五没食子酰葡萄糖靶向补体分子C1qa修复糖尿病小鼠主动脉内皮损伤的机制研究

糖尿病常伴随血管内皮损伤,显著加速血管病理进程,但其分子机制尚未阐明。已有报道证实,特殊的补体分子在血管损伤中扮演重要角色。该实验室既往研究发现,补体分子C1qa(Component 1,q Subcomponent,A chain)在糖尿病小鼠主动脉内皮层高表达,并且表达量随着心血管疾病的发展而增多。因此,该研究利用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导糖尿病小鼠模型,并研究了C1qa分子的食源性抑制剂,即五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose,PGG)对糖尿病血管内皮的修复作用。结果表明,外源C1qa刺激会显著增加血管内皮的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,同时降低主动脉内皮依赖性舒张功能。相似地,糖尿病模型中,血管内皮C1qa的高含量伴随着ROS的过量合成,主动脉血管段的内皮依赖性舒张显著降低。而PGG灌胃3周后,糖尿病小鼠血糖下降至15.36 mmol/L,主动脉内皮C1qa表达量显著降低,ROS生成量减少了52.41%,血管内皮舒张率由47.06%升到68.41%。同时,NADPH氧化酶(NOX_(2)/NOX_(4))通路表达下调,提示ROS生成的关键通路被抑制,血管内皮氧化应激损伤显著减轻。因此,活性分子PGG靶向抑制C1qa,有利于修复糖尿病小鼠主动脉内皮损伤。

磁性分子印迹聚合物的制备及其对1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的吸附性能

采用沉淀聚合法,以Fe_(3)O_(4)纳米颗粒为载体,1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖(PGG)为模板分子,丙烯酰胺(AM)为功能单体,制备了PGG磁性分子印迹聚合物(MIPS)和磁性非印迹聚合物(NIPS,不加PGG),表征了其形貌和结构,并考察了其对PGG的吸附性能。SEM、TEM、FT-IR和XRD分析结果表明:MIPS是以Fe_(3)O_(4)为核心的外层包有SiO_(2),表面密布孔穴的球形纳米颗粒。磁学性质分析发现:MIPS具有良好的顺磁性,在外加磁场下能够实现分离。吸附性能研究结果表明:MIPS对PGG的吸附能力明显强于NIPS,MIPS对PGG的吸附过程比较符合Langmuir等温吸附模型,最大吸附量为67.02 mg/g,MIPS对PGG的吸附过程非常符合准二级动力学模型。在MIPS的重复利用性能实验中,其吸附第5次的吸附量为53.16 mg/g,仍能达到第1次使用时的吸附量的83.78%,表明MIPS的重复使用性能较好。

6-O-,3,6-二-O-,3,4,6-三-O-没食子酰-D-葡萄糖的合成研究(英文)

从没食子酸衍生物和葡萄糖出发 ,采用了基团选择性保护、酯化、钯碳催化脱苄基和控制酸水解等步骤 ,合成了三种没食子单宁化合物 (6 -O - ,3,6 -二 -O - ,3,4 ,6 -三 -O -没食子酰 -D -葡萄糖 )以及三种基于呋喃葡萄糖环的没食子单宁结构类似物 [6 -O - ,3,6 -二 -O - ,3,4 ,6 -三 -O -没食子酰 - (1,2 -O -异丙叉基 ) -α-D -呋喃葡萄糖。基于薄层色谱、核磁氢谱和元素分析 。

1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖靶向NFKB2的分子对接研究

目的:1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖是否可与NFKB2形成良好的分子对接,形成稳定的相互作用。方法:使用Auto Dock软件计算NFKB2与PGG的结合模式和亲和力。结果:PGG与受体NFKB2具有较好的对接,可形成稳定的相互作用,极性相互作用及氢键是主要的相互作用类型。结论:PGG很有可能通过NFKB2发挥作用,NFKB2很有可能是PGG的作用靶点。

五没食子酰葡萄糖拮抗内毒素的体内研究

目的观察五没食子酰葡萄糖对内毒素的体内拮抗作用。方法动态浊度法测定五没食子酰葡萄糖对小鼠内毒素血症的影响。观察大鼠内毒素攻击后,五没食子酰葡萄糖对外周血内毒素的中和作用及对肿瘤坏死因子-α释放的抑制作用。最后观察了五没食子酰葡萄糖对致死量内毒素攻击小鼠的保护效果。结果在小鼠体内五没食子酰葡萄糖具有较强的内毒素中和作用,两者之间具有明确的量效关系。五没食子酰葡萄糖可明显降低内毒素攻击大鼠血浆内毒素和肿瘤坏死因子-α水平,且对肿瘤坏死因子-α的抑制作用与内毒素变化密切相关。五没食子酰葡萄糖能够明显延迟动物的死亡时间,显著降低死亡率。结论五没食子酰葡萄糖可能通过对内毒素的结合及中和作用,在体内发挥拮抗内毒素作用。

