非洲猪瘟病毒B646L基因序列分析及p72蛋白质结构与细胞抗原表位预测

为探究非洲猪瘟病毒B646L基因序列的碱基组成特点,及预测该基因所编码的p72蛋白质结构与细胞抗原表位,利用PCR技术对非洲猪瘟病毒B646L基因ORF框的序列进行扩增、测序及碱基组成分析;运用软件EXPASY、PRABI与SWISS-MODEL对p72蛋白质进行理化性质分析及二、三级结构预测;运用在线软件ABCpred Prediction、Scratch、IEDB和NetCTL对p72蛋白在B、T细胞的抗原表位进行预测。结果表明,非洲猪瘟病毒B646L基因ORF框序列全长为1941 bp,其中,碱基A含量为26.9%,T含量为28.9%,G含量为24.2%及C含量为20.0%,A+T的含量为55.8%,G+C的含量为44.2%,AT含量显著高于GC含量;该序列共编码646个氨基酸,p72蛋白大小为76 ku;在整个p72蛋白分子的二、三级结构中,α-螺旋占19.35%,β-转角占5.42%,无规卷曲占50.15%,扩展链为25.08%,以无规卷曲为主要结构;该蛋白存在细胞质的概率最大,其次是细胞核,存在于线粒体、高尔基体和内质网的概率较低;p72蛋白B淋巴细胞优势抗原表位分别为12~18 aa、27~37 aa、45~55 aa、77~88 aa、110~120 aa;T淋巴细胞优势抗原表位分别为203~212 aa、298~307 aa、520~531 aa。说明非洲猪瘟病毒B646L基因ORF框序列呈明显AT偏好性;p72蛋白为一亲水性蛋白,其高级结构主要以无规卷曲为主,且具有B、T淋巴细胞优势抗原表位,是检测试剂和疫苗研发的理想靶标。

非洲猪瘟病毒B646L和F778R双基因PCR检测方法的构建

为建立一种能够快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的普通PCR方法,本研究分别以ASFV B646L和F778R基因为靶序列设计了两对特异性引物,建立ASFV B646L和F778R双基因普通PCR方法,并对其特异性、灵敏性及重复性进行检测。结果显示:该PCR体系(25.0μL体系)的最优组合为Pfu酶0.2μL、10×Reaction Buffer 2.5μL、2.5 mmol/L d NTP Mixture 2.5μL、B646L上下游引物各1.5μL、F778R上下游引物各0.5μL、DNA模板1.0μL;退火温度为57℃、退火时间为30 s、72℃延伸2.5 min,30个循环。该方法仅针对ASFV B646L和F778R基因进行特异性扩增,无交叉反应。同时对B646L和F778R阳性质粒的最低检测下限分别为7.2×10^(7)copies/μL、1.5×10^(6)copies/μL,试验重复性良好。本研究对于提高ASFV临床诊断的准确性、特异性和高效性具有重要价值,为其快速检测提供了可靠的技术支撑。

微小RNA-646对胶质母细胞瘤细胞系U251增殖和转移的影响

目的探讨微小RNA-646(miR-646)对胶质母细胞瘤细胞系U251增殖和转移的影响及机制。方法2014年1月至2016年1月,从成都市第六人民医院采集14对神经胶质瘤病人肿瘤组织样本和相邻的非肿瘤样本,并于2018年5月至2019年5月,体外培养正常星形胶质细胞HNAs和人胶质母细胞瘤细胞系SHG44、A172和U251,实时荧光定量PCR检测miR-646在胶质瘤组织、胶质瘤细胞SHG44、A172和U251中的表达。将体外培养的U251细胞分为模拟物对照组、miR-646模拟物组、抑制剂对照组、miR-646抑制剂组、miR-646模拟物+叉头框K1过表达质粒(pcDNA-FOXK1)组和miR-646模拟物+pcDNA组,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-646表达,检测细胞增殖、侵袭和迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中叉头框K1(FOXK1)和上皮间质转化相关蛋白表达。双萤光素酶报告基因实验检测miR-646与FOXK1的靶向关系。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中miR-646表达水平(0.36±0.03比1.00±0.06)显著降低(P<0.05);与正常星形胶质细胞相比,胶质瘤细胞SHG44、A172和U251中miR-646表达水平(0.54±0.04、0.63±0.06、0.38±0.04比1.00±0.08)显著降低(P<0.05)。与模拟物对照组相比,转染miR-646模拟物可明显上调U251细胞中miR-646表达(5.28±0.53比1.00±0.11)和上皮钙黏素(E-cadherin)蛋白水平,减弱细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力,抑制FOXK1(0.28±0.03比0.51±0.04)、神经钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达(P<0.05);与抑制剂对照组相比,转染miR-646抑制剂可得到与miR-646模拟物处理相反的结果(P<0.05);与miR-646模拟物+pcDNA相比,miR-646模拟物+pcDNA-FOXK1组可明显提高U251细胞的增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力(P<0.05)。结论miR-646可抑制U251细胞增殖和转移,其作用机制可能与靶向调控FOXK1表达有关。

