

松果菊苷对6-OHDA帕金森病模型大鼠海马α-Synuclein、β-actin蛋白表达影响随机平行对照研究

[目的]观察松果菊苷对6-OHDA帕金森病模型大鼠海马α-Synuclein、β-actin蛋白表达影响。[方法]使用随机平行对照方法,将72只SPF级SD雄性大鼠适应性饲养14d,按随机数字表法分为6组,空白对照组、假手术组、模型组、松果菊苷(低、中、高剂量)组,12只/组。各组大鼠腹腔注射10%水合氯醛(30mg/kg)麻醉,固定于颅脑定位仪,消毒,沿颅顶正中线切开皮肤,钝性分离颅骨外膜,暴露大鼠颅骨前囟门;以前囟为坐标原点(大鼠脑定位立体图谱),确定前脑内侧束(MFB)坐标,MFB:前囟后4.8mm,矢状缝右侧1.2mm,硬脑下7.8mm;颅骨钻钻孔,立体定向靶点微量注射6-OHDA(2ug/uL,溶于0.1%抗坏血酸生理盐水),注射速度1uL/min,留针15min;骨蜡封闭大鼠脑部颅骨孔,消毒缝合皮肤,复制帕金森病模型,松果菊苷(低、中、高剂量)组(8 ug)、模型组(2ug);空白对照组、假手术组(与模型组等量生理盐水)。灌胃干预:复制成功模型,松果菊苷组(低20mg/kg、中40mg/kg,高80mg/kg),余各组均等体积生理盐水,1次/d,连续10d。PAGE胶蛋白电泳;免疫印迹(Western Blot,WB)法检测α-Synuclein、β-actin蛋白。[结果]模型复制48只大鼠,麻醉过度死亡3只,模型复制不成功2只,最终纳入结果分析43只,模型组10只,松果菊苷组低、中、高剂量组各11只。α-Synuclein蛋白水平假手术组、松果菊苷各组(低中高)均低于空白对照组(P<0.01);β-actin各组间无明显差异(P>0.05);α-Synuclein/β-actin假手术组、松果菊苷低剂量组、松果菊苷中剂量组、松果菊苷高剂量组均低于空白对照组(P<0.01)。[结论]松果菊苷干预帕金森病模型大鼠,可降低海马α-Synuclein表达。

肠系膜上静脉注射6-OHDA对大鼠血糖的影响

目的探讨大鼠肠系膜上静脉注射6-羟多巴胺(6-OHDA)对血糖水平的影响,为能量代谢神经调节机制的研究提供实验依据。方法采用肠系膜上静脉注射6-OHDA的方法建立去交感神经状态动物模型(试验组N=30),设假手术组(N=30)和未施加任何干扰因素的对照组(N=30)。观察大鼠进食、大小便等状况,用血糖仪检测各组大鼠0 d、7 d、14 d、21 d、28 d空腹血糖水平,用电子称称取术后各组大鼠各时间点的空腹体重。结果试验组大鼠空腹血糖和体重与假手术组和对照组比较均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论6-OHDA可起到明显的化学性去交感神经效果,交感神经的存在与否对大鼠血糖水平具有显著影响。

6-羟基多巴大鼠中脑腹侧部Bcl-2、Bax mRNA表达及灵芝孢子油的调节作用

目的研究6-羟基多巴(6-OHDA)帕金森病(PD)大鼠模型中脑腹侧部凋亡调控基因的表达情况,探讨灵芝孢子油对6-OHDA引起的黑质区神经元凋亡的调节作用。方法SD大鼠被分为3组,组1:6-OHDA组、组2:灵芝孢子油+6-OHDA组、组3:正常对照组。通过脑部立体定向法将6-OHDA注射到组1和组2大鼠一侧黑质致密部建立大鼠PD模型。组2在造模前3天开始喂食灵芝孢子油500mg/(kg.d),连续10天,组1喂食生理盐水做对照。造模后10天取中脑腹侧组织,用荧光RT-PCR法检测Bcl-2、BaxmRNA表达量,Westernblot法检测Bcl-2蛋白含量。结果①半定量RT-PCR结果显示组1BaxmRNA的表达量比组3增多,而Bcl-2mRNA的表达量无明显变化,组2BaxmRNA的表达量比组3下降、Bcl-2mRNA的表达量增多,组1组2间比较有差异。②Western结果显示组2BcL-2蛋白相对含量比组1和组3增高,组组间比较差异显著。结论6-OHDA大鼠中脑腹侧部Bax表达增强,灵芝孢子油能有效地降低其表达,并使Bcl-2表达增加。