五没食子酰葡萄糖(PGG)诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的:探讨五没食子酰葡萄糖(PGG)诱导鼻咽癌细胞的凋亡作用。方法:PGG孵育人鼻咽癌5-8F细胞株48h后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态;PGG孵育人鼻咽癌5-8F细胞株24h后,采用流式细胞仪分析细胞早期凋亡。结果:25,50和75μmol/L PGG孵育5-8F细胞48h后,贴壁活细胞减少,漂浮死亡细胞增多。PGG孵育24h后,细胞早期凋亡率分别为(4.00±0.56)%、(6.97±0.25)%和(10.23±0.71)%,与对照组(1.53±0.15)%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PGG具有诱导鼻咽癌细胞凋亡的生物学作用。

3-O-没食子酰-D-葡萄糖的合成(英文)

在概括了没食子单宁类化合物生理活性的基础上 ,作为没食子单宁人工合成的探索 ,从没食子酸和D -葡萄糖出发 ,合成了 3-O -没食子酰 -D -葡萄糖。其中没食子酸的酚羟基通过苄基化得以保护 ,随后在 10 %Pd -C的催化作用下除去苄基 ,葡萄糖中的四个羟基 (1,2 ,4 ,6 - )通过异丙叉化得以隐蔽 ,而在酸催化水解作用下被还原。基于薄层色谱和核磁氢谱及碳谱的分析 ,确定了中间体化合物 3-O -没食子酰 - (1,2 :5 ,6 -二 -O -异丙叉 )-α-D -呋喃葡萄糖与 3-O -没食子酰 -D -葡萄糖的结构。

五没食子酰葡萄糖锗的合成及其体外抗肿瘤活性

以单宁酸为原料,通过甲醇醋酸溶液降解、乙酸乙酯萃取、葡聚糖凝胶色谱柱纯化,制得1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖(PGG),得率为18%,经HPLC分析纯度为99.90%。采用FT-IR、~1H-NMR、^(13)C-NMR及ESI-MS等分析手段对PGG的结构进行了表征。利用PGG与锗离子在溶液中进行络合反应,反应液经冷冻沉淀、离心、冷冻干燥得到PGG-Ge络合物,采用FT-IR对络合物的结构进行了表征。采用CCK8法研究了PGG-Ge络合物对人结肠癌细胞HCT116、人宫颈癌细胞Hela、人胰腺癌细胞Bx PC3、人小细胞肺癌细胞A549、人胃癌细胞SGC7901及人乳腺癌细胞MCF7增殖的影响。结果表明:PGG-Ge络合物对6种肿瘤细胞的增殖均具有明显的抑制作用,且随着浓度的增加,抑制作用也逐渐增强。当浓度达到160μg/m L时,对6种肿瘤细胞增殖的抑制率均达到了80%左右。而相同浓度下对照品顺铂对受试肿瘤细胞增殖的抑制率只有4.30%～18.54%。PGG-Ge络合物对各肿瘤细胞增殖的IC_(50)值均小于90μg/m L,表现出良好的抗肿瘤活性。

南湖菱壳中五没食子酰葡萄糖提取工艺及其抗肿瘤活性研究

为明确菱壳中五没食子酰葡萄糖的最佳提取工艺条件,在单因素试验的基础上采用响应面法,以提取率为评价指标研究提取工艺,并采用CCK8法对最优单因素和最佳提取工艺条件下的提取物进行了抗SK-BR-3肿瘤细胞增殖的研究。结果表明,影响提取率的因素依次为提取温度>乙醇浓度>超声时间,乙醇浓度和提取温度的交互作用最强,对提取率的影响最为显著;最佳的提取工艺为料液比1g∶20mL,乙醇浓度67%,提取温度80℃,超声时间10min,预测提取率为0.6742%,实际提取率为0.6755%,结果相符。各部分提取物对SK-BR-3乳腺癌细胞增殖具有显著的抑制作用,并且呈现一定的时间和浓度依赖性。在浓度为100μg/mL时,各部分提取物对受试细胞具有极显著的抑制增殖作用(P<0.01)。