C646靶向KAT3b通过Survivin乙酰化调控食管癌侵袭和迁移

目的探讨乙酰基转移酶抑制剂C646靶向KAT3b通过Survivin蛋白乙酰化影响食管癌细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)、迁移和侵袭的机制。方法体外培养食管癌TE-1细胞,MTT法筛选C646最佳给药浓度;C646处理TE-1细胞为实验组(C646组),DMSO处理TE-1细胞为对照组(DMSO组);实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测KAT3b mRN表达量;免疫共沉淀法检测Survivin蛋白乙酰化;Western blot法检测KAT3b及EMT相关蛋白表达;MTT法检测细胞存活能力,细胞划痕实验观察迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力。结果C646组中KAT3b mRNA和蛋白表达量下降,且Survivin蛋白乙酰化水平下降;C646组中E-cadherin蛋白表达上调,而N-cadherin、Snail和Slug蛋白表达下降。C646组中食管癌TE-1细胞存活、迁移和侵袭能力显著下降。结论C646可能通过下调KAT3b的表达降低Survivin蛋白乙酰化水平,进而抑制食管癌细胞EMT、存活及迁移侵袭能力。

miR-646 抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移的机制初探

目的探讨mi R-646对骨肉瘤细胞增殖和迁移的抑制作用。方法通过MTT实验检测mi R-646过表达或受到抑制后对U2OS细胞增殖的影响。Transwell实验分析mi R-646过表达或受到抑制后对U2OS细胞迁移的影响。MIRDB预测mi R-646与表皮生长因子受体(EGFR)的位点结合后,利用荧光素酶报告及实验检测mi R-646对EGFR的靶向作用,并通过Western blotting检测mi R-646对EGFR通路的作用。结果 MTT结果表明,转染mi R-646后U2OS细胞的增殖受到了显著地抑制,24 h时抑制率为21.76%±1.05%,相反,当mi R-646受到抑制后U2OS细胞的增殖得到了促进,24 h时促进的比率为18.89%±0.81%。Transwell实验发现mi R-646可以抑制骨肉瘤细胞系U2OS的迁移能力。随后MIRDB预测发现mi R-646与EGFR的3’UTR区域具有结合位点,荧光素酶报告基因实验证明了mi R-646可以直接作用于EGFR。Western blotting结果证明mi R-646对U2OS细胞增殖迁移能力的抑制在一定程度上是通过mi R-646对EGFR通路的抑制实现的。结论 mi R-646可以通过抑制EGFR通路的活性,进而抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移功能。

蒺藜皂苷通过调控lncRNA AGAP2⁃AS1/miR⁃646表达抑制结肠癌细胞的增殖和诱导细胞凋亡

目的探讨蒺藜皂苷对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法实验设置对照组,蒺藜皂苷低、中、高剂量组,pcDNA组,pcDNA⁃AGAP2⁃AS1组,si⁃NC组,si⁃AGAP2⁃AS1组,miR⁃NC组,miR⁃646组,蒺藜皂苷+pcDNA组和蒺藜皂苷+pcDNA⁃AGAP2⁃AS1组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1 A(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病⁃2(Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X(Bax)的蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)检测ln⁃cRNA AGAP2⁃AS1和miR⁃646的表达;荧光素酶报告实验检测lncRNA AGAP2⁃AS1和miR⁃646的靶向关系。结果不同浓度蒺藜皂苷处理结肠癌HCT116细胞后,细胞增殖抑制率升高,细胞凋亡率升高,CyclinD1、Bcl⁃2蛋白表达降低,p21、Bax表达升高,lncRNA AGAP2⁃AS1表达降低,miR⁃646表达升高,并呈浓度依赖性(P<0.05)。lncRNA AGAP2⁃AS1靶向调控miR⁃646,抑制lncRNA AGAP2⁃AS1表达或过表达miR⁃646可抑制结肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。蒺藜皂苷处理的同时过表达lncRNA AGAP2⁃AS1,增殖抑制率降低,细胞凋亡率降低,CyclinD1、Bcl⁃2蛋白表达升高,p21、Bax表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可通过调控lncRNA AGAP2⁃AS1/miR⁃646表达抑制结肠癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡。