灵芝孢子油干预治疗6-羟多巴帕金森病大鼠模型的实验研究

【目的】研究灵芝孢子油对6-羟多巴(6-OHDA)帕金森病(PD)大鼠模型行为学及病理改变的影响,探讨该药对黑质多巴胺能神经元的保护作用。【方法】100只SD大鼠随机分为正常对照组20只、6-OHDA组40只、灵芝孢子油+6-OHDA组40只。通过脑部立体定向法将6-OHDA注射到SD大鼠一侧黑质致密部建立6-OHDA大鼠PD模型,灵芝孢子油+6-OHDA组在造模前3d开始给灵芝孢子油每天500mg/kg,连续10d。6-OHDA组喂食生理盐水做对照。造模后每周给予阿朴吗啡观察大鼠旋转行为的变化,4周后用高效液相色谱法检测大鼠纹状体多巴胺及其代谢物含量,免疫组织化学法检测黑质致密部酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数量,westernblot法对TH蛋白进行半定量测定。【结果】①灵芝孢子油+6-OHDA组出现旋转行为的大鼠比例为10%,6-OHDA组为45%,两组比较有显著性差异。②纹状体多巴胺及其代谢物含量在两组间存在差异,多巴胺手术侧含量/手术对侧含量在灵芝孢子油+6-OHDA组为(60.12±7.5)%,在6-OHDA组为(38.58±7.26)%。③在黑质致密带区灵芝孢子油+6-OHDA组的TH免疫阳性细胞及TH蛋白表达量均较6-OHDA组显著增多。【结论】灵芝孢子油能明显改善6-OHDA大鼠模型行为学,增加纹状体多巴胺及其代谢物含量并提高黑质多巴胺能神经元的残存率,提示灵芝孢子油可能具有减缓PD病变进程的神经保护作用。

应用6-羟基多巴胺建立帕金森病大鼠模型的稳定性评价(英文)

背景:应用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine,6-OHDA)损毁黑质多巴胺神经元(nigraldopaminergicneuron,NDN)制作的大鼠模型,在目前帕金森病的研究中应用最广,但由于黑质致密部体积狭小,技术难度大,故模型制备成功率一般仅为30%～40%左右。目的:探讨提高6-羟基多巴胺帕金森病大鼠模型成功率的方法,并对模型进行评价。设计:完全随机的实验研究。地点和材料:实验在安徽中医学院第一附属医院中心实验室完成,实验材料包括SD大鼠,6-OHDA,阿朴吗啡,兔抗TH血清,ABC试剂盒,SR-6N大鼠脑立体定向仪,JEM-100CX电镜。干预:取SD大鼠90只,将6-OHDA立体定向微量注射于左侧黑质区及黑质纹状体通路,观察大鼠行为及黑质细胞形态学变化。主要观察指标:旋转行为,免疫组织化学观察多巴胺能神经元数量,电镜观察多巴胺能神经元形态改变。结果:90只大鼠中经阿朴吗啡诱导后有64只(占71%)恒定转向右侧且结果稳定,旋转圈数30min>210r,被视为成功大鼠模型;免疫组化观察发现注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧明显减少,电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变。结论:应用本方法可较快建立稳定的成功率较高的大鼠模型,但在病理和行为学等方面同自然患者仍有较多差异。

大鼠黑质损毁后多巴胺能神经元形态及纹状体c-fos表达的变化

目的:观察毁损黑质后,多巴胺(DA)能神经元形态学变化和纹状体内相关神经元c-fos表达情况,探讨c-fos表达与毁损程度的关系。方法:利用6羟多巴胺(6OHDA)特异毁损大鼠黑质DA能神经元,采用阿朴吗啡(APO)诱导旋转实验观察术后1、7、14和21d行为学变化;利用HE染色、Nissl染色、免疫组织化学方法和电镜,观察各时间点黑质DA能神经元形态学变化和纹状体c-fos表达。结果:毁损侧DA能神经元逐渐减少,超微结构损伤逐渐加重;DA神经元丢失比例≥80%时,纹状体毁损侧c-fos表达上调,APO诱导的旋转实验>7r/min。结论:黑质DA能神经元丢失是毁损大鼠行为改变的病理学基础;cfos的表达与DA能神经元的毁损程度、行为改变有一定的关系。

可卡因对6-羟基多巴胺所致大脑单侧黑质纹状体系统损伤的大白鼠的旋转行为的影响

本实验观察了Holtzman种系雌性大白鼠34只。以6-OHDA制备单侧大脑黑质纹状体系统损伤的旋转行为模式。在特殊的和自动的球形旋转仪中共进行3次行为观察。以伤侧多巴胺的耗竭率在85％以上,以及具有优势地同侧性的旋转行为的实验动物的实验数据作为分析和讨论的依据。34只雌性大白鼠均符合上述条件。本实验所观察到的盐酸可卡因对动物的旋转行为的影响,其主要结果如下: 可卡因可使实验动物引起刻板的同侧性的旋转行为,其作用迅速。不同剂量的可卡因对动物的旋转行为有不同的影响。 单冷注射可卡因对动物的旋转行为能明显地引起长的至少持续一个星期的促进作用。这就提示,对脑和行为具有持久作用的心理运动的兴奋药,没有必要反复给药。

6-羟基多巴胺对帕金森病大鼠GDNF表达影响的实验研究

目的 :研究 6 -羟基多巴胺 (6 - OHDA)诱发的大鼠帕金森 (PD)模型 GNDF表达。方法 :通过脑内立体定向术注射 6 -羟基多巴胺建立大鼠 PD模型。采用免疫组化的方法观察损伤侧脑胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)表达。结果 :6 - OHDA诱发的 PD鼠 GDNF蛋白表达减低 (P <0 . 0 5 )。结论 :神经营养因子表达减少可能是 6 - OHDA诱发的