β-五没食子酰葡萄糖对胰腺癌细胞糖酵解及增殖的影响

目的研究β-五没食子酰葡萄糖(β-PGG)对人胰腺癌细胞糖酵解途径的影响及细胞生长的调节潜能。方法用不同浓度的β-PGG(0、5、25、50、100μmol/L)处理人胰腺癌MiaPaCa-2细胞,采用CCK-8法检测β-PGG对人胰腺癌MiaPaCa-2细胞的增殖作用,细胞化学试剂盒检测糖酵解的产物乳酸的生成,蛋白印迹法检测糖酵解的上游调节子缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)以及糖酵解酶己糖激酶-Ⅱ(HK-Ⅱ)和磷酸果糖激酶(PFK)的蛋白表达水平。结果CCK-8结果显示,β-PGG可以抑制人胰腺癌MiaPaCa-2细胞的增殖,其抑制作用呈现出剂量和时间依赖性(P<0.05)。检测细胞上清液的乳酸发现,无论是在常氧或缺氧条件下,β-PGG均能抑制乳酸的生成(P<0.05)。与对照组相比,β-PGG能抑制HIF-1α、GLUT1、HK-Ⅱ和PFK的表达水平,且抑制作用随着β-PGG浓度的增高而增加(P<0.05)。结论β-PGG可以抑制人胰腺癌细胞系MiaPaCa-2的糖酵解与增殖,其抑制作用可能与抑制MiaPaCa-2细胞中HIF-1α、GLUT1、HK-Ⅱ和PFK的蛋白表达有关。

HPLC法测定藏药三果汤中没食子酸、三没食子酰基葡萄糖和五没食子酰基葡萄糖的含量

目的:建立同时测定藏药三果汤中3种成分含量的HPLC法。方法:采用高效液相色谱法测定余甘子中没食子酸(Gallica acid,GA)、1,3,6-O-三没食子酰基葡萄糖(1,3,6-tri-O-galloyl-β-D-glucose,TGG)和1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-O-galloyl-D-glucose,PGG)的含量。色谱柱为Agilent Zorbax C18键合硅胶柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。结果:GA、TGG和PGG分别在0.3910~3.9100 mg/mL(r=1,n=6),0.1300~1.300 mg/mL(r=0.9998,n=6),0.0710~0.7100 mg/mL(r=0.9999,n=6)范围内呈良好的线性关系,加样回收率均符合含量测定要求。结论:该方法简便、准确,可以用于藏药三果汤中GA、TGG和PGG成分的含量测定。可为三果汤中相关成分的质控提供一定理论参考。

三没食子酰吡喃葡糖作用于gp41抑制HIV与靶细胞的融合

目的检测来源于蛇菰科植物日本蛇菰中的单体化合物三没食子酰吡喃葡萄糖(TGGP)抑制HIV与靶细胞融合的活性,并探讨其作用靶点。方法用萃取和柱层析方法分离提纯TGGP,用酶联免疫测定法、天然聚丙烯酰胺凝胶电泳、分子排阻高效液相色谱法检测其抑制HIVgp41六螺旋束结构形成的作用,用细胞-细胞融合方法检测TGGP抑制HIV进入靶细胞的活性。结果酶联免疫测定法表明TGGP能有效地抑制gp41六螺旋束结构的形成,其半数抑制浓度(IC50)为(1.37±0.19)μg·ml-1。进一步用生物物理方法直观地确证了TGGP抑制gp41六螺旋束结构形成的作用。在生物学活性方面,50μg·ml-1的TGGP能有效地抑制HIV包膜糖蛋白介导的细胞-细胞融合。结论HIV进入靶细胞的过程由跨膜糖蛋白亚基gp41介导。三没食子酰吡喃葡糖(TGGP)能作用于gp41,抑制HIV与靶细胞的融合。该化合物可望作为阴道外用杀微生物剂,预防HIV的性传播。