转基因杂交抗虫棉邯棉646的选育

邯棉646是以高产、优质品系邯4104为母本,高产、优质、抗虫品系邯郸109后代为父本杂交选育而成。该品种抗棉铃虫、高产、优质、杂种优势强,适宜在黄河流域棉区麦套种植。

抗病优质机采棉品种——冀棉646

介绍了抗病优质机采棉冀棉646的选育过程、特征特性和栽培技术要点。

奇果菌素调控miR-646/ADAM17通路对白血病细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨奇果菌素(Gri)对白血病细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养白血病K562细胞,经不同浓度的Gri处理细胞后,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法测定Gri对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Gri对微小RNA-646(miR-646)与解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)表达的影响;双荧光素酶报告基因检测miR-646与ADAM17的靶向作用关系;观察miR-646过表达或干扰ADAM17表达对细胞增殖及凋亡的影响,以及抑制miR-646表达后细胞抑制率及凋亡率的变化;Western blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、p21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果Gri呈剂量依赖性抑制K562细胞增殖(P<0.05),细胞凋亡率随着药物浓度的增加而显著增高(P<0.05),促进miR-646、p21、Bax表达(P<0.05),抑制ADAM17、CyclinD1、Bcl-2表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-646可负性调控ADAM17的表达;miR-646过表达或干扰ADAM17表达后可显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制miR-646表达可逆转Gri对细胞增殖、凋亡的作用。结论奇果菌素可通过调控miR-646/ADAM17通路抑制细胞增殖及促进其凋亡从而发挥抗白血病作用。

钾肥施用方式对转基因杂交棉邯棉646产量的影响

以转基因抗病虫杂交棉花品种邯棉646为试验材料,设氯化钾施用方式不施钾肥(CK)、全部基施25.0 kg/hm2、全部基施25.0 kg/hm2+后期叶面喷施0.3%磷酸二氢钾溶液、基施12.5 kg/hm2+花铃期追施12.5 kg/hm2、基施12.5 kg/hm2+花铃期追施12.5 kg/hm2+后期叶面喷施0.3%磷酸二氢钾溶液5个处理,研究了钾肥相同施用量条件下不同施用方式(全部基施,基施和花铃期追施各占50%)对杂交棉邯棉646产量的影响,以探索实现杂交棉高产的钾肥最佳施用方式。结果表明:在钾肥施用量25.0 kg/hm2条件下,基施和花铃期追施各占50%施肥方式的施肥效果明显优于一次性基施,其中,基施12.5 kg/hm2+花铃期追施12.5 kg/hm2+后期叶面喷施0.3%磷酸二氢钾溶液施肥方式的效果最好,棉花红叶茎枯病发病株率最低,总铃数、单铃重和产量均最高,但与基施12.5 kg/hm2+花铃期追施12.5 kg/hm2施肥方式的指标差异均不显著,在分2次施肥条件下棉花后期叶面喷施钾肥对产量性状和产量影响不大。杂交棉邯棉646的钾肥(氯化钾)最佳施肥方式为基施12.5 kg/hm2+花铃期追施12.5 kg/hm2。

磷肥施用量对转基因杂交棉邯棉646红叶茎枯病及产量的影响

为了明确杂交棉高产的磷肥适宜施用量,以转基因杂交棉品种邯棉646为试材,设过磷酸钙施用量0(CK)、210、300、390和480 kg/hm^2计5个处理,研究了磷肥不同施用量对棉花红叶茎枯病发病株率及棉花产量的影响。结果表明:随着磷肥施用量的增加,棉花红叶茎枯病发病株率逐渐下降、产量逐渐提高,其中,磷肥施用量≤390 kg/hm^2时,增施磷肥,棉花红叶茎枯病发病株率显著降低,产量显著提高;继续增施磷肥,棉花红叶茎枯病发病株率略有降低、产量略有提高,与施磷量390 kg/hm^2处理指标差异均不明显。从经济效益角度考虑,认为邯棉646适宜的磷肥施用量为390 kg/hm^2。