1,2,3,4,6-O-五没食子酰基葡萄糖对MPP^+诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的考察1,2,3,4,6-O-五没食子酰基葡萄糖(1,2,3,4,6-penta-O-galloyl-β-D-glucose,β-PGG)对MPP+诱导的帕金森病细胞模型中PC12细胞凋亡的保护作用及其机制研究。方法 PC12细胞孵育于高糖DMEM培养基中,在药物处理前1周,将神经生长因子(NGF)加入培养基中,使培养基中NGF的终质量浓度为50 ng/m L。将细胞分为对照组、MPP+组以及50μmol/Lβ-PGG预处理7、12、20、30 h组,观察预处理不同时间对MPP+中PC12细胞存活影响。采用台盼蓝染色法检测细胞死亡情况,MTT法检测细胞活力,免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、Fas、Fas L、procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9蛋白表达情况,并检测caspase-3、caspase-8、caspase-9活力。结果对照组PC12细胞死亡率最低,MPP+组PC12细胞死亡率最高,从β-PGG预处理12 h起PC12细胞死亡率较MPP+组均明显降低(P<0.01)。MPP+组PC12细胞活力最低,50μmol/Lβ-PGG预处理12 h时PC12细胞活力进一步增高,预处理20 h时细胞活力最高。β-PGG预处理5 h后即可见Bcl-2、procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9蛋白含量增加,至15 h时增加达到高峰;与之相反的是,β-PGG预处理5 h后即可见Bax、Fas、Fas L蛋白含量减少,至30 h时达最少。50μmol/Lβ-PGG预处理PC12细胞15 h后caspase-3、caspase-8、caspase-9的活力分别为MPP+组的36.5%、40.2%、42.2%。结论β-PGG对MPP+诱导PC12细胞凋亡具有保护作用,其机制是通过增强Bcl-2的表达、抑制Bax、Fas、Fas L的表达以及降低caspase-3、caspase-8、caspase-9的活力实现了抑制MPP+引起的PC12细胞凋亡,促进PC12细胞的存活。

固相萃取结合高效液相制备茶树没食子酸衍生物

没食子酸衍生物是茶树酚酸中的主要成分,是茶汤中重要的鲜味增强剂,具有抗过敏、抗抑郁和增强认知能力等作用。利用固相萃取(solid-phase extraction,SPE)结合制备高效液相色谱(preparative highperformance liquid chromatography,PHPLC),从茶树鲜叶中分离制备出高纯度的3-O-没食子酰奎尼酸和β-D-没食子酰葡萄糖,并利用LC/TOF-ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR对它们的结构进行了鉴定。该方法操作简单、纯化效果好。

石榴果实没食子酸及其合成相关物质HPLC测定体系优化

建立了‘泰山三白甜’石榴果实不同部位没食子酸及其合成相关物质的高效液相色谱（HPLC）定性和定量检测方法。色谱条件：色谱柱为Agilent Zorbax XDB-C18（4.6 mm×150 mm,5μm）,没食子酸以乙腈-2%冰乙酸水溶液为流动相（20∶80）,检测波长270 nm;莽草酸和3-脱氢莽草酸以甲醇-1%磷酸水溶液（5∶95）为流动相,检测波长214 nm;五没食子酰葡萄糖以乙腈-0.5%磷酸水溶液（20∶80）为流动相,检测波长275 nm,4种物质均等度洗脱,流速均为0.8 m L/min,柱温均为30℃。结果表明,4种物质在一定线性范围内的峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99,检测限为0.12-0.24 mg/L;加标回收率为98.9%-102.5%,相对标准偏差（RSD）为1.2%-2.2%。‘泰山三白甜’石榴果实不同部位没食子酸、莽草酸、3-脱氢莽草酸和五没食子酰葡萄糖含量存在显著差异,果皮中含量最高,果汁次之,种子中最低。该方法操作简单,灵敏度高,重复性好,可用于没食子酸及其合成相关物质的快速鉴定及含量测定。

1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的骨保护作用与Nrf2/HO-1信号通路的相关性研究

研究1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-pentyl-O-galloyl-beta-D-glucose, PGG)骨保护作用及其抗成骨细胞凋亡相关机制。建立泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型,钙黄绿素染色观察PGG对斑马鱼骨骼面积的影响。体外培养骨髓间充质干细胞,茜素红染色观察钙化结节数目, qRT-PCR法检测成骨细胞分化相关指标Runt相关转录因子2 (Runt-related transcription factor 2, Runx 2)和骨钙蛋白(osteocalcin, OCN)的mRNA水平;体外培养前成骨细胞系MC3T3-E1,过氧化氢(400μmol·L^-1)建立氧化应激模型,观察在该模型下PGG对成骨细胞的作用。采用MTT法检测PGG对成骨细胞活力的影响;Hoechst 33342染色观察PGG对细胞凋亡的作用;Western blot检测PGG对抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax、核因子E2相关因子2 (nuclear factor erythroid-2-related factor 2, Nrf2)及下游蛋白血红素氧合酶-1 (heme oxygenase-1, HO-1)的表达;DCFH-DA荧光染色检测细胞内的活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;JC-1荧光染色检测线粒体膜电位水平。结果显示,与模型组相比, PGG可以显著提高斑马鱼模型椎骨面积;成骨细胞分化第14天时,与空白组相比, PGG组钙化结节数目显著增多, Runx 2、OCN的mRNA水平显著提高;此外,在氧化应激环境下, PGG可以提高成骨细胞活力,显著减少凋亡细胞数,提高Bcl-2/Bax的比率;荧光染色结果显示, PGG降低细胞内ROS荧光密度,提高线粒体膜电位。Western blot实验数据显示, PGG可以促进核内Nrf2蛋白表达,并增强下游蛋白HO-1的表达。综上, PGG可改善斑马鱼骨质疏松,且该作用可能与调控Nrf2/HO-1信号通路改善线粒体功能障碍,抗氧化应激环境下成骨细胞凋亡从而促进骨形成有关。本研究为抗骨质疏松治疗药物的发现提供新的思路与线索。