对JJG 646-2006《移液器检定规程》存在问题的探讨

JJG 646-2006《移液器检定规程》是移液器检定的主要技术依据,然而规程在检定对象、允许误差、检定装置和检定次数等方面存在诸多问题。结合国际标准ISO 8655等文献详细阐述存在的问题,给出相应解决方案。

邯棉646优化栽培技术

通过品种栽培试验与生产应用结果,结合品种的特性和生育特点,以适当稀植、促早发和控制后期营养生长为栽培要点,进一步优化总结了邯棉646的栽培技术。

两系杂交中稻新组合Y两优646特征特性与高产栽培技术

两系杂交中稻新组合Y两优646具有熟期适宜、株叶形态佳、高产稳产、米质优良、抗性较强、熟相好、生态适应性广等特点。总结了实施精量播种、宽行窄株栽插、精确控苗、精细肥水管理、综合防治病虫害等高产栽培技术。

Y两优646试种表现及高产栽培技术

介绍了两系杂交稻Y两优646的主要特征特性,并从适时播种、合理密植、水肥管理及病虫害防治等方面总结其高产栽培技术措施。

miR-432、miR-646和miR-100在骨肉瘤细胞中的表达

目的:探讨miR-432、miR-646和miR-100在骨肉瘤细胞中的表达及临床意义。方法:选择行根治性切除手术的72例骨肉瘤组织作为研究对象,同时选择38例骨肉瘤旁组织作为对照组。采用RT-qPCR的方法检测各组组织细胞中miR-432、miR-646和miR-100的表达水平与骨肉瘤病人临床病理参数的关系,并分析miR-432、miR-646和miR-100的表达水平之间的相关性。结果:骨肉瘤组的miR-432、miR-646和miR-100的表达水平低于骨肉瘤旁组织(P<0.01)。骨肉瘤组织细胞中miR-432、miR-646和miR-100的表达水平与病人的性别、年龄、肿瘤直径、组织学类型、发病部位和TCNR均无关(P>0.05),而与病人的TNM分期和是否发生肺转移相关,miR-432和miR-100表达量随着TNM分期增加而降低,miR-646表达量Ⅲ期低于Ⅰ期和Ⅱ期,发生肺转移病人miR-432、miR-646和miR-100表达量均低于非肺转移病人(P<0.05~P<0.01)。Pearson相关性分析,miR-432的表达水平与miR-646和miR-100的表达水平正相关(r=0.76和0.79,P<0.05),而肿瘤病人中miR-646的表达水平与miR-100的表达水平呈正相关(r=0.81,P<0.01)。结论:miR-432、miR-646和miR-100在骨肉瘤组织细胞中异常表达,并且与骨肉瘤的发生及发展密切相关,为临床上骨肉瘤的诊断和治疗提供依据。

高产优质抗病杂交油菜新品种南油646的选育

为满足油菜产业可持续发展对品种的需求,2012-2017年用不育系南A6与恢复系46R配制育成双低杂交油菜新品种南油646,2016-2017年全国冬油菜长江上游比较试验中平均产量2 674.35 kg/h异m^2,抗,未(耐检)出病芥、抗酸逆含性量强,硫,综苷合含性量状22优.7良9,μ适m合ol/多g功·能饼开,含发油利量用,4适2.宜63长%江。上该游品区种及高类产似稳生产态性区好种,植双。

miR-646高表达抑制EGFR/Akt通路及肺癌细胞增殖扩散的研究

目的探讨微小RNA(microRNA,miR)-646对EGFR/Akt通路的作用及对肺癌A549细胞增殖扩散的影响及相关的作用机制。方法利用Lipo2000将miR-646转染到肺癌A549细胞中,采用实时荧光定量PCR(real time PCR,RTPCR)法检测转染后各组细胞中miR-646的表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕和Transwell小室分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting法检测EGFR/Akt通路中各蛋白的变化水平。结果 RT-PCR结果显示,转染miR-646组其miR-646表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),A549细胞转染miR-646后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P<0.05);Western blotting结果显示,转染miR-646组中p-EGFR和p-Akt的蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论 miR-646可显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-Akt的蛋白水平,进而抑制细胞的增殖和扩散能力。

抗病丰产优质花生新品种泉花646的选育

泉花646是以泉花114-8为母本,粤油92为父本进行杂交选育而成的花生新品种,具有丰产、高抗青枯病、中抗黄曲霉病、品质优、出仁率高等优点。福建省花生区试其平均荚果产量为3117 kg/hm2,比对照种粤油551-116增产7.81%。该品种于2000通过了福建省农作物品种审定委员会的审定。