HPLC测定牡丹皮中的三没食子酰葡萄糖和五没食子酰葡萄糖

目的采用HPLC法测定牡丹皮中三没食子酰葡萄糖和五没食子酰葡萄糖的含量。方法采用Agilent TC-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速0.8 m L·min^(-1),检测波长274 nm,柱温25℃,进样量10μL。结果三没食子酰葡萄糖0.068~0.680μg(r=0.9994)、五没食子酰葡萄糖0.604~6.040μg(r=0.9997)与峰面积呈良好的线性关系,二者的平均加样回收率分别为99.31%、99.11%,RSD分别为1.48%、1.22%(n=9)。结论所用方法简便、准确、稳定、灵敏度高,可用于牡丹皮药材的质量控制。

β-PGG及没食子酸在不同pH条件下含量分析

目的研究并分析1,2,3,4,6-五-O-没食子酰-β-D-葡萄糖(β-PGG)在不同p H磷酸盐缓冲液中的含量变化情况。方法:采用经典恒温法考察β-PGG在不同p H缓冲液(p H分别为2、3、4、5、6)中的水解情况,用反相高效液相色谱测定β-PGG及其水解产物含量并进行分析。结果β-PGG随着p H值的上升其含量呈现下降的趋势,p H为5时含量最低,没食子酸的含量呈现上升的趋势。结论β-PGG及没食子酸在不同的p H条件下含量的变化提示反映了酸碱度对β-PGG水解反应的影响,对该现象的研究可为中药的养护、储存及加工等实际应用提供一定参考。

HPLC测定复方昆丹胶囊中芍药内酯苷、芍药苷、二苯乙烯苷、五没食子酰葡萄糖

目的:建立昆丹胶囊中芍药内酯苷、芍药苷、二苯乙烯苷、五没食子酰葡萄糖的含量测定方法。方法:采用Agilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-甲醇-0.1%磷酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长230 nm,柱温30℃,流速1.0 mL.min-1。结果:芍药内酯苷、芍药苷、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷及五没食子酰葡萄糖浓度分别在0.02～1.84,0.03～1.65,0.03～3.44,0.01～0.81 mg(r>0.999 9)线性关系良好。低、中、高3个浓度的平均加样回收率分别为99.5%～102.6%(RSD 1.3%～2.1%),98.5%～103.5%(RSD 0.5%～2.4%),98.3%～104.2%(RSD 0.5%～2.2%)。结论:方法准确,灵敏,能有效测定昆丹胶囊中芍药内酯苷、芍药苷、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷及五没食子酰葡萄糖成分的含量。

五没食子酰葡萄糖拮抗内毒素／脂多糖作用的体外研究

目的观察五没食子酰葡萄糖(PGG)对内毒素/脂多糖(LPS)的体外拮抗作用. 方法应用生物传感技术测定PGG与脂质A(lipid A)的亲和力,动态浊度法测定PGG对LPS的中和作用.分离培养人外周血单核细胞(PBMC),观察不同浓度的PGG对LPS刺激下人PBMC 释放肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)6的影响. 结果不同浓度的PGG与脂质A发生结合反应,其反应的速率随浓度的增高而增快,二者的解离常数(Kd)值为5.2×10-7 mol/L.PGG对LPS具有较强的中和作用.PGG在20 mg/L以上的浓度时能够显著抑制LPS刺激下TNF-α和IL-6的释放,此时其TNF-α和IL-6水平分别从(1 788±171)、(1 966±232) ng/L降至(958±234)、(1 351±99) ng/L(P<0.05),该作用具有一定的剂量效应关系. 结论 PGG可通过对LPS的结合及中和作用,在体外发挥拮抗LPS的作